天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究北大核心CSCD

目的探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其作用机制。方法 1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT,观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变,Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1si RNA并用TGF-β1刺激细胞,检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果 1.与空白对照组比较,TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化,E-cadherin的m RNA和蛋白表达下调,Fibronectin表达上调;与TGF-β1组相比,天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态,E-cadherin的m RNA和蛋白表达上调,Fibronectin表达下调。2.TGF-β1刺激后,Jagged1、Hey1的表达量随着时间上调,而Notch1表达量无明显变化;天龙咳喘灵提取物可使Notch1、Jagged1、Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 si RNA成功敲除Jagged1基因后,TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。     

天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究

目的探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其作用机制。方法 1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT,观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变,Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1si RNA并用TGF-β1刺激细胞,检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果 1.与空白对照组比较,TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化,E-cadherin的m RNA和蛋白表达下调,Fibronectin表达上调;与TGF-β1组相比,天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态,E-cadherin的m RNA和蛋白表达上调,Fibronectin表达下调。2.TGF-β1刺激后,Jagged1、Hey1的表达量随着时间上调,而Notch1表达量无明显变化;天龙咳喘灵提取物可使Notch1、Jagged1、Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 si RNA成功敲除Jagged1基因后,TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。     

天龙咳喘灵组方加味治疗慢性咳嗽146例

观察天龙咳喘灵组方加味治疗慢性咳嗽的临床疗效.方法:将符合诊断的146例慢性咳嗽患者随机分为治疗组和对照组.治疗组予以天龙咳喘灵组方治疗,对照组予常规西医治疗,对两组病例的综合疗效进行评价.结果:治疗组总有效率88.2%,对照组总有效率75.7%.治疗组疗效明显优于对照组(P<0.05).结论:天龙咳喘灵组方加味治疗慢性咳嗽疗效显著.     

天龙咳喘灵治疗慢性阻塞性肺疾病的物质基础及作用机制的网络药理学研究

以网络药理学的方法探讨天龙咳喘灵治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的药效物质基础和分子作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取天龙咳喘灵的化学成分,并根据Lipinski规则(LR)、口服生物利用度(Oral bioavailability,OB)以及药物相似性(Drug-likeness,DL)对潜在的生物活性成分进行分析鉴定;利用BATMAN-TCM对获得的活性成分进行生物信息学分析。结果从天龙咳喘灵复方中获得1258种化学成分,并根据LR、OB及DL特性筛选出80种潜在有效成分。共得到145条KEGG通路,其中显著富集的KEGG通路有29条。进一步筛选后获得了36条生物过程(BP,biological process)、10条细胞组分(CC,cellular component)、7条分子功能(MF,molecular function)。根据OMIM数据库分析预测出天龙咳喘灵潜在的治疗疾病188个;根据TTD数据库分析预测出天龙咳喘灵潜在治疗作用的疾病30个。结论天龙咳喘灵治疗COPD的作用机制可能是通过影响ADRB2、CACNA1C、ARRB2、ADRA1A、ADRA1B、ADRA1C、HTR2A、HTR2B、HTR2C和CHRM2等靶点,调控MAPK信号通路、趋化因子信号通路、TRP通道的炎症介质调节、血管平滑肌收缩通路及PI3K-Akt信号通路。     

芪仙汤提取物抑制哮喘气道上皮间质转化的研究

目的以16 HBE人支气管上皮细胞株为研究对象,通过体外研究探讨芪仙汤提取物对哮喘气道上皮间质转化的影响。方法将16HBE细胞加入不同浓度的H_2O_2及芪仙汤提取物干预不同时间。观察细胞形态改变; CCK-8检测H_2O_2对16HBE细胞活力的影响; RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA基因表达水平; Western blot检测E-cadherin、α-SMA蛋白表达水平;免疫荧光检测E-cadherin,α-SMA蛋白表达水平及蛋白定位。结果 H_2O_2作用后细胞形态呈EMT改变,而芪仙汤提取物可逆转细胞EMT改变;CCK-8结果显示,H_2O_2作用后气道上皮细胞存活率随浓度增加而降低(P0.01),芪仙汤提取物可以减少H_2O_2诱导的气道上皮细胞损伤(P0.01)。RT-PCR检测结果示,H_2O_2刺激后气道上皮细胞E-cadherin mRNA水平显著降低(P0.01),α-SMA mRNA水平增高(P0.05),芪仙汤提取物作用后可以逆转H_2O_2诱导的E-cadherin转录水平降低(P0.05),抑制H_2O_2诱导的α-SMA mRNA表达水平增加(P0.05)。Western blot及免疫荧光检测结果示E-cadherin、α-SMA蛋白表达水平与基因表达水平相一致(P0.05)。结论芪仙汤提取物可以减少氧化应激诱导的气道上皮细胞损伤及气道上皮间质转化。     

天龙咳喘灵胶囊防治小儿反复呼吸道感染的临床观察

目的观察天龙咳喘灵胶囊辅助治疗小儿反复呼吸道感染的临床疗效。方法将反复呼吸道感染患儿80例随机分为治疗组、对照组各40例,均采用抗感染、对症等常规治疗。试验组在此基础上加服天龙咳喘灵胶囊。结果试验组在发热、咳嗽、肺部啰音等消失时间均较对照组缩短,统计学上有差异。试验组总有效率82.05%,对照组45.95%,两者有显著性差异（P〈0.01）。结论天龙咳喘灵胶囊在缩短小儿呼吸道感染病程,减少发作次数方面疗效满意。     

天龙喘咳灵对人气道上皮细胞增殖和迁移的影响

目的观察天龙喘咳灵含药血清对损伤气道上皮细胞增殖和修复性迁移作用的影响,探讨其在治疗支气管哮喘气道高反应中的可能机制.方法常规制备SD大鼠药物组血清和生理盐水组血清,按照浓度梯度加入对数生长期人气道上皮细胞(16HBE)共培养24h, CCK-8试剂盒计数16HBE生长抑制/增殖率.待16HBE生长融合成单细胞层至过密状态时,给予机械划伤处理,用刀片将单细胞层刮开一片边缘整齐的距形区域,并且从划伤起始部位留出一条清晰的切迹作为修复迁移的起始线.按照上述浓度梯度加入药物组和对照组血清,分别于0、24、48h在倒置显微镜下观察并摄片,并测量每组各浓度下迁移的最远距离.结果与对照组血清相比天龙喘咳灵药物血清促进了16HBE的增殖,但与药物血清浓度梯度负相关,对照组也呈现出这一趋势.药物血清增强了16HBE划伤后的修复迁移,作用最强的是含药物血清为10%的培养基,在此浓度下16HBE的迁移速度为(58.33 ±10.04)um/h,对照组迁移速度最大的是含血清为10%的培养基,速度为(38.68±13.07)μm/h.结论天龙喘咳灵含药血清能促进16HBE的增殖和损伤区域的迁移修复.天龙喘咳灵治疗慢性气道炎症性疾病,是通过药物人血后的代谢成分对受损上皮的修复来起作用的.     

平喘灵对哮喘大鼠血浆环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷含量及气道炎症细胞Fas表达的影响

目的探讨平喘灵对哮喘大鼠血浆环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）含量及气道黏膜炎症细胞Fas表达的影响。方法用卵蛋白复制大鼠哮喘模型。采用放射免疫法检测各组大鼠血浆cAMP、cGMP含量；用免疫组织化学法检测气道黏膜炎症细胞Fas的表达。结果模型组大鼠较空白对照组大鼠血浆中cAMP含量、cAMP／cGMP比值明显降低，cGMP含量明显升高，气道黏膜炎症细胞Fas表达明显升高（P＜0．05），组织形态学病变明显；经平喘灵治疗后，上述指标均得到改善（P＜0．05）。结论平喘灵治疗支气管哮喘可能与其调节机体cAMP、cGMP含量及气道黏膜炎症细胞Fas表达，稳定cAMP／cGMP比值有关，且平喘灵与激素在治疗哮喘中有协同效应。     

防风石油醚提取物对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜细胞增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及AQP1表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨防风石油醚提取物对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法:通过10μg/mL的TNF-α诱导HFLS-RA细胞建立体外细胞模型,用60、120、240μg/mL的防风石油醚提取物处理后,采用CCK8法测定细胞增殖,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法检测上清液中白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10和环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用RT-PCR法检测磷酸激酶蛋白激酶A(Pka)、cAMP效应元件结合蛋白(Creb)和Aqp1的mRNA表达,Western blot法检测PKA、磷酸化PKA(p-PKA)、CREB和AQP1的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞增殖能力增加,凋亡减少,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量升高,Creb和Aqp1的mRNA表达上调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达上调及p-PKA/PKA比值显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,防风石油醚提取物120、240μg/mL组细胞增殖能力降低,凋亡增加,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量减少,Creb和Aqp1的mRNA表达下调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达下调及p-PKA/PKA比值降低(P<0.05或P<0.01)。结论:防风石油醚提取物可抑制HFLS-RA细胞增殖,促进细胞凋亡,并通过cAMP/PKA/CREB信号通路下调AQP1的表达。     

半边旗活性成分5F对C26结肠癌细胞cAMP水平的影响

目的:探讨半边旗活性成分Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对C26结肠癌细胞环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。方法:以不同时间、不同浓度5F处理C26细胞,放免法测定cAMP含量。磷酸二酯酶抑制剂3-Isobutyl-1-methylxanthine(IBMX)预先孵育后再与5F联合应用,放免法检测cAMP含量,MTT法检测C26细胞活力。结果:5F可以显著增加cAMP含量,具有时间和剂量依赖性;5F对cAMP含量的作用不受IBMX影响,IBMX可以增强5F对cAMP的促进作用和对C26细胞增殖的抑制作用。结论:5F可能通过激活腺苷酸环化酶(AC)增加C26细胞cAMP含量,这可能是5F抗肿瘤的作用机制之一,5F与IBMX联合应用具有协同效应。     

丹龙定喘汤对哮喘小鼠气道重塑及血清TGF-β1的影响研究

目的:研究丹龙定喘汤对哮喘小鼠气道重塑和血清TGF-β1的影响。方法:SPF级Balb/c小鼠56只随机分为正常组、模型组、西药组、丹龙定喘汤组。卵蛋白致敏激发小鼠制作哮喘气道重塑模型,在实验第41～69天,正常组、模型组以生理盐水灌胃,其余2组分别给予地塞米松及丹龙定喘汤治疗。实验结束后观察肺组织病理组织形态变化及采用ELISA法检测血清TGF-β1水平。结果:丹龙定喘汤能改善哮喘小鼠气道炎性细胞的浸润及支气管平滑肌的增厚;与正常组比较,模型组小鼠血清TGF-β1明显升高(P<0.01);与模型组比较,西药组和丹龙定喘汤组TGF-β1明显降低(P<0.01),且两组之间无明显差异(P>0.05)。结论:丹龙定喘汤能够降低哮喘小鼠血清TGF-β1含量,改善哮喘小鼠气道重塑状态。     

姜黄素对急性肺栓塞大鼠核转录因子kappa B的影响

目的：探索姜黄素（CUR）对急性肺栓塞（APE）大鼠肺组织核转录因子kappa B（NF-κB）的影响。方法：72只SD大鼠随机分为4组,对照、假手术、模型和CUR治疗组。采用自体血栓复制法制备APE大鼠模型,栓塞后6h、24h和72h分别随机取各组大鼠各6只,水合氯醛麻醉后取肺组织病理检查,Western免疫印迹分析NF-κB蛋白的表达水平,免疫组化染色检测NF-κB阳性细胞数。结果：肺组织病理证实典型APE的血栓及肺泡坏死出血,CUR治疗能够减轻肺组织的病变。免疫组化染色可见在肺泡细胞、巨噬细胞、支气管上皮细胞及支气管平滑肌周围均有不同程度的NF-κB蛋白表达。栓塞后6 h、24 h和72 h,CUR治疗组的NF-κB阳性细胞计数明显低于模型组（P〈0.001）,接近对照和假手术组。栓塞后6 h、24 h时,Western免疫印迹显示CUR治疗组NF-κB蛋白的表达水平低于模型组（P〈0.01）,接近对照和假手术组。结论：CUR可通过下调APE大鼠肺组织NF-κB转录因子的表达水平而改善其肺部的损害,这可能是其干预APE的机制之一。     

扶正解毒汤对染镍体外培养人支气管上皮细胞抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响

目的:研究灌服中药扶正解毒汤(FJD)后兔血清拮抗硫酸镍(NiSO4)的细胞毒作用及其机制。方法:以NiSO4和不同剂量FJD含药血清共同处理体外培养人支气管上皮(16HBE)细胞,测定其存活率及活力,同时观察细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:在镍暴露细胞培养体系中加入FJD含药血清,可提高该细胞的存活率和活力,增强细胞内GSH-Px及SOD活性,减少MDA的生成,其中以高剂量FJD含药血清的作用最为明显。结论:NiSO4可诱发细胞氧化应激的产生,FJD具有拮抗硫酸镍细胞毒性的作用,可能与其抗氧化应激功能有关。     

七拗汤对内毒素诱导加重型哮喘小鼠的作用和机理研究

目的：评价七拗汤对哮喘小鼠气道炎症和高反应性的影响。方法：120只Balb／C小鼠随机分为6组：空白组、模型组、地基米松组、七拗汤高剂量组、七拗汤中剂量组、七拗汤低剂量组。除空白组外,各组小鼠以皮下注射、腹腔注射OVA致敏,雾化吸入OVA激发,内毒素鼻腔滴入诱导。空白组小鼠用PBS进行致敏、激发并在气道内滴入PBS。七拗汤高、中、低剂量组分别予26．8、13．4、6．7g．kg^-1的七拗汤灌胃;地塞米松组予0．0024g．kg。的醋酸地塞米松瘩液,1次／天,连续7天;末次滴鼻激发24h后测定相关指标。结果：模型组中嗜酸性粒细胞和中性细胞数显著上升（P〈O．01）;与模型组相比,地塞米松组嗜酸性粒细胞、中性细胞数量降低（P〈0．05,P〈0．01）。七拗汤高、中、低剂量组嗜酸性粒细胞水平均有下降（P〈O．01）。模型组气道反应性升高,与模型组相比,地塞米松组、七拗汤高、中、低剂量组均有所降低（P〈0．01）。病理显示,模型组小鼠肺组织炎细胞浸润,主要是中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,并见气管壁增厚。与模型组相比,地塞米松组病变明显减轻,仅见轻度的支气管周围炎;七拗汤高、中、低剂量组肺泡壁、气道壁病变程度均较模型组减轻,管壁及其周围浸润的炎细胞数量减少,支气管上皮细胞变性不明显,支气管腔内渗出物不同程度地减少。模型组IFN-v和IL-12水平显著降低,IL-4上升（P〈0．05）;与模型组相比,地塞米松组IFN-Y和IL-12水平升高,IL-4降低（P〈0．05）。七拗汤高、中剂量组中IFN-7水平升高,中剂量组中IL-4和IL-12水平与模型组相比具有统计学意义（P〈0．05）;七拗汤低剂量组细胞因子水平改变与模型组相比无意义。结论：七拗汤能够显著抑制卵蛋白致敏激发结合内毒素诱导的加重型哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性,通过调整其细胞因子水平,改善肺组织病理结构等发挥治疗效果。     

地黄饮子对阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆功能的影响

目的：探讨地黄饮子对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆功能的影响。方法：选取ICR小鼠40只,随机分成空白组（8只）、AD模型组（32只）,采用D-半乳糖复合给药造模25 d后,将造模成功的小鼠随机分为AD模型组（13只）、地黄饮子组（13只）,地黄饮子组连续灌胃25 d（16 g/kg）,采用水迷宫检测阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力。结果：与模型组比较,地黄饮子组与模型组潜伏时间相比P=0.024,给药组与模型组经过目标象限次数相比P=0.009 8,两组之间有显著性差异（P〈0.05）;地黄饮子能缩短潜伏时间,增加经过目标象限次数。结论：地黄饮子能改善阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆。     

中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞损伤的实验研究

目的:观察中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞损伤的作用.方法:使用人类支气管上皮细胞系16HBE细胞,建立细胞烟气悬凝物染毒模型,检测染毒后细胞活力,氧化应激水平,TNF-α、IL-8分泌情况.结果:烟气悬凝物染毒后,细胞活力下降,氧化应激水平升高,TNF-α、IL-8分泌增加.含中药添加剂组烟气悬凝物染毒后细胞活力高于普通烟组,LDH释放及氧化应激水平降低,TNF-α、IL-8分泌减少.结论:烟气悬凝物染毒16HBE细胞可致细胞活力下降及氧化应激水平升高,细胞因子分泌增加,中药添加剂可缓解以上情况.     

玉屏风散对气道变态反应性小鼠IL-17和IL-6的影响

目的通过建立系统性气道变态反应性小鼠模型,观察玉屏风散对小鼠肺部IL-17和IL-6的影响。方法40只Balb／c小鼠随机分成正常对照组、哮喘模型组、地寒米松治疗组和玉屏风散治疗组。建立用OVA诱导激发的上、下呼吸道变态反应性炎症模型,采用ELISA和免疫组织化学标记法分别测定和标记肺部IL-17和IL-6,治疗组在激发同时分别给予地塞米松（2mg／kg,7d）或玉屏风散（771mg／kg,7d）腹腔注射。结果哮喘动物模型激发同时给予玉屏风散治疗后,肺匀浆IL-17和IL-6均下降（P≤0．05）。模型组肺部免疫组化标记IL-17显著表达在小支气管柱状上皮,经治疗后表达下降;IL-6免疫组化也表达在支气管柱状上皮,较IL-17低。各实验组IL-6测定和表达结果类似于IL-17。结论Th17细胞参与了哮喘发病的病理过程,玉屏风散对小鼠系统性气道变态反应模型IL-17和IL-6在激发期有治疗作用,即玉屏风散对Th17细胞参与哮喘的病理过程有抑制作用。     

Casticin alleviates lipopolysaccharide‐induced inflammatory responses and expression of mucus and extracellular matrix in human airway epithelial cells through Nrf2/Keap1 and NF‐κB pathways

Asthma is one of the most common chronic inflammatory diseases of childhood, characterized by airway inflammation, mucus hypersecretion, and accumulation of extracellular matrix proteins. Casticin is an active compound that possesses broad biological activities including anti‐inflammatory effect. However, the effect of casticin on asthma remains unknown. The aim of the present study was to evaluate the effect and mechanism of casticin on inflammatory responses and expression of mucus and extracellular matrix in human airway epithelial cells. The results showed that lipopolysaccharide induced the mRNA and protein levels of IL‐6, IL‐8, MUC5AC, collagen type I, and fibronectin in 16‐HBE cells, whereas casticin treatment significantly inhibited the induction of lipopolysaccharide. Casticin induced Nrf2/Keap1 and inhibited nuclear factor κB pathways in 16‐HBE cells. Knockdown of Nrf2 attenuated the effect of casticin on production of IL‐6 and IL‐8, expression of MUC5AC, collagen type I, and fibronectin in 16‐HBE cells. In conclusion, the results indicated that casticin might be a novel therapeutic strategy for the treatment of asthma.