半边旗有效成分5F体内外的抗炎作用

目的:通过建立体内外炎症模型,观察半边旗有效成分5F的抗炎作用。方法:建立脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,并用不同浓度5F处理,CCK-8法检测5F的细胞毒性,采用Griess法检测上清液中一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧酶-2(COX-2)表达水平。雄性ICR小鼠60只,建立巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀模型,造模后随机分为模型组、阳性组和5F组,每组10只,5F组给予100 mg·kg-15F溶液,阳性组给予地塞米松0.8 mg·kg-1或吲哚美辛1 mg·kg-1,模型组给予同体积生理盐水。各组均连续给药7 d。观察5F对小鼠耳肿胀的抑制作用。结果:5F在0~40 mg·L-1的剂量内对RAW264.7细胞无明显毒性作用,10,20,40 mg·L-1的5F可依赖性抑制LPS诱导的NO释放(P<0.01),20,40 mg·L-1的5F可以降低PGE2含量(P<0.01),40 mg·L-1的5F显著性抑制i NOS和COX-2蛋白表达(P<0.05),10,20,40 mg·L-1的5F显著降低TNF-α和IL-1β含量(P<0.01),20,40 mg·L-1的5F显著降低IL-6含量(P<0.01),100 mg·kg-1的5F对巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀都有显著抑制作用(P<0.05)。结论:5F可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,抑制巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀,其抗炎作用与抑制i NOS和COX-2表达,减少炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6,NO和PGE2含量有关。     

半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.     

半边旗提取物5F诱导HepG2细胞凋亡与p53活化及血管内皮生长因子抑制有关

目的观察半边旗提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,并探讨p53、血管内皮生长因子(VEGF)及Caspase-3在5F诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法采用MTT分析检测5F对HepG2细胞增殖的影响,并通过细胞凋亡检测ELISA试剂盒分析经5F处理的HepG2细胞胞浆核小体片段,以确定5F能否诱导细胞凋亡,采用Hoechst/PI分析鉴定凋亡细胞核形态。通过免疫印迹(Western blotting)分析测定p53及VEGF蛋白表达水平,并通过Caspases-3分光光度法检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果通过细胞活性分析证实,5F对HepG2的细胞毒作用随着5F质量浓度的升高而增强。5F诱导HepG2产生胞浆核小体片段,并且该诱导作用具有剂量依赖性。5F处理后,凋亡变化,如染色质浓缩,被Hoechst/PI染色所确定。5F处理后HepG2细胞核内p53表达水平显著提高,而胞浆VEGF表达水平却下降,同时,Caspase-3活性通过浓度依赖方式增强。结论5F所诱导的HepG2细胞凋亡与p53及Caspase-3活化、VEGF负调控有关。5F可能具有抗癌尤其是抗肝细胞癌价值。     

半边旗二萜类化合物5F对人翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：观察中药半边旗二萜类化合物5F对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的影响。方法：用噻唑蓝比色法（MTT）观察不同浓度梯度，（4、8、16、32、64、128μg/ml)的5F在不同作用时间内（24，48，72，96小时）对HPF增殖的抑制作用。结果：用药24小时浓度16μg/ml开始明显抑制（P＜0．05），48小时8μg/ml抑制作用更强（P＜0．01），50％抑制率（IC50）浓度32μg/ml，同一浓度各时间组抑制率（IR）与对照组更强（P＜0．01），50％抑制率（IC50）浓度32μg/ml，同一浓度各时间组抑制率（IR）与对照组比较，在4μg/ml作用24、48及72小时IR与对照组比较差异均无显著性（P＞0．05），持续作用96小时差异有显著性（P＜0．01）；16μg/ml以上24－96小时各时间组IR与对照组比较差异均有显著性（P＜0．01），结论：体外培养HPF具较强增殖能力，5F对HPE的增殖具明显抑制作用。并与用药剂量和持续时间有相关性。     

半边旗中抗肿瘤成分6F的分离纯化

目的:分离纯化半边旗中抗肿瘤活性成分6F(即7β,9-二羟基-15-氧-对映-贝壳杉烷-16-烯-19,6β-内酯)。方法:采用二氧化碳超临界萃取、结晶与重结晶、硅胶柱层析方法进行分离、纯化6F;采用HPLC-MS、HPLC和TLC检测6F的纯度。结果:经HPLC和TLC检测,可以得到6F的纯化合物。结论:采用结晶与重结晶、硅胶柱层析方法,可有效纯化半边旗中抗肿瘤成分6F。     

半边旗二萜类抗癌化合物5F微囊的研制

目的:研究5F微囊的制备工艺.方法:用单凝聚法制备5F微囊,用正交设计法对5F微囊的制备工艺进行研究.结果:囊心、囊材比为1:3、成囊温度45℃、搅拌速度500 r/min时,包封率最高,囊径范围350～700μm.结论:本法稳定、快速、准确、简便,为半边旗剂型研究提供了参考.     

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化工艺研究

目的:探索D101大孔吸附树脂制备半边旗中抗肿瘤有效成分贝壳杉烷类二萜5F的工艺.方法:以HPLC为检测手段,以5F在浸膏中的含量为指标,比较甲醇和氯仿提取5F的专属性;以HPLC和TLC为检测手段,考察D101大孔吸附树脂对5F的吸附和洗脱条件.结果:半边旗药粉采用氯仿提取,制成含乙醇20%的药液上柱后,先用2BV30%的乙醇除去极性杂质,再用4BV60%的乙醇洗脱,得到质量分数为32.25%的5F.结论:建立了一种5F的纯化工艺,并达到要求的标准.     

半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法以台盼蓝活细胞计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用FCM检测5F对细胞周期和凋亡的影响;用PI/Hoechst33258荧光双染法和DNA ladder检测凋亡。结果 5F作用后,生长曲线测定和MTT比色法实验结果显示,5F对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪、DNA ladder和荧光双染法结果提示5F可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论半边旗提取物5F能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

半边旗二萜化合物5F对HO-8910PM细胞中Nr1d1表达的影响

目的:研究半边旗二萜化合物5F(5F from Pteris semipinnata L,PsL5F)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中核受体超家族成员1d1(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 1,Nr1d1)表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法:培养HO-8910PM细胞,用0.1%DMSO,100 μmol~(-1) PsL5F分别处理HO-8910PM细胞24 h后,提取RNA和总蛋白,应用肿瘤基因芯片和荧光定量实时PCR检测PsL5F对Nr1d1 mRNA表达的影响;Western blot法分析PsL5F对Nr1d1蛋白表达水平的影响.结果:肿瘤基因芯片结果显示,100μmol·L~(-1) PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的26.17倍,荧光定量实时PCR结果与芯片结果吻合,PsL5F处理组中Nr1d1 mRNA表达水平是对照组的(35.34±1.07)倍(P<0.01),并且PsL5F处理组中Nr1d1蛋白表达水平是对照组的(7.71±0.43)倍(P<0.01).结论:PsL5F能明显上调HO-8910PM细胞中Nr1d1的表达,提示其与PsL5F抗肿瘤作用密切相关.     

5F对肝癌细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响

目的调查半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人类肝癌细胞Hep3B的抗癌效果。方法在不同的时间段,采用5F(0～80μg/ml)处理Hep3B细胞。通过MTT法检测细胞毒性,通过Annexin V-EGFP染色及caspase-3活性检测细胞凋亡,通过碘化丙锭染色检测细胞周期。结果 5F以剂量、时间依赖方式抑制Hep3B细胞增殖,Hep3B细胞Annexin V-EGFP阳性染色及caspase-3活化确定了5F诱导的细胞凋亡,5F阻滞细胞于G2期。结论 5F抑制Hep3B细胞增殖与细胞G2期阻滞及细胞凋亡有关。     

半边旗5F注射液的质量标准研究

目的：建立半边旗注射液的质量标准。方法：采用薄层色谱法对半边旗注射液进行鉴别；采用高效液相色谱法测定主要成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的含量，色谱柱为Hypersil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸(55∶45∶0.045)，检测波长254 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃；采用pH计法、离子火焰法和沉淀法分别测定注射液pH，K+、鞣质、蛋白质、草酸盐以及重金属含量。结果：薄层鉴别斑点清晰，重现性好。高效液相色谱法测定5F在30～240 mg·L-1线性关系良好(r＝0.999 8)，平均加样回收率为99.8％。连续3批注射液pH 7.80～8.20，K+浓度小于10 mmol·L-1，注射液的鞣质、蛋白质、草酸盐以及重金属含量都符合药典规定。结论：本实验建立的分析方法灵敏可靠，可作为半边旗注射液的质量控制方法。     

高效液相色谱法测定半边旗抗肿瘤有效成分5F的含量

目的 建立半边旗抗肿瘤有效成分11α－羟基－15－氧－16烯－对映贝壳杉烷－19－酸（5F）的HPLC定量测定方法。方法 流动相由乙腈－甲醇－50mmol.L^-1醋酸盐缓冲液（30：5：65，pH4．1）组成；流速1．0mL.min^-1，检测波长242nm。结果 5－150mg.L^-1范围内呈线性（r＝0．997），日内、日间RSD1．8％－4．8％，回收率95．5％。结论 该方法精密度高、专一性好、能准确检测半边旗5F含量。     

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot法分析NF-κB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F对HO-8910PM细胞周期的影响与NF-κB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关.     

半边旗中二萜类化合物5F葡糖糖苷的分离鉴定及其抗肿瘤作用

目的:进一步研究半边旗的抗肿瘤活性成分。方法:运用反复硅胶柱层析的方法对半边旗中的化学成分进行分离纯化,以LC-MS及各种有机波谱法鉴定化学单体结构;并通过MTT法对分离鉴定的单体化合物及其苷元进行抗肿瘤活性研究。结果:从中分离鉴定1个二萜苷类化合物,为11β-hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oic acid 19-β-D-glucoside(Ⅰ);化合物Ⅰ及其苷元5F均可抑制两种肿瘤细胞A549和CNE-2Z的生长,且它们对两种肿瘤细胞的抑制作用呈一定剂量依赖关系和时间依赖关系,化合物5F的活性强于化合物Ⅰ。结论:α,β不饱和环戊酮结构是其活性部位,5F中19位碳上的羧基与糖连接形成酯苷,成为化合物Ⅰ后,其抗肿瘤活性大大降低。     

半边旗活性物质5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50 mRNA表达的影响

目的从NF-κB信号通路着手探讨半边旗活性物质5F诱导非小细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡发生的机制。方法MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用半定量RT-PCR方法检测NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50mRNA表达水平的变化。结果5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的质量浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC50分别为:21.40、4.52、1.02μg/mL;100μg/mL5F作用NCI-H460细胞6h后能引起IκKβ和IκBmRNA表达水平显著降低(P0.05);p65和p50mRNA水平在作用3h就发生明显减少(P0.05)。结论5F诱导NCI-H460细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路来实现的。