丹参提取物对CCl4和DMN诱导的大鼠肝纤维化的影响

分别采用四氯化碳和二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱和丹参作对照,通过肝组织病理学及Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸、丙二醛及血清肝功能部分指标检测,探讨丹提取物和治疗肝纤维化的效果及部分作用机理。     

白花丹提取物抗小鼠肝纤维化作用的研究

目的:观察白花丹提取物抗小鼠肝纤维化的作用。方法:用四氯化碳(CCl4)致肝损伤建立小鼠肝纤维化模型,以0.25g/kg、0.5g/kg和1.0g/kg三种剂量的白花丹提取物连续灌胃给药45天后,测算小鼠肝指数(HI);光镜下观察小鼠肝组织病理变化和肝纤维化病理学积分,并与秋水仙碱的抗肝纤维化作用进行比较。结果:白花丹三种剂量用药组各项观察指标与模型组相比均具有非常显著性差异(P<0.01);与秋水仙碱组相比,差异无显著性意义(P>0.05);肝细胞变性、坏死程度各用药组与模型组比较均明显减轻,肝纤维化程度也明显轻于模型组。结论:白花丹提取物能减轻实验性肝纤维化小鼠肝组织内纤维的增生。     

加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠α-SMA表达的影响

目的:观察加味桃核承气汤对四氯化碳(CCl4)肝纤维化大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,随机分为正常组、模型组,加味桃核承气汤高、中、低剂量组和秋水仙碱组;采用灌胃给药,疗程8周;用苦味酸-天狼红胶原染色方法进行半定量肝纤维化计分(SSS),观察肝纤维化程度的变化;用免疫组化技术半定量检测肝组织α-SMA的表达变化.结果:模型组大鼠SSS水平显著高于正常组,经加味桃核承气汤治疗后肝纤维化SSS水平明显下降;正常组、模型组,加味桃核承气汤高、中、低剂量组和秋水仙碱组肝组织α-SMA的蛋白表达水平分别为1.68±0.51、8.74±2.40、4.52±1.34、5.47±2.01、6.50±1.67、7.05±1.53.各治疗组α-SMA的蛋白表达水平显著下降.结论:加味桃核承气汤对CCl4诱导的肝纤维化有显著的治疗作用,其作用机制与抑制HSC的活化有关.     

丹酚酸B盐对大鼠纤维化肝组织脂质过氧化及其MMP-2活性的影响

目的:探讨丹酚酸B盐影响纤维化肝脏脂质过氧化与MMP-2活性的抗肝纤维化作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、丹酚酸B盐组与培哚普利组。以二甲基亚硝胺腹腔注射复制肝纤维化模型,隔天1次,连续4周。丹酚酸B盐预防组与培哚普利对照组于造模开始即开始灌服,正常组与模型组大鼠给予等量生理盐水,连续4周。HE染色与胶原染色观察肝组织炎性坏死与胶原沉积;试剂盒检测血清肝功能(ALT,AST,Alb,T.Bil)与肝组织SOD活性、GSH含量与GST活性;盐酸水解法测定肝组织Hyp含量,Western blot检测I型胶原和α-SMA蛋白表达。明胶酶谱法检测肝组织MMP-2/9的活性。结果:模型大鼠肝脏有明显胶原沉积与肝纤维化,伴有明显肝细胞炎性损伤坏死;模型大鼠血清T.Bil含量、ALT与AST活性明显升高,血清Alb含量明显减少;肝组织Hyp含量、α-SMA与I型胶原蛋白、MMP-2活性明显增加,GSH含量、SOD与GST活性明显降低。丹酚酸B盐与培哚普利明显减轻肝纤维化模型大鼠的血清ALT水平与肝组织Hyp含量,抑制模型大鼠肝组织的α-SMA与I型胶原蛋白表达,以丹酚酸B盐作用明显,且均下调肝组织MMP-2活性,而增加SOD活性与GSH含量;丹酚酸B盐尚可降低模型大鼠血清T.Bil含量、提高肝组织GST活性。结论:改善纤维化肝脏的脂质过氧化损伤与降低肝组织MMP-2活性是丹酚酸B盐预防肝纤维化重要作用机制。     

漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠SOD,MDA及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组和秋水仙碱组,并以灌胃的方式给药,比色分析法测血清SOD活性和MDA含量,同步。观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝病理组织学的影响。结果漏芦给药组肝纤维化指标SOD活性明显高于模型组(P<0.05),血清MDA含量较模型组明显降低;α-SMA表达明显低于模型组。结论漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠有一定的保护作用。     

肝苏颗粒对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝功能和病理损伤的影响

目的:探讨肝苏颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用及作用机制。方法:将72只大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.1 mg·kg~(-1))和肝苏颗粒高、中、低剂量组(16.7,8.4,4.2 g·kg~(-1)),每组12只,CCl4建立大鼠肝纤维化模型,同时灌胃给药10周。末次给药后,取血检测大鼠肝功能和重要脏器指数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定肝组织中透明质酸(HA),层连蛋白(LN),基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)含量;另取肝组织行一般病理学检查和马松(Masson)染色纤维化观察,并免疫组化法测定肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),血清碱性磷酸酶(ALP)明显升高,总蛋白(TP)明显下降(P0.01),肝组织HA,LN,TIMP-1水平明显升高(P0.01),肝,脾系数显著升高而胸腺系数降低(P0.01),肝脏质地变硬,病理学检测见典型假小叶形成,免疫组化检测显示肝组织TGF-β_1,α-SMA表达明显增强。秋水仙碱组和肝苏颗粒各组大鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL水平均显著下降,球蛋白明显增加(P0.01),肝苏颗粒低剂量组的白蛋白(ALB)含量明显增加(P0.05);各给药组肝组织中HA,TIMP-1水平明显降低(P0.01),纤维化程度有不同程度改善,肝组织TGF-β_1,α-SMA表达减弱。结论:肝苏颗粒对CCl4致大鼠肝纤维化有显著治疗作用,能明显改善肝功能,减轻肝脏纤维化病变,机制与减轻肝细胞损伤和抑制纤维病变发展有关。     

珍珠梅提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠SOD、MDA及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 :观察珍珠梅提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠 SOD、MDA及 2 -平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法 :50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组和秋水仙碱组 ,并以灌胃的方式给药 ,观察珍珠梅提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝病理组织学的影响。结果 :珍珠梅给药组肝纤维化指标超氧化物歧化酶 ( SOD)活性明显高于模型组 ( P<0 .0 5) ,血清丙二醛 ( MDA)含量较模型组明显降低 ;α-平滑肌肌动蛋白 ( α-SMA)表达明显低于模型组。结论 :珍珠梅提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠有一定的保护作用。     

珍珠梅提取物对大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的:观察珍珠梅提取物对大鼠慢性肝损伤的保护作用.方法:72只大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和珍珠梅给药组,秋水仙碱和珍珠梅以灌胃的方式给药.对比观察秋水仙碱和珍珠梅对二甲基亚硝胺(DMN)所致慢性肝损伤大鼠的肝功能、肝纤维化、肝病理学及肝组织氧化指标的影响.结果:珍珠梅给药组大鼠肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、白蛋白(ALb)、碱性磷酸酶(AKP)较模型组明显改善(P＜0.05或P＜0.01);肝纤维化血清学指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量明显低于模型组(P＜0.05或P＜0.01);肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性明显高于模型组,丙二醛(MDA)含量较模型组明显降低(P＜0.05或P＜0.01);HE染色及α-鼠抗平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达示肝组织纤维化程度较模型组明显减轻(P＜0.05);珍珠梅提取物抗肝纤维化综合效果优于秋水仙碱.结论:珍珠梅提取物对慢性肝损伤有一定的保护作用,抗氧化作用可能是其主要作用机制之一.     

鳖甲煎丸影响免疫性肝纤维化大鼠TNF-α表达的研究

目的:观察复方中药鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化模型大鼠肝组织TNF-α表达的影响,分析鳖甲煎丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制;并通过与抗肝纤维化药物秋水仙碱对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法:雄性Wistar大鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取8只大鼠断头处死,取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测TNF-α。结果:鳖甲煎丸能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变,明显抑制TNF-α的表达,其作用接近或优于秋水仙碱。结论:鳖甲煎丸具有明显的抗肝纤维化作用。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学以及α-SMA蛋白表达的影响

目的观察补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学的影响。方法 SD大鼠随机分为空白对照组8只、模型组15只、秋水仙碱组15只、补肾柔肝方组15只。均以标准鼠食饲养,自由饮水,除空白对照组外,其余各组大鼠采用CCl4造模8周制备肝纤维化模型。从第9周开始,秋水仙碱组、补肾柔肝方组灌胃相应药物,空白对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,均连续灌胃8周。末次给药后2 h,取肝组织进行HE、天狼猩红染色,评价肝细胞变性与胶原纤维增生程度。分别采用RT-PCR法和蛋白印迹法检测肝组织α-SMA表达情况。结果补肾柔肝方组大鼠肝脏的纤维化程度明显低于模型组;与空白对照组相比,模型组大鼠的α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组相比,秋水仙碱组及补肾柔肝方组α-SMA蛋白表达水平有所降低(P均0.05)。结论补肾柔肝方能够降低大鼠肝脏内α-SMA蛋白的表达水平,具有明确的抗肝纤维化作用。     

银杏叶提取物在实验性大鼠肝纤维化中对RAS的影响

目的:研究银杏叶提取物抗肝纤维化作用及对CCl4肝纤维化大鼠RAS的影响。方法:采用CCL4造模的同时,分别给以银杏叶提取物及易善复混悬液灌服,共6周,光镜下观察病理改变;检测血清ALT、AST、ALP水平;HA、LN和血浆AngⅡ的水平;检测大鼠肝组织中α-SMA蛋白和AT1RmRNA表达。结果:银杏叶提取物可促使大鼠肝组织的炎症和纤维化程度减轻;使肝组织中血浆AngⅡ水平降低(P<0.01);AT1RmRNA、α-SMA蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:银杏叶提取物具有一定改善肝功能、抗肝纤维化的的作用。其抗肝纤维化作用的机制之一可能与其降低肝纤维化大鼠血浆AngⅡ水平,抑制肝组织AT1R的基因表达有关。     

清纤方抗实验性大鼠肝纤维化的作用研究

目的:探讨清纤方抗肝纤维化的治疗机制。方法:利用CCl₄制备肝纤维化Wistar大鼠模型,分为正常组、模型组、清纤方组、秋水仙碱组。治疗8周后,用HE和Masson染色观察肝纤维化的形成,免疫组化检测Ⅰ、Ⅲ胶原,RT-PCR检测肝组织中转化生长因子β₁(TGF-β₁)mRNA的表达。结果:Ⅰ、Ⅲ胶原和TGF-β₁mRNA的表达在治疗组均明显减少。结论:清纤方能有效减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度,其机制可能与抑制肝内TGF-β₁的表达有关。     

消癥活络方对肝纤维化大鼠肝组织α-SMA和TGF-β1表达的影响

目的观察消癥活络方对肝纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β_1)表达的影响。方法采用CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,将大鼠随机分为6组。通过肝脏病理学HE染色和Masson染色,判断肝脏纤维化程度以及肝组织结构改变;分别采用免疫组化和Wes tern Blot检测肝组织中α-SMA和TGF-β_1蛋白的表达。结果消癥活络方中、高剂量组与秋水仙碱阳性对照组均能明显改善模型大鼠肝组织纤维化程度;抑制大鼠肝脏中α-SMA和TGF-β_1蛋白的表达。结论消癥活络方能够明显改善大鼠肝纤维化程度,其作用机制可能是通过降低TGF-β_1的表达,从而抑制肝星状细胞的活化,降低ECM的合成。     

丹酚酸A对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ型胶原及其基因表达的影响

目的:研究丹酚酸A(SA-A)抗肝损伤、肝纤维化作用及其对Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法:采用CCl_4诱导大鼠肝损伤及肝纤维化,期间予SA-A灌胃治疗,另设秋水仙碱组、丹参组作对照,6w后进行肝组织病理学和Ⅰ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、血清ALT、AST和白蛋白含量测定,并以RT-PCR法检测肝组织Ⅰ型胶原mRNA。结果:SA-A可降低血清ALT、AST水平及肝组织Hyp含量,减轻肝纤维化程度与秋水仙碱、丹参一致。此外,SA-A组肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达明显轻于模型组。结论:丹酚酸A有显著的抗肝损伤、肝纤维化作用,对损伤肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达有明显抑制作用。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织α-SMA、TGF-β1蛋白表达，采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，α-SMA蛋白表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达也较模型组显著下降。结论：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低α-SMA蛋白表达及TGF-β1的转录及表达，抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

白花丹醌对人肝星状细胞的增殖抑制、凋亡及细胞外基质分泌功能的影响

目的：研究白花丹醌对人肝星状细胞株（HSC-LX2）的作用,观察该药对细胞的增殖抑制率、细胞凋亡、分泌细胞外基质和金属蛋白酶功能的影响。方法：HSC-LX2与药物孵育48 h,以MTT法检测细 胞增殖抑制率;以流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组化法观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和MMP-13表达的部位和面积。结果：白花丹醌低、中、高浓度均可抑制HSC-LX2细胞增殖,诱导细胞发生凋亡,降低Ⅰ型和Ⅲ型胶原分泌水平,并增加其分泌MMP-1及MMP-13的能力。以上作用具有剂量依赖性,有统计学差异（P<0.05）;中、高剂量组上述的作用比秋水仙碱强。结论：白花丹醌具有抑制HSC-LX2细胞增殖、诱导细胞发生凋亡、降低细胞外基质的分泌,并增加纤维蛋白降解酶分泌水平的能力,而对肝纤维化进程有干预作用;上述能力均有剂量依赖性;且中、高剂量组的干预能力强于秋水仙碱。     

乌鸡白凤丸抗肝纤维化作用的实验研究

目的:观察乌鸡白凤丸在大鼠肝纤维化形成过程中对大鼠TGF-β、TNF-α及肝纤维化指标透明质酸、层粘连蛋白、III型胶原及α-SMA的影响。方法:采用放免法观察肝纤维化形成过程中血清TGF-β、TNF-α及HA、LN、PCIII的水平变化;采用免疫组化的方法观察α-SMA的变化。结果:模型组血清中TGF-β、TNF-α及HA、LN、PCIII的水平均显著升高,但通过乌鸡白凤丸处理后各项指标均较模型组明显减低,乌鸡白凤丸对以上各项指标有明显的下调作用;乌鸡白凤丸处理组肝硬化程度明显减轻,α-SMA的表达显著减低。结论:乌鸡白凤丸可能通过抑制多种促肝纤维化因子及减低肝星状细胞活性等多种机制抗大鼠肝纤维化,从而在一定程度上延缓了肝纤维化的进程。     

苦参碱对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠的影响

目的探讨苦参碱对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组及苦参碱低、中、高剂量组(40、80、160 mg/kg),除空白组外其余组皮下注射硫代乙酰胺诱导肝纤维化模型,2次/周,共注射10周;第5周各组灌胃给药,1次/d。10周后,全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST水平及HA、CIV、IPCⅢ水平,HE染色观察肝组织病理状况,免疫组化检测α-SMA蛋白表达,qRT-PCR检测肝组织中CTGF、α-SMA、TIMP-1 mRNA表达。结果与模型组比较,苦参碱组降低了大鼠血清中ALT、AST、HA、CIV、PCⅢ水平(P<0.05,P<0.01),促进CTGF、α-SMA和TIMP-1 mRNA表达(P<0.01),抑制α-SMA蛋白表达,改善肝组织纤维化程度。结论苦参碱可抑制硫代乙酰胺诱导的大鼠肝纤维化,改善其肝功能,其作用可能与抑制CTGF、α-SMA和TIMP-1表达有关。     

地龙2号对肝纤维化模型大鼠肝星状细胞活化及TGF-β1蛋白表达的影响

目的:研究蚯蚓提取物“地龙2号”对肝纤维化模型大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分成6组:模型组,CCl4造模同时仅用单蒸水10ml·kg-1·d-1灌胃;地龙2号大剂量组,造模同时用地龙2号50ml·kg-1·d-1灌胃;地龙2号小剂量组,造模同时用地龙2号25ml·kg-1·d-1灌胃;阳性对照组,造模同时用秋水仙碱0郾1ml·kg-1·d-1灌胃;阴性对照组,皮下注射与造模同剂量的不含CCl4的花生油,不用药物干预;正常组,不注射CCl4、花生油,也不用任何药物干预。8周后处死大鼠,分别应用HE染色观察大鼠肝脏组织的病理改变,并用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA及TGF-β1蛋白的表达情况。结果:地龙2号大、小剂量组肝纤维化的程度均明显减轻,α-SMA、TGF-β1蛋白表达均显著降低,而秋水仙碱组无显著变化。各实验组肝纤维化程度与α-SMA、TGF-β1蛋白的表达水平均呈明显的正相关。结论:地龙2号具有抗实验性大鼠肝纤维化作用,其机理可能与其抑制肝星状细胞活化及TGF-β1蛋白表达有关。