粗纤维调节素的提纯和抗血清制备

采用分级盐析、离子梯度层析、凝胶过滤等步骤从人胎盘组织中提纯了粗纤维调节素（Ｕｎｄｕｌｉｎ，Ｕｎ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实为一纯蛋白。以纯化的Ｕｎ免疫新西兰大白兔获得高效价抗血清．且与Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白均无明显交叉反应。制备的Ｕｎ及其抗血清可用于血清ＥＬＩＳＡ检测及免疫组化研究。     

CCl_4诱导大鼠肝纤维化动物模型Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ型胶原生成变化的研究

目的探讨肝纤维化过程中胶原生成细胞的来源以及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原基因及其蛋白表达的演变规律。方法利用免疫组化及核酸分子杂交技术，对ＣＣｌ４诱导ＳＤ大鼠肝纤维化不同阶段（２０周内）α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ的表达进行动态观察。结果（１）肝纤维化时α１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ早期即迅速升高，α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ呈优势性表达，α１（Ｉ）前胶原ｍＲＮＡ含量的增加则较为缓慢；（２）肝纤维化早期，变性坏死区结蛋白阳性和α－平滑肌肌动蛋白阳性的Ｉｔｏ细胞及肌纤维母细胞表达α１（Ⅲ）、α１（Ⅳ）及α１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ。纤维化中、后期，三种前胶原ｍＲＮＡ表达主要见于间隔内纤维母细胞和肌纤维母细胞。结论二者构成肝纤维化时的主要胶原生成细胞。此外，窦内皮细胞也参与肝内Ⅳ型胶原的合成。     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单抗与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用细胞融合技术建立了５株分泌抗人甲胎蛋白（ＡＦＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，快速酶联免疫分析法测得其亲和常数为５×１０７～２×１０９Ｍ－１之间；单抗的Ｉｇ亚类１Ｄ６和１Ｅ６为鼠ＩｇＧ２ａ（κ），３Ａ８、５Ａ７和７Ｈ１１为ＩｇＧ１（κ）。免疫组化中５株单抗均在肝癌细胞的胞浆显色，３Ａ８和１Ｄ６还能结合在肝癌细胞膜上。应用方阵配对实验初步证实，５株单抗至少针对ＡＦＰ分子上３个不同表位，并分析了单抗在ＥＬＩＳＡ反应中的特性。     

抗肝癌NMP单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备出具较高特异性抗肝癌核基质蛋白单克隆抗体,以用于肝癌的基础和临床的研究。首次免疫用肝癌细胞纯核,用高盐抽提法提取的肝癌细胞核基质蛋白加强免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,ＥＬＩＳＡ法同时测定培养上清对肝癌核基质蛋白及正常肝细胞核基质蛋白的免疫反应,ＬＳＡＢ法进行单抗的鉴定。结果：建立了一株能稳定分泌抗肝癌核基质蛋白单抗的杂交瘤细胞株２Ｇ８,染色体数目为８６－９２,Ｉ     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单机与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

低氧性动脉高压大鼠肺动脉壁Ⅰ,Ⅲ型胶原及其mRNA的变化

用双醋酸－－胃蛋白消化法提取可溶性Ⅰ、Ⅲ型胶原混俣物，用β－巯基乙醇阻断－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分出Ⅲ型胶原之单α１（Ⅲ）条带测定常压低氧大鼠肺外肺动脉中Ⅰ、Ⅲ胶原比例的变化。结果表明，吸入低氧气体１周／Ⅲ型胶原比值未见有统计学意义的变化；吸入低氧气体３周、Ⅲ型胶原比值明显升高。崦在吸入低氧气体１周时Ｉ型前胶原ｍＲＮＡ已呈有统计学意义之升高。     

实验性矽肺纤维化组织中I,Ⅲ型前胶原基因的表达

在制备人和小鼠的Ｐｒｏα１（Ｉ）、Ｐｒｏα１（Ⅲ）前胶原ｃＤＮＡ探针的基础上，采用ｃＤＮＡｍＲＮＡ斑点杂交及原位杂交技术，观察了二氧化硅诱导二个月和四个月的矽肺纤维大鼠肺组织Ｉ型、Ⅲ型胶原基因的ｍＲＮＡ水平和分布情况。实验结果表明，肺纤维化组织中Ｐｒｏα１（Ｉ）、Ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），两型ｍＲＮＡ在正常肺组织主要分布于肺泡间隔的成纤维细胞中，而在病变组织     

Ⅲ型前胶原诊断肝硬化和肝癌的临床价值

Ⅲ型前胶原诊断肝硬化和肝癌的临床价值陈泮藻，戴皓洁，王录焕，李振甲肝脏发生纤维化时，纤维增生，产生大量胶原，胶原代谢过程中，形成Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）或Ⅲ型前胶原肽（ＰⅢＰ）。检测血液中ＰＣⅢ已成为判断肝硬化和肝癌的一个灵敏的指标。本文观察１６１名肝脏...     

低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原及其mRNA的变化

用双醋酸－胃蛋白消化法提取可溶性１、Ⅲ型胶原混合物，用β－巯基乙醇阻断－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分出Ⅲ型胶原之单－α＿１（Ⅲ）条带测定常压低氧大鼠肺外肺动脉壁中1、Ⅲ胶原比值的变化。结果表明，吸入低氧气体１周Ｉ／Ⅲ型胶原比值未见有统计学意义的变化；吸入低氧气体３周Ｉ／Ⅲ型胶原比值明显升高。而在吸入低氧气体１周时Ｉ型前胶原［Ｐｒｏα＿１（Ｉ）］ｍＲＮＡ已呈有统计学意义之升高。     

实验性矽肺纤维化组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达

在制备人和小鼠的Ｐｒｏαｌ（Ⅰ）、Ｐｒｏαｌ（Ⅲ）前胶原ｃＤＮＡ探针的基础上，采用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ斑点杂交及原位杂交技术，观察了二氧化硅诱导二个月和四个月的矽肺纤维化大鼠肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原基因的ｍＲＮＡ水平和分布情况。实验结果表明，肺纤维化组织中Ｐｒｏαｌ（Ⅰ）、Ｐｒｏαｌ（Ⅲ）ｍＲＮＡ含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），两型ｍＲＮＡ在正常肺组织主要分布于肺泡间隔的成纤维细胞中，而在病变组织主要分布于细胞性结节和增厚间质的成纤维细胞中。我们认为二氧化硅诱导的矽肺纤维出组织中胶原纤维的增生和积聚与胶原基因的表达密切相关。     

间接ELISA法的改进并用于肾综合征出血热病人血清的初步分型

采用超声、差速离心法制备肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原。通过与免疫荧光法（ＩＦＡ）和捕获ＩｇＭＥＬＩＳＡ法（ＭａｃＥＬＩＳＡ）比较，分析了病人临床四个期血清抗体阳性率，对３组不同地区的正常人群ＨＦＲＳＶ抗体阳性血清作抑制试验，以及比较ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ血清抗体几何平均滴度证实本方法是特异和灵敏的。用这一方法对野鼠型和家鼠型ＨＦＲＳ病人血清，与两型病毒作交叉ＥＬＩＳＡ试验，结果呈单向反应；采用胞膜荧光反应为主的感染细胞制备抗原，可提高其分型效果。     

抗人胎盘层粘连蛋白P1单克隆抗体的制备与初步应用

在纯化人胎盘层粘连蛋白Ｐ１段（简称Ｐ１）的基础上，应用杂交瘤技术获得两株抗Ｐ１的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ１５和１Ｂ５。两株ＭｃＡｂ均属ＩｇＧ１，同人纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原无交叉反应。纯化的腹水ＭｃＡｂ效价分别为６．４×１０－７（３Ａ１５）和２×１０－８（１Ｂ５），分别识别Ｐ１分子上的不同表位。利用ＭｃＡｈ３Ａ１５和１Ｂ５建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ，用于检测Ｐ１的下限为１０ｎｇ／ｍｌ，标准曲线在１０～５００ｎｇ／ｍｌ之间呈直线关系。对１００例健康献血员、１８例慢性肝炎患者和１２例肝硬化患者血清Ｐ１的检查结果分别为３３．８±１１．６、６７．３±３１．７和１０７．５±５８．４ｎｇ／ｍｌ。     

抗人DAF单克隆抗体的制备及鉴定

以初步纯化的人红细胞膜ＤＡＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,成功地获得３株（ＤＧ３、ＤＧ９和ＤＡ１１）抗人ＤＡＦ单克隆抗体。经间接ＥＬＩＳＡ测定,３株杂交瘤细胞培养上清及腹水的抗体效价分别为１０－３～１０－４及１０－６～１０－７;３株单抗的重链为小鼠ＩｇＧ１亚类,轻链为κ型。结合还原条件下的免疫印迹实验及３株单抗对ＤＡＦ促衰变活性的抑制作用,推测ＤＧ９识别的抗原表位为ＳＣＲ１,而ＤＧ３和ＤＡ１１为ＳＣＲ２至ＳＣＲ４。     

PCR与单克隆抗体ELESA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶性反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测．ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｈｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性．ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳＡ检测的被感性为１５ｎｇ／ｍｌ．应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测了９６份结核临床标本．ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＰＣＲ的检出率虽高于细菌培养的阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片、细菌培养和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．００１）．ＥＬＩＳＡ的假阳性率高于ＰＣＲ的假阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．研究表明，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均是特异、敏感、快速的诊断结核病的方法．但在使用中又各自有其特点．     

病毒性肝炎肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系

目的 研究病毒性肝炎肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系。方法 以原位末端标记及免疫组化检测４０例慢性病毒性肝炎（ＣＨ）肝组织细胞调亡相关线状断裂ＤＮＡ以及Ｆａｓ抗原、转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）、Ⅲ型前胶原肽（ＰⅢＰ）在肝组织中的表达;以酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测血清可溶性Ｆａｓ（ｓＦａｓ）及ＴＧＦ－β１。结果 ＣＨ肝细胞ＤＮＡ损伤与肝组织Ｆａｓ抗原、ＴＧＦ－β１表达及血清ｓＦａｓ、ＴＧＦ－     

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。     

人Ⅳ型胶原蛋白提取及其单克隆抗体的制备与鉴定

从人胎盘提取Ⅳ型胶原（ＣＯＬⅣ）为抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗ＣＯＬⅣ单克隆抗体的杂交瘤细胞。间接ＥＬＩＳＡ测定表明，３株ＭｃＡｂ与ＣＯＬⅣ有较强的反应，而与其它３种胶原及４种测试蛋白均无交叉反应。其中２株ＭｃＡｂ的亲和力都在１０（１１）以上。关键词     

抗人IgGFc和Fab单克隆抗体的鉴定及应用

本文将采用木瓜蛋白酶水解和ＳＰＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析等手段获得的人ＩｇＧＦｃ和Ｆａｂ，以抗人ＩｇＧＦｃ和抗人ＩｇＧＦａｂ单抗为参比品（Ｓｉｇｍａ）．鉴定了细胞库中抗人ＩｇＧ系列的部分细胞林，得到分泌特异性抗人ＩｇＧＦｅ和抗人ＩｇＧＦａｂ单抗的细胞各一株。在此基础上。应用抗人ＩｇＧＦｃ及抗人ＩｇＧＦａｂ单抗分别制备了Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱，纯化了酶解的人ＩｇＧＦｃ和Ｆａｂ。经ＥＬＩＳＡ法鉴定，相互间无交叉反应。同时用此方法还制备了人抗ＨＢｅＦａｂ，并将此Ｆａｂ标记过氧化物酶。配制ＨＢｅＥＬＩＳＡ诊断盒，证明其生物学活性未受影响，而且消除了类风湿因子引起的ＨＢｅＡｇ假阳性现象。     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。