氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌（福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株）进行耐药性检测,聚合酶链反应（PCR）检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%（9/100）,福氏志贺菌为4%（2/50）,宋内志贺菌为14%（7/50）;qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率（11.1%）高于阴性菌株（5.5%）,但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。     

质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在大肠埃希菌中流行现状及耐药特征

目的了解该院分离的大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS的流行情况及其耐药特征。方法用PCR法对129株大肠埃希菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测,并用K-B纸片法检测其对15种抗菌药的体外抗菌活性,另外用琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的M IC值。结果129株大肠埃希菌中,5株(3.88%)检出qnrA基因,8株(6.20%)检出qnrB基因,3株(2.33%)检出qnrS基因。阳性菌株均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和3株qnrB阳性菌株对环丙沙星敏感。结论湖北地区大肠埃希菌中存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行,qnr阳性株呈多重耐药,且敏感株中有该类基因的存在,应加强监测。     

大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的　了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法　用聚合酶链反 应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K B法、break point法。结果　227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产 酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号:AY675584。6株qnr 基因阳性菌株均为产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论　qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药 性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

肺炎克雷伯菌中质粒介导耐喹诺酮类耐药基因qnr的流行现状及耐药特征

目的 了解肺炎克雷伯菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行情况以及其耐药特征.方法 PCR法对37株肺炎克雷伯菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测.K-B纸片法检测对15种抗菌药物的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.结果 37株肺炎克雷伯菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株7株(18.92%),均为qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药.结论 湖北地区肺炎克雷伯菌中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测.     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法用聚合酶链反应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K—B法、breakpoint法。结果227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号：AY675584。6株qnr基因阳性菌株均为产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。     

9年内质粒介导喹诺酮类耐药决定子发生率

近年来,一些导致低水平喹喏酮类药物耐药的质粒介导耐药（PMQR）基因陆续被发现。本研究选取1998--2001年和2005--2006年韩国一所三级医院血标本中分离的261株大肠埃希菌、135株肺炎克雷伯菌和65株阴沟肠杆菌,采用多重PCR方法筛检qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、aac（6′）-Ib和qepA6个PMQR基因,并直接测序,aag（6′）-Ib阳性PCR产物使用Bts CI酶切,以明确aac（6′）-Ib-cr变异体。     

临床分离阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮耐药qnrB和qnrS基因的检测

目的了解临床分离阴沟肠杆菌中qnrB和qnrS基因的分布。方法PCR检测qnrB和qnrS基因并将阳性扩增产物进行测序分析;纸片扩散法测定qnrB和qnrS基因阳性菌株对10种抗菌药物的敏感性。结果81株阴沟肠杆菌中,5株qnrB4基因阳性(6.5%)、2株qnrS1基因阳性(2.5%);qnr基因阳性菌株对氯霉素、阿米卡星、头孢西丁、头孢噻肟等显示多重耐药,其中3株对环丙沙星耐药。结论临床分离阴沟肠杆菌中存在qnrB和qnrS基因阳性菌株,为多重耐药菌,临床应加强检测和监测。     

大肠埃希菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药的质粒介导耐药

目的 了解近年来发现的质粒介导耐药机制在大肠埃希菌临床株对喹诺酮类耐药中所起的作用。方法 78株环丙沙星耐药菌株分离自上海5所教学医院。以克隆斑点杂交及Southern杂交方法筛选质粒介导耐药基因qnr；以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性；对qnr基因进行序列分析，以引物步移法对qnr周边质粒DNA进行测序、分析。结果 78株大肠埃希菌中，6株（7．7％）qnr检测阳性。在6株阳性菌中，喹诺酮耐药性均可通过质粒转移，接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升16～250倍。qnr基因与最早报道的序列一致，qnr位于In4族的Ⅰ类整合子上，本研究中的2个新整合子命名为In36及In37。结论 与qnr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在大肠埃希菌临床分离株中有一定程度流行，这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的原因之一。     

广州地区阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测及分析

目的了解广州地区临床分离的阴沟肠杆菌的耐药现状,以及质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因qnrA,qnrB,qnrC,qnrS,qepA,aac(6’)-Ib-cr的流行情况。方法纸片扩散法进行药敏试验;PCR法扩增PMQR基因并将阳性产物测序分析;分析PMQR基因在环丙沙星(CIP)敏感及耐药株中的分布差异。结果 226株阴沟肠杆菌耐药率75%的药物有5种,其中CIP耐药率62.8%。63株(27.4%)检出PMQR基因,qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib-cr的检出率分别3.1%、7.5%、4.4%和15.0%,有5株存在两种PMQR基因,未检出qnrC和qepA基因。qnrA、qnrB、qnrS及aac(6’)-Ib-cr基因在CIP敏感株与耐药株中的分布经χ2检验,χ2分别为2.79,10.87,4.63和23.55,P分别>0.05、<0.01、<0.05及<0.01。结论本地区阴沟肠杆菌呈现多重耐药,qnrA、qnrB、qnrS及aac(6’)-Ib-cr基因在广州地区均有流行,且这几种基因与环丙沙星等药物的耐药率有一定相关性。     

肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究

目的 调查武汉大学人民医院分离的肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因的现状、基因型以及qnr基因阳性菌株所携带的广谱B内酰胺酶基因型.方法 PCR法对179株肠杆菌科细菌(129株大肠埃希菌、37株肺炎克雷伯菌和13株阴沟肠杆菌)进行qnrA、qnrB、qneS基因检测.KB纸片法检测对15种抗菌药的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.质粒接合试验分析qnrA、qnrB、qnrS基因的水平转移能力.对qnr阳性株,检测Ⅰ类整合酶基因及SHV-1、TEM-1、CTX-M、OXA-Ⅰ、OXA-Ⅱ、OXA-Ⅲ、DHA、EBC型β内酰胺酶基因.结果 179株肠杆菌科细菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株25株(13.97%),包括6株(3.35%)含有qnrA基因,9株(5.02%)含有qnrB基因,10株(5.59%)含有qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和4株qnrB阳性菌株对喹诺酮类药物敏感.2株qnrA阳性菌株和4株qnrB及qnrS阳性菌株质粒接合成功.23株qnr阳性株Ⅰ类整合酶基因阳性,1株qnrB及qnrS阳性菌株Ⅰ类整合酶基因阴性,14株菌携带TEM-1型广谱β内酰胺酶基因、6株菌携带OXA-Ⅲ型广谱β内酰胺酶基因、7株菌携带EBC型AmpC酶.结论 湖北地区肠杆菌科细菌中存在qnrA、qnrB、qnrS基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,且喹诺酮类敏感菌株中有qnr基因的存在.qnr阳性菌株可携带多种广谱p内酰胺酶基因.     

阴沟肠杆菌临床分离株中3类质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

目的 了解3类质粒介导喹诺酮类药物耐药基因在阴沟肠杆菌中流行情况.方法 采用聚合酶链反应检测2005年1-12月本院临床分离的101株阴沟肠杆菌中qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib以及qepA基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株采用FokI酶切确认aac(6')-Ib-cr基因,同时检测ESBLs及AmpC酶的产生情况.结果 101株阴沟肠杆菌对环丙沙星的耐药率为32.7%.41.6%(42/101)菌株携带qnr基因和(或) aac(6')-Ib-cr基因,其中39株(38.6%)携带qnr基因,7株( 6.9% )携带aac(6')-Ib-cr基因,4株同时携带qnrB4和aac(6')-Ib-cr,未检测到qepA基因.qnr基因阳性菌株中qnrA 19株、qnrB 18株、qnrS 3株(其中1株同时含有qnrB和qnrS).环丙沙星耐药与敏感菌株中qnr基因检出率分别为48.5%(16/33)和32.8% (21/64),经卡方检验两组差异无统计学意义(P=0.22).产与非产ESBLs菌株中qnr基因检出率分别为 62.7% (32/51)和14.0%(7/50),两者差异有统计学意义(P<0.01).结论 临床分离的阴沟肠杆菌中质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因检出率高,在环丙沙星敏感阴沟肠杆菌中qnr基因的检出率与耐药株中的检出率相仿.     

变形杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测

目的 了解临床分离的变形杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr基因)存在情况.方法 用PCR检测对146株变形杆菌的qnr基因.药敏试验用M-H肉汤微量稀释法.结果 146株变形杆菌中有3株检出qnr基因:分别为qnrA、qnrB2、qnrS1,其中有1株同时携带qnrB2和qnrS1.qnrB2在第259位碱基发生C→A(精氨酸→丝氨酸)突变,3种qnr基因序列已在基因库注册,授权号:EF488761,EF488762,EF501989.3株qnr基因阳性株中2株为产ESBLs菌株.结论 qnr基因在变形杆菌中的携带率较低.     

Retrospective analysis of bacteremia because of Enterobacter cloacae compared with Escherichia coli bacteremia

A total of 52 patients of Enterobacter cloacae bacteremia from a University hospital during the period from January 2000 to June 2005 were analysed and compared with a reference group comprising 52 patients of Escherichia coli bacteremia. Overall, E. cloacae ranked the tenth in all pathogens of bacteremia accounting for 2.8% of the total patients. Although the incidence of E. cloacae bacteremia was low, the attributable mortality rate till achieved 13.5%. Most patients (86.5%) with E. cloacae bacteremia were hospital-acquired. The overwhelming majority of patients (92.3%) were men, while almost half of the patients (48.1%) were from the Department of Urological Surgery with underlying diseases such as urinal obstruction, kidney transplantation and kidney tumours. Possible risks factors associated with E. cloacae bacteremia included immunocompromised status, long-term hospitalisation and invasive procedures or surgeries. E. cloacae bacteremia significantly differed from E. coli bacteremia in a number of clinical aspects, including underlying diseases, portal of entry, infection type, risks factors, laboratory findings and appropriateness of empirical antibiotic therapy. Besides the high prevalence of resistance to cephalosporins, most E. cloacae blood isolates were also resistant to ciprofloxacin (resistance rate, 67.3%), gentamicin (73.1%) and tobramycin (73.1%). Based on the findings of the present study, E. cloacae is probably an important pathogen of bacteremia occurring in male patients with underlying urinal system illnesses.     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药机制的研究

目的研究30株铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法用PCR及测序法研究拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ的gyrA、gyrB、parC和parE基因;同时用琼脂稀释法测定环丙沙星、左氧氟沙星的MIC和加入羰基氢氯苯腙(CCCP)后的MIC,以确定存在外排机制。结果菌株中23株(76.7%)有gyrA突变,主要为Thr-83→Ile,第87位突变3株;10株(33.3%)parC基因突变,其中5株为Ser-87→Leu,3株第91位突变;gyrB和parE突变较少见。CCCP能显著降低环丙沙星和左氧氟沙星的MIC。结论铜绿假单胞菌的耐药性日趋严重,两类拓扑异构酶基因突变和外排泵机制是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。     

Detection of the plasmid-mediated quinolone resistance determinant qnr among clinical isolates of Klebsiella pneumoniae producing AmpC-type beta-lactamase

OBJECTIVES: Plasmid pMG252 contains the qnr locus, which is responsible for low-level resistance to quinolones by protecting the DNA gyrase. pMG252 also encodes the AmpC-type beta-lactamase (pACBL), FOX-5. The aim of this study was to determine the prevalence of qnr in strains from different geographical locations in America and Europe. METHODS: Four hundred and twenty-five (159 Klebsiella pneumoniae and 266 Escherichia coli) clinical isolates were studied. The detection of qnr was by PCR using specific primers for an internal fragment of 543 bp. RESULTS: qnr was detected in three cefoxitin-resistant K. pneumoniae strains, which also produced a pACBL. None of the E. coli isolates tested contained qnr. The three qnr-positive K. pneumoniae came from the USA, and all transferred a conjugative plasmid coding for cefoxitin resistance to E. coli J53. qnr was also transferred by the same plasmid in two out of the three strains. The sequences of amplified qnr fragments from the three strains were identical to the qnr sequence from pMG252. CONCLUSIONS: The qnr determinant is uncommon among clinical isolates of K. pneumoniae and E. coli, but its identification in three pACBL+ K. pneumoniae from the USA indicates the emergence of this quinolone resistance mechanism.     

Multiplex PCR for detection of plasmid-mediated quinolone resistance qnr genes in ESBL-producing enterobacterial isolates

OBJECTIVES: To develop a rapid and reliable single-tube-based PCR technique for detecting simultaneously the plasmid-mediated quinolone resistance qnrA, qnrB and qnrS genes. METHODS: After multiple alignments, primers were designed to detect known qnr variants (six for qnrA-, six for qnrB- and two for qnrS-like genes). They were used for screening a collection of 64 expanded-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producing enterobacterial isolates from Kuwait, collected from 2002 to 2004, as ESBL genes have been often associated with qnr genes. Sequencing was performed to identify qnr and associated ESBL genes. RESULTS: In optimized conditions, all positive controls (used separately or mixed) confirmed the specificity of the PCR primers. Out of 64 isolates, only 3 isolates were positive for a qnrB-like gene (4.7%), whereas no qnrA-like and qnrS-like gene was detected. A qnrB2 gene was detected in an Enterobacter cloacae K34 (SHV-12+) isolate, whereas qnrB1-like (termed qnrB7) and qnrB6-like (termed qnrB8) genes were identified from E. cloacae K37 (SHV-12+) and Citrobacter freundii K70 (VEB-1b+) isolates, respectively. CONCLUSIONS: We report here a fast and reliable technique for rapid screening of qnr-positive strains to be used for epidemiological surveys. A low prevalence of Qnr determinants among ESBL-producing Enterobacteriaceae was identified in the study with Kuwaiti isolates.