用聚合酶链反应—微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的：建立并优化ＨＢＶ ＤＮＡ的ＰＣＲ－微孔板杂交技术检测体系,使临床ＰＣＲ结果判定更加客观可靠。方法：采用碱裂解标本中的ＨＢＶ、玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ,用５＇端标记生物素的引物进行ＰＣＲ,ＰＣＲ扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后,用酶底物与所标记酶进行显色反应,最后通过测定其光密度来判定结果。结果：建立并优化的ＰＣＲ－微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏     

聚合酶链反应—微孔板杂交技术用于乙型肝炎病毒DNA的检测

目的：建立乙肝病毒DNA的聚合酶链反应（PCR）－微孔板杂交法,使PCR结果判定更加客观。方法：我们使用煮沸裂解法提取模板DNA,将PCR引物5′端标记生物素,用PCR产物与包被有亲和素的微孔板结合,并与含荧光素特异探针杂交,酶标记抗荧光素抗体与之结合进行显色反应,通过测定其吸光度来判断结果,结果：所建立的PCR－微孔板杂交法的阳性检出率（68／160）比PCR－电泳地（60／160）高,检测时间约是Keller法的1／10。结论：该法较敏感、特异和客观地检测临床标本中的乙型肝炎病毒DNA。     

聚合酶链反应一微孔板杂交技术用于乙型肝炎病毒DNA的检测

目的建立乙肝病毒DNA的聚合酶链反应(PCR)-微孔板杂交法,使PCR结果判定更加客观.方法我们使用煮沸裂解法提取模板DNA,将PCR引物5'端标记生物素,用PCR产物与包被有亲和素的微孔板结合,并与含荧光素特异探针杂交,酶标记抗荧光素抗体与之结合进行显色反应,通过测定其吸光度来判断结果.结果所建立的PCR-微孔板杂交法的阳性检出率(68/160)比PCR-电泳法(60/160)高,检测时间约是Kdler法的1/10.结论该法较敏感、特异和客现地检测临床标本中的乙型肝炎病毒DNA.     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

聚合酶链反应检测血清HBV—DNA

评价聚合酶链反应法检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义及其优越 性。方法：用ＰＣＲ法测定８１例血清ＨＢＶ标志物阳性的ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与固相放射免疫测定法作比较。     

聚合酶链反应结合生物素探针杂交检测HBV DNA的应用

本研究将聚合酶链反应和生物素探针点杂交相结合,可直接从5μl 血清中检测到10fgHBV DNA。应用此方法检测20例 HBsAg 和 HBeAg 阳性病例,HBVDNA 均阳性;20例 HBsAg 阳性、HBeAg 阴性病例中,有8例阳性;20例健康献血员中,亦有1例检出 HBV DNA。结果表明这是一种灵敏可靠,适合于基础及临床广泛使用的 HBV DNA 非同位素检测法。     

聚合酶链反应产物微孔板杂交与凝胶电泳的比较

本文对 81例乙肝患者的PCR产物分别采用微孔板杂交和凝胶电泳进行检测 ,同时对微孔板杂交在HBVDNA定量方面的价值进行论证。结果 :微孔板杂交和凝胶电泳的阳性率分别为 70 .4% (5 7/ 81)、5 1.8% (42 / 81) ;PCR产物与微孔板杂交后光密度 (OD)呈正相关 ,血清HBVDNA量与OD值不呈线性关系。提示 :聚合酶链反应产物微孔板杂交技术可替代凝胶电泳 ,但不可以用于血清HBVDNA定量检测     

聚合酶链反应—微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价

OBJECTIVE: To evaluate the clinical application and feasibility of polymerase chain reaction-microwell plate hybridization assay in the detection of Mycobacterium tuberculosis. METHODS: 1130 specimens with strong suspicion for mycobacterium tuberculosis were collected from the hospitals and were detected by fast bacilli stain, culture, PCR-electrophoresis and PCR-microwell plate hybridization respectively. The laboratory results were analyzed in combination with the symptoms and signs of patients and the observations on treatment. Also detected were 100 samples from the clinically evidenced non-tuberculosis patients. RESULTS: In the 100 samples collected from the patients without tuberculosis, the PCR-hybridization method and culture method did not detect Mycobacterium tuberculosis, but the fast bacilli stain method and PCR-electrophoresis method brought out one and two false-positive results respectively. The results of testing the 1030 clinical samples which probably contained Mycobacterium tuberculosis demonstrated that the PCR-hybridization method had the highest positive rate (481/1030) among the four methods, and the positive rates of the other three methods were PCR-electrophoresis (406/1030), culture (365/1030) and fast bacilli stain (256/1030) in proper order. The chi-square test showed that there were significant difference between the PCR-hybridization method and the other three methods respectively (P < 0.0083 or P < 0.0017). CONCLUSION: PCR-Hybridization method is specific, sensitive, accurate and fast in detecting mycobacterium tuberculosis; it is worthy to be used clinically.     

用PCR产物的探针杂交显色法快速检测血清中HBV DNA

0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面，但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低，要求PCR循环的次数应足够多，且操作繁琐，不适宜于大量标本的检测．我们在降低常规PCR循环次数的基础上，通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析，建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法．回材料和方法1．1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪（美国）；DG3022型酶联检测仪（华东电子管厂）；dNTPS（Pr。mega）；TaqDNA聚合酶（Promega）；亲和素（MW：66000，原平生物工程公司…     

荧光定量-聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其临床价值

目的:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)技术检测血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA,评价其临床应用价值。方法:用FQ PCR和酶联免疫吸法(ELISA)检测298份血清HBVDNA拷贝数和免疫学血清标志。结果:27份HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本中,HBVDNA阳性率96.3%,平均拷贝数5.0×107mL;69份中检出率44.9%,平均拷贝数2.1×105mL;43份中检出率34.9%,平均拷贝数8.6×103mL。结论:FQ PCR可以准确、灵敏地判断HBV感染的实际情况及复制水平,可为选择治疗方案和评估药物疗效提供较可靠的理论依据。     

应用竞争聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的探讨竞争聚合酶链反应(C-PCR)在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义。方法根据中国人群最常见的HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,并制备内对照DNA,将适量的内对照DNA加入到常规HBV DNA PCR检测反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增。结果在20μl C-PCR反应体系中,加入约100～500拷贝内对照DNA能够有效的获得共扩增信号;在120个临床血清标本的C-PCR扩增中识别出5个不能有效扩增的标本。结论C-PCR能够有效地指示临床标本HBV DNA体外扩增的假阴性。     

竞争PCR用于乙肝病毒DNA定量检测初探

目的　评估竞争PCR这种检测方法的临床有效性。方法　用竞争PCR和荧光定量PCR两种方法对同一组患者血清HBVDNA进行了定量检测。竞争PCR是通过聚合酶链反应过程中竞争子和目的乙肝病毒DNA竞争同一反应管内的同一引物 ,通过凝胶成像比较目的乙肝病毒DNA和已知量竞争子的亮度 ,推测出目的DNA的含量。再将其结果与荧光定量PCR的结果相比较。结果　竞争PCR与荧光定量PCR检测的结果一致。结论　运用竞争PCR的方法对乙肝病毒DNA进行定量检测结果精确、成本较低 ,简便快速、易于操作 ,可推广使用。     

用压力控制超滤的透析机进行血液透析滤过(附2例报告)

用压力控制超滤的透析机进行血液透析滤过（附２例报告）涂明利，王顺华，吴平勇，田瑛，李新华，姜东升（郧阳医学院附院内科十堰４１２０００）关键词血液透折滤过，慢性肾功能衰竭血液透析滤过（ＨＤＦ）对中小分子物质的清除率优于血液透析（ＨＤ）和血液滤过（ＨＦ）...     

血清HBV-DNA检测的临床价值

选用分子斑点杂交法和多聚酶链反应（ＰＣＲ）观察１０７例疑为乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ检出情况，分析ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢＶ血清抗原抗体标记物检出的关系，初步比较目前采用的这两种方去，认为分子斑点杂交法在应用中优于ＰＣＲ，值得推广。     

PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究

目的为鉴定新分离毒株是否为B病毒.方法根据ScinicarielloF报道的引物,用PCR方法扩增BV147、HSV-1、HSV-2,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化.结果这一对引物可同时对这3种病毒进行扩增,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开.对BV147扩增片段克隆测序的结果证实,其与美国B病毒E2490株部分基因(UL27)相对应位置的核苷酸同源性为100%.结论初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列,证明新分离的病毒为B病毒.     

乙型肝炎病毒感染者血清HBV-DNA载量测定的临床意义

目的:探讨HBV-DNA载量测定的临床意义及其与HBV-M、拉米夫定治疗的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验和荧光定量聚合酶链反应技术对280例乙肝患者HBV-M和HBV-DNA载量进行检测;同时动态检测32例乙肝患者48周拉米夫定治疗期间血清HBV-M和HBV-DNA载量变化。结果:HBeAg(+)组患者血清HBV-DNA载量显著高于HBeAg(-)组(P<0.01);不同临床类型急性肝炎组HBV-DNA载量与其它组比较(P<0.05);其它各组HBV-DNA载量之间比较(P>0.05);拉米夫定治疗12周、24周、48周后HBV-DNA载量迅速下降,与治疗前比较(P<0.001);HBV-DNA载量下降明显较HBeAg血清学转换发生早。结论:HBeAg是反映HBV-DNA复制的重要指标;HBV-DNA载量测定是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标。     

乙型肝炎患者血清中分泌型IgA水平与HBV DNA含量的关系

湖北省鹤峰县人民医院检验科,鹤峰 445800目的 研究乙型肝炎患者血清中分泌型IgA(SIgA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量的关系,为临床提供一个新的评价HBV复制状态及肝细胞损伤的指标。方法 100份经ELISA检测并确诊为乙型肝炎的患者血清用荧光定量PCR检测HBV DNA的拷贝数,用ELISA并经酶标仪定量其SIgA的量。结果 SIgA的含量与HBVDNA的拷贝数的对数呈正相关(r=0.69,P<0.01),在HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )组和HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )组中SIgA含量差异无显著性意义(P>0.05),而HBV DNA拷贝数前者明显高于后者(P<0.01)。结论 乙型肝炎患者血清SIgA的含量在评价HBV的传染性及肝细胞损伤程度方面比乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)更灵敏、准确。     

巢式聚合酶链反应检测脑脊液中单纯疱疹病毒的DNA

应用巢式（ｎｅｓｔｅｄ）聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测患者脑脊液中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ，２５份经鞘内ＩｇＧ抗体确诊的“单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＥ）”患者的ＣＳＦ标本中２３份ＰＣＲ阳性；１０５份ＩｇＧ阴性的“散发性脑炎”患者ＣＳＦ中１５份ＰＣＲ阳性，其中７份阳性标本为发病１周内所取，２份取于发病当日。提示ＰＣＲ更适于ＨＳＥ的早期诊断。     

PCR 法检测 HBV DNA 及其与乙肝病毒标志物关系

目的：了解乙型肝炎患者血清中乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的检出情况，探讨其与乙肝病毒标志物的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２５６例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒五项标志物，即ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｅ。结果：ＨＢＶＤＮＡ的检出率在肝炎患者各临床类型之间无明显差异，而在乙肝病毒五项标志物不同组合存在状态之间有差异，以伴有ＨＢｅＡｇ（＋）的组合形式即ＨＢｓＡｇ（＋），抗 ＨＢｃ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）者、ＨＢＶＤＮＡ检出率最高（９４３４％），乙肝病毒五项标志物中出现抗体及其五项全阴者仍有ＨＢＶＤＮＡ检出。结论：ＨＢｅＡｇ确是ＨＢＶ活动性复制的重要标志，但仅靠乙肝病毒五项标志物的检测来判定ＨＢＶ的复制是不够准确的，同时用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ能更准确反映体内ＨＢＶ复制情况。