Caveolin-1 is involved in radiation-induced ERBB2 nuclear transport in breast cancer cells

This study examined the radiation-induced ERBB2 nuclear transport in the BT474 breast cancer cell line and the relationship between caveolin-1 and radiation-induced ERBB2 nuclear transport. The BT474 cells were treated with herceptin (200 nmol/L), PP2 (a caveolin-1 inhibitor, 100 nmol/L) and irradiation combined or alone. Confocal microscopy was used to observe the nuclear import of ERBB2 and caveolin-1 after irradiation. Western blotting was employed to detect the expression of ERBB2, caveolin-1 and DNA-PKcs after irradiation, and immunoprecipitation to identify the ERBB2 and caveolin-1 complex before perinuclear ERBB2 localization. Confocal microscopy showed the transport of ERBB2 and caveolin-1 from the cell membrane to the nucleus 15 min after irradiation and the proteins accumulated at the perinuclear region within 45 min. Western blotting revealed that the expression levels of ERBB2, caveolin-1 and DNA-PKcs were increased after irradiation and reached a peak 45 min later. Both herceptin and PP2 treatments were found to decrease ERBB2 expression. An immune complex composed of ERBB2 and caveolin-1 was found in the herceptin group after irradiation. It was concluded that after irradiation, ERBB2 may be transported from the cell membrane to the nucleus and activate DNA-PKcs to trigger DNA double-strand break (DSB) repair; caveolin-1 may participate in this process. Treatments involving the downregulation of caveolin-1 may increase the radio-sensitization of breast cancer cells.     

分化程度不同的鼻咽癌细胞株X线辐射后miR-7的表达差异

目的 探讨不同分化程度的鼻咽癌细胞株X线辐射后miR-7表达的变化.方法 2种细胞均分为对照组(未辐射)、2 Gy组、6 Gy组和10 Gy组,X线辐射细胞株,线性二次模型拟合CNE-1、CNE-2细胞存活曲线,Trizol法提取细胞总RNA.茎环法特异性逆转录miR-7,染料法实时定量PCR,以对照组CNE-1细胞为参照样本,△△Ct法得出各样品miR-7的相对倍数.结果 对照组CNE-2细胞miR-7的量是CNE-1的2.51倍.2 Gy组CNE-1细胞miK-7表达量增加,CNE-2细胞则由早期的49.44下降到晚期的0.15.6 Gy组两种细胞miR-7含量差别不大.10 Gy组CNE-1的miR-7含量高于CNE-2. 结论 分化程度不同的鼻咽癌细胞经不同剂量的X线辐射后,miR-7表达量各不相同.分化程度不同的鼻咽癌细胞的放射敏感性差异,可能是由调控miR-7表达能力不同造成的.     

MicroRNAs in breast cancer and breast cancer stem cells and their potential for breast cancer therapy

The discovery of the first miRNA,lin-4,in Caenorhabditis elegans initiated a new era of miRNA biology.Since then,thousands of miRNAs have been identified and annotated,many of which have been shown to play roles in a variety of biological processes,including development,differentiation,apoptosis,proliferation,and cell death.1 Furthermore,growing evidence indicates that miRNA deregulation is a critical cause of cancer formation.The biogenesis,function,and potential application of miRNAs have become active areas of research.With the development of molecular biological technologies,such as northern blotting with radio-labeled probes,cloning,quantitative PCR,serial analysis of gene expression (SAGE)-based techniques,bead-based profiling methods,and oligonucleotide microarrays,2 it is possible to conduct miRNA research precisely and comprehensively.     

三阴性乳腺癌和HER-2过表达乳腺癌的临床病理特征比较

目的探讨三阴性乳腺癌和HER-2过表达乳腺癌的临床病理特征。方法选取210例雌、孕激素受体均为阴性的乳腺癌患者为研究对象,根据HER-2检测结果将其分为两组,三阴性乳腺癌组（Estrogen Receptor ER、Progesterone Receptor PR和HER-2表达阴性）85例,HER-2过表达乳腺癌组（ER、PR阴性和HER-2表达阳性）125例,比较两组发病部位、病理类型、肿瘤直径大小、淋巴结转移、组织学分级、TNM分期、p53表达及Ki-67表达情况。结果两组在发病部位上差异无统计学意义（P=0．4317）,均好发于外上象限部位,分别占58．82％和46．4％;两组在病理类型、肿瘤直径大小、TNM分期、p53表达上差异无统计学意义（P=0．6146、P=-0．2744、P=0．5909、P=0．6002）,其中浸润性导管癌、直径为2-5cm、II期所占比例均最高;三阴性乳腺癌组淋巴结转移以阳性为主,占56．47％,HER-2过表达乳腺癌组以阴性为主,占67．2％,差异有统计学意义（P=．0007）;两组在组织学分级上,差异有统计学差异（P=0．0278）,其中组织学2级所占比例最高;三阴性乳腺癌组在Ki-67表达上与HER-2过表达组相比,有差异有统计学差异（P=0．0041）。结论三阴性乳腺癌和HER-2过表达乳腺癌的病理类型均好发在外上象限,以浸润性导管癌为主,就诊时均是II期病人为主。三阴性乳腺癌较HER-2过表达乳腺癌的侵袭性更强,细胞增殖更活跃,组织学分级更高,更易发生淋巴结转移,因此预后更差。     

RunX2的真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的：构建人 RunX2真核表达载体,观察 RunX2对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法运用逆转录 PCR （RT-PCR）扩增、酶切、连接等基因重组技术将人 RunX2基因插入 pcDNA3．1真核表达载体中;并经酶切、PCR、测序鉴定;将构建的 RunX2真核表达载体瞬时转染 MCF-7细胞,利用 Western blot 法检测 RunX2蛋白表达,用 MTT 实验和细胞划痕实验检测其对乳腺癌细胞的生物学影响。结果构建的 RunX2真核表达载体在 MCF-7细胞中高表达 RunX2蛋白;发现高表达 RunX2的 MCF-7细胞活力增加,移动能力增强。结论构建的 RunX2真核表达载体能促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。     

Silencing of osteopontin promotes the radiosensitivity of breast cancer cells by reducing the expression of hypoxia inducible factor 1 and vascular endothelial growth factor

Background  Osteopontin (OPN) is a secreted phosphoglycoprotein (SSP) that is overexpressed in a variety of tumors and was regarded as a molecular marker of tumors. In this study, we intended to demonstrate the role of OPN in human breast cancer cell line MDA-MB-231.

Methods  Recombinant plasmid expressing small interfering RNA (siRNA) specific to OPN mRNA was transfected into MDA-MB-231 cells to generate the stable transfected cell line MDA-MB-343, and the empty plasmid tansfected cells (MDA-MB-neg) or wildtype MDA-MB-231 cells were used as control cells respectively. Expression of OPN, hypoxia inducible factor-1 (HIF-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) proteins was analyzed by Western blotting analysis. The radiosensitivity of cells was determined by detecting cell apoptosis, cell proliferation and cell senescence.

Results  HIF-1 and VEGF proteins in MDA-MB-343 cells were significantly downregulated upon the efficient knockdown of OPN expression under either hypoxia or normoxia environment. Moreover, expression of OPN protein was upregualted upon hypoxic culture. Stable OPN-silencing also decreased cell invasion, increased cell apoptosis and cell senescence, as well as reduced clonogenic survival, resulting in increase radiation tolerance.

Conclusions  Suppression of OPN gene expression can enhance radiosensitivity and affect cell apoptosis in breast cancer cells. OPN seems to be an attractive target for the improvement of radiotherapy.

     

Pirh2和Naked2在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：分析乳腺癌组织中Pirh2和Naked2的表达情况及其临床意义。方法：随机选取在2011年1月—2013年12月期间收治的96例乳腺癌标本作为观察组,同时选取癌旁组织作为对照组,应用免疫组织化学方法对Pirh2和Naked2表达情况进行检测,分析Pirh2和Naked2表达与乳腺癌病理分级的关系及Pirh2和Naked2两者的相关性。结果：Pirh2在乳腺癌组织中高表达,癌旁组织中低表达,Naked2在乳腺癌组织中低表达,癌旁组织中高表达(P＜0.05);年龄、肿瘤大小与癌中Pirh2和Naked2的表达无关(P>0.05);肿瘤病理分级和淋巴结转移与Pirh2和Naked2的表达相关(P＜0.05);Pirh2和Naked2的表达呈负相关。结论：Pirh2和Naked2对乳腺癌的生物学行为的判断及预后有一定的提示作用。     

RASAL2在乳腺癌中的表达及临床意义

应用免疫组织化学法检测60例乳腺癌组织及其癌旁组织中大鼠肉瘤蛋白活化因子2(RASAL2)的表达情况,分析RASAL2与乳腺癌临床发展及病理特征的相关性.结果显示,RASAL2在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(χ2=25.145,P<0.001).RASAL2在Luminal B型乳腺癌中的表达明显低于Non-Luminal B型,差异有统计学意义(χ2=4.319,P=0.038).且RASAL2的表达与雌激素受体、孕激素受体、淋巴结转移、TNM分期和有无脉管侵犯有关(P<0.05).RASAL2在乳腺癌中低表达,且与乳腺癌的发展和侵袭转移有关.     

PRMT2及其剪接体在乳腺癌MCF-7细胞中的亚细胞定位及意义

目的：构建蛋白质精氨酸甲基转移酶2( PRMT2)及其差异剪接体与绿色荧光蛋白( GFP)的真核表达载体,转染后观察其融合蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达及亚细胞定位,为进一步研究PRMT2基因及其新的差异剪接体在乳腺癌中的作用奠定基础。方法以pGEM-T-PRMT2/α/β/γ载体为模板,设计引物,PCR扩增目的基因,并将PCR产物克隆至pcDNA3.1/NT-GFP-topo载体,转化后将阳性克隆扩增,对 PCR 产物进行跑胶鉴定和测序。提取 pcDNA3.1/NT-GFP-PRMT2/α/β/γ及空载体pcDNA3.1/NT-GFP质粒,用脂质体介导转染MCF-7细胞,在激光共聚焦显微镜下,观察外源性PRMT2/α/β/γ融合蛋白在MCF-7细胞中的亚细胞定位。采用Western blot法检测各重组融合蛋白在MCF-7细胞中的表达。结果各GFP在细胞中均有表达,但其在细胞中的分布位置不一致。 PRMT2α与PRMT2γ的融合蛋白同PRMT2的分布一致,均聚集于核仁外的核浆,胞质中有少许分布;而PRMT2β和空载体的荧光蛋白的分布一致,都均匀分布于细胞的胞质和胞核,包括核仁部分。 Western blot法检测表明各重组融合蛋白在MCF-7细胞中均有表达。结论 PRMT2及其各剪接体的亚细胞定位不同,可能提示其在功能方面存在差异。     

miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的：观察miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：乳腺癌T47D和MDA-MB-361细胞分别给予0.0、2.5和5.0 Gy γ射线照射,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程,实时定量PCR法检测72 h内细胞中miRNA-21表达水平。T47D和MDA-MB-361细胞分别转染anti-miRNA-21序列（anti-miRNA-21组）和阴性对照序列（阴性对照组）,并设置未转染细胞为空白对照组,实时定量PCR法检测各组细胞中miRNA-21表达水平;经0.0和5.0 Gy γ射线照射后,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程。结果：经5.0 Gy γ射线照射后,T47D细胞存活率明显高于MDA-MB-361细胞（P<0.05）;与0.0 Gy照射组比较,5.0 Gy照射组T47D和MDA-MB-361细胞G₂/M期细胞百分率均明显升高（P<0.05）,miRNA-21表达水平均明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）;给予5.0 Gy γ射线照射后,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞存活率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,T47D细胞G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.05）,而subG₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。结论：miRNA-21表达下调能够增强乳腺癌细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制细胞周期G₂/M期阻滞有关。     

Intratumoral heterogeneity of HER2 gene amplification in occult breast cancer

Occult breast cancer （OBC） is an uncommon type of breast cancer, with palpable masses in the axillary area as the initial symptom. We report a case of OBC with HER2 genetic heterogeneity and discuss the impact of an unusual HER2 amplification pattern.A 56-year-old female was discovered a palpable mass in the right axillary area. She underwent a lymph node excisional biopsy at another hospital approximately one month before referral to our hospital service for further evaluation. The biopsy showed lymph tissue with tumor cell infiltrating in the form of sheets or nests. The tumor cells were larging in size, obviously atypical, and showed prominent nucleoli and intracellular keratosis. Mammography, chest X-ray, chest computed tomography （CT）, abdominal ultrasonography （US）, and positron emission tomography- CT （PET-CT）, which were also performed at the initial hospital, showed no abnormal findings.     

ACE2对乳腺癌预后的影响及其潜在机制

研究跨膜蛋白血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2,ACE2）对乳腺癌预后的影响及其潜在机制。使用公共数据库分析ACE2表达和与乳腺癌患者临床病理特征、患者预后及免疫微环境的关系;结合体外实验分析ACE2在乳腺癌中的作用机制。研究结果显示,ACE2在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺正常组织,其表达与乳腺癌患者的年龄、M分期和N1mi期显著负相关（P < 0.05）。ACE2高表达的Luminal型乳腺癌患者预后不良,而在三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）亚型中,ACE2则展现出不同的预后意义。此外,ACE2还与肿瘤组织的代谢和免疫微环境密切相关。体外实验表明,ACE2在MDA-MB-231细胞中低表达,并可能通过下调基质金属蛋白酶2（MMP2）来抑制细胞的进展。研究结果提示,ACE2在乳腺癌中低表达,与患者的预后及代谢和免疫微环境密切相关,其可能是通过MMP2途径抑制TNBC细胞进展。     

AKT2在乳腺癌中的表达及其与微血管密度的相关性研究

目的:探讨AKT2在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达及其微血管密度变化,分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法:用免疫组化SP法检测92例乳腺癌组织、35例正常乳腺组织中AKT2的表达及微血管密度。结果:乳腺癌、正常乳腺组织AKT2阳性表达率分别是60%(55/92)和11.43%(4/35),乳腺癌组织AKT2阳性表达率明显高于正常乳腺组织(P<0.05)。AKT2的阳性表达与乳腺癌的组织学分级、肿瘤大小、ER、PR表达无关(P>0.05),同淋巴结转移和TNM分期、CerbB-2差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织MVD明显高于正常乳腺组织MVD:(36.94±1.60vs6.74±2.87,P<0.05)。MVD值与乳腺癌的组织学分级、ER、PR表达无关(P>0.05),在肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期、CerbB-2表达差异有统计学意义(P<0.05)。AKT2阳性表达的乳腺癌MVD为:40.87±10.97,阴性表达MVD为:30.25±9.49,两者之间的差别有统计学意义(P<0.05)。结论:AKT2高表达与微血管生成参与乳腺癌的发生、发展和浸润转移,可作为判断乳腺癌生物学行为的重要指标。     

46例早期乳腺癌保乳术后IGRT疗效分析

目的:观察早期乳腺癌保乳术后影像引导适形调强放疗(IGRT)临床疗效及不良反应。方法:收集2010年10月²013年3月,我科治疗的46例早期乳腺癌患者保乳术后行IGRT的临床资料,评价疗效和不良反应。结果:经过保乳术后进行IGRT的患者,在中位19个月的随访后,无远处转移,除1例外无出现局部复发。患者的放疗反应轻微。结论:早期乳腺癌保乳术后IGRT安全有效,患者副作用可耐受。     

血清HER-2neu ECD水平与乳腺癌临床特征及组织中HER-2neu表达的相关性

观察乳腺癌患者血清人类表皮生长因子受体-2（HER-2neu）胞外域部分（ECD）水平,探讨其与乳腺癌临床特征及组织中HER-2neu表达的相关性。方法选取2013 年1 月-2015 年12 月浙江省肿瘤医院乳腺癌患者50 例作为乳腺癌组,健康志愿者50例作为对照组。采用化学发光法测定血清HER-2neu ECD水平。采用免疫组织化学法测定乳腺癌组织中HER-2 蛋白的表达。结果乳腺癌组血清HER-2neu ECD 水平高于对照组（ p<0.05）,乳腺癌组血清HER-2neu ECD阳性率高于对照组（ p<0.05）。50 例乳腺癌组织标本中, HER-2neu阳性表达20 例,阳性率为40.0%。乳腺癌患者TNM 分期Ⅲ期、雌激素受体（ER）阴性、孕激素受体（PR）阴性及肿瘤直径≥3 cm患者血清HER-2neu ECD阳性率高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期及ER 阳性、PR 阳性、肿瘤直径<3 cm患者（p <0.05）。20例乳腺癌组织HER-2阳性患者中,9例血清HER-2neu ECD阳性;30 例乳腺癌组织HER-2阴性患者中,29 例血清HER-2neu ECD阴性,两种方法一致性较好（Kappa=0.455,=0.000）。结论乳腺癌患者血清HER-2neu ECD 水平升高、乳腺癌组织中HER-2 蛋白表达的一致性较好、血清HER-2neu ECD水平与TNM 分期、ER、PR及肿瘤大小相关,可作为乳腺癌组织中HER-2 蛋白表达的补充检测方法。     

乳腺癌pS2蛋白表达的临床意义

目的 探讨乳腺癌pS2蛋白表达与临床病理因素的关系，评估其作为乳腺癌预后判断和内分泌治疗指标的价值。方法 采用免疫组化法检测75例乳腺癌组织中pS2蛋白及雌激素受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)的表达，分析pS2蛋白阳性表达与病人年龄、月经状况、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、病理类型和ER、PR的关系。结果 pS2蛋白表达阳性率为33．3％，其表达与病人年龄和病理类型有关，与肿瘤大小无关，绝经前较绝经后、腋窝淋巴结有转移者较无转移者pS2阳性率高，但无统计学差异。pS2蛋白表达与ER、PR有关，但并不完全一致。结论 乳腺癌pS2蛋白的表达与部分临床病理因素有关，能在一定程度上反映病人的预后。pS2阳性表达可能是乳腺癌内分泌治疗的合理指征，但pS2不能取代ER、PR的检测。     

NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌组织中的表达及意义

目的评估NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌组织中的表达水平和临床意义。方法使用免疫组织化学方法,检测Luminal型乳腺癌患者组织标本中NUAK2蛋白的表达水平,与癌旁组织进行比较,并分析其与患者的临床特征、病理特征及预后的关系。结果NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁乳腺组织（P=0.032）;术后因肿瘤复发而死亡的患者,其肿瘤组织中的NUAK2蛋白表达水平也较高（P=0.037）;NUAK2蛋白高表达组患者更容易出现淋巴结转移（P=0.038）,且无复发生存率（P=0.035）和总体生存率（P=0.024）也明显下降;NUAK2蛋白表达水平升高与患者乳腺癌复发明显相关（P=0.011）。结论NUAK2蛋白在Luminal型乳腺癌组织中高表达,其表达水平与淋巴结的转移、肿瘤的复发和患者的预后存在相关性,推测NUAK2可能是乳腺癌的一个癌基因。     

导管来源乳腺癌细胞MMP -9与MMP-2的表达与其分化、转移的关系

[目的 ]探讨乳腺癌中MMP - 9和MMP - 2的表达与其分化、转移的关系。 [方法 ]免疫组织化学方法检测 6 0例导管浸润型乳腺癌患者癌细胞MMP - 9和MMP - 2表达 ,其中出现淋巴结转移 34例 ,未出现淋巴结转移 2 6例 ;高、中、低分化分别为 6、2 8、2 6例。 [结果 ]MMP - 9在淋巴结转移与非淋巴结转移组的阳性表达率分别为 88.2 3%与 5 7.6 9% (P <0 .0 1) ;在高、中、低分化组的阳性表达率分别为 16 .6 7%、78.5 7%与 88.4 6 % ,高分化组与中低分化组间差异显著 (P <0 .0 1) ;MMP - 2在淋巴结转移与非淋巴结转移组的阳性表达率分别为 91.17%与 6 1.5 3% (P <0 .0 1) ;在高、中、低分化组的阳性表达率分别为 16 .6 7%、81.14 %与 88.4 6 % ,高分化组与中低分化组间差异显著 (P <0 .0 1)。 [结论 ]乳腺癌细胞MMP - 9与MMP - 2的表达可能提示肿瘤的恶性度与淋巴结转移能力。     

miR-4324与Talin2在乳腺癌中高表达

目的 探讨miR-4324对踝蛋白2(Talin2)调控和乳腺癌细胞的影响及临床意义。方法 利用免疫组化法检验Talin2在乳腺癌组织（BCT）和对应癌旁乳腺组织（PCBT）的表达,结合病理资料分析Talin2与乳腺癌预后及病理特征间的关联;qRT-PCR法测定miR-4324在BCT和PCBT的表达;人乳腺癌细胞株（SKBR-3）体外培养,分为Control对照组（正常培养)及相关转染组（转染相关片段）：miR-4324 mimics组;miR-4324 inhibitor组;miR-4324 NC组;si-Talin2组;miR-4324 inhibitor+si-Talin2组。通过细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭实验,检测SKBR-3的生物学活性改变;通过qRT-PCR及Western-blot实验测定Talin2的表达;利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达;利用Transwell回复实验验证miR-4324调控Talin2影响SKBR-3细胞的迁移能力。结果 Talin2在BCT中的表达高于PCBT,并与淋巴结转移、HER-2的高表达有关（P<0.0...     

Expression of FANCD2 in sporadic breast cancer and clinicopathological analysis

FANCD2 is involved in DNA damage repair and maintenance of chromosome stability.The purpose of this study was to investigate the expression of FANCD2 in sporadic breast cancer tissues and its association with clinicopathological features.A total of 162 Chinese women with invasive breast carcinoma who had no family history in first-degree relatives and 12 normal breast tissues were examined.The expression of FANCD2 was detected by immunohistochemical staining based on a tissue microarray technique.SAS system...