不同途径导入rAAV-VEGF165基因对大鼠脑缺血边缘区血管内皮细胞生长因子表达的影响

背景VEGF基因可促进脑缺血边缘区的血管生长,哪种导入途径的表达效果更理想值得探讨.目的探讨脑池内及静脉导入rAAV-VEGF165基因对大鼠脑缺血边缘区血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达的影响,为VEGF基因治疗脑缺血提供实验依据.设计析因设计.地点和对象实验地点深圳市人民医院动物实验中心;暨南大学医学院病理教研室.健康雄性SD大鼠48只,SPF级.干预措施用线栓加环扎法建立SD大鼠持续性大脑中动脉闭塞(middlecerebral artery occlusion,MCAO)模型.SD大鼠48只,随机分为脑脊液导入组、静脉导入组、梗死组和假手术组,治疗组于术后24 h内将rAAV-VEGF165基因通过小脑延髓池或静脉内导入.各组分别取6只大鼠于术后7 d和14 d断头取脑,免疫组织化学染色检测VEGF的表达.主要观察指标各组大鼠不同时间脑组织VEGF阳性细胞密度.结果最终进入统计分析的大鼠保持为4组,每组12只,无缺失值.各组脑缺血边缘区VEGF阳性细胞密度(个/高倍视野,×400)分别为7 d组脑脊液导人组74.90±2.33、静脉导人组36.27±2.61、梗死组24.27±1.69和假手术组5.65±0.47(P＜0.05);14 d组脑脊液导入组95.03±1.55、静脉导人组69.17±4.29、单纯梗死组29.95±1.05和假手术组7.30±0.76(P＜0.05).结论在rAAV为载体介导下,VEGF165基因可以通过脑池内及静脉内导人转染到大鼠缺血脑组织中并表达VEGF,促进新生血管的形成,保护神经细胞,治疗脑缺血.     

血管内皮生长因子基因诱导脑梗死大鼠热休克蛋白70变化与其梗死体积的关系

目的：观察血管内皮生长因子165基因治疗大鼠脑梗死前后热休克蛋白70表达的变化，进一步研究热休克蛋白70在脑梗死中的神经保护作用。方法：实验于2003-03／2004-03在郧阳医学院附属太和医院神经科学研究所完成。选择雌性Winstar大鼠40只，常规饲养观察1周后，随机分为正常对照组5只，不造模，余35只造模后分为假手术组5只，单纯梗死组10只，空载质粒对照组10只，血管内皮生长因子基因治疗组10只。采用改进的线栓法制成Wistar大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型，空载质粒对照组和血管内皮生长因子基因治疗组用50μL微量进样器进针约3．5mm，分别注入5μL空载质粒和质粒载体与血管内皮生长因子165基因构成的重组DNA到梗死区．7d后断头取脑。用热休克蛋白70免疫组化染色的方法显示脑中的热休克蛋白70的表达情况；用苏木精-伊红染色显示梗死区，用图像分析仪测定梗死面积。结果：40只大鼠全部进入结果分析。①热休克蛋白70的着色部位在神经细胞的细胞浆和细胞膜，黄褐色细胞即为阳性细胞。②热休克蛋白70的表达：正常对照组与假手术组基本相似[(3．00&;#177;0．89)个／高倍视野，(6．31&;#177;0．63)个／高倍视野，(P&;gt;0．05)]，单纯梗死组与空载质粒对照组基本相似[(23．98&;#177;3．25)个／高倍视野，(23．31&;#177;2．77)个／高倍视野，(P&;gt;0．05)]，单纯梗死组比正常对照组和假手术组明显增加(P&;lt;0．01)。血管内皮生长因子基因治疗组均明显高于与各组[(57．60&;#177;3．46)个／高倍视野(P均&;lt;0．01)]。⑧血管内皮生长因子基因治疗组梗死体积百分率[(9．52&;#177;1．99)％]显著低于单纯梗死组(22．31&;#177;4．18)％和空载质粒对照组[(24．48&;#177;3．51)％，P&;lt;0．01]。空载质粒组与单纯梗死组梗死体积百分率比较基本一致(P&;gt;0.05)。结论：血管内皮生长因子基因可诱导热休克蛋白70的表达增高，脑梗死体积百分率降低。说明热休克蛋白70表达增多与脑梗死体积缩小之间有一种正向关系，亦证明其可能是与缺血有关的一种保护性蛋白。     

预先电刺激小脑顶核对缺血心肌神经生长因子基因表达的影响

目的：观察预先电刺激小脑顶核对心肌梗死大鼠心脏神经生长因子mRNA表达的影响。方法：实验于2003—03／06在重庆医科大学附属第一医院心血管疾病研究所完成。选用Wistar大鼠98只。将其中90只随机分为3组，每组30只：①心肌梗死组。结扎左冠状动脉前降支。②电刺激小脑顶核组，预先电刺激小脑顶核1h再予以左冠状动脉前降支结扎。③毁损小脑顶核组，毁损小脑顶核5d后电刺激小脑顶核1h，再行左冠状动脉前降支结扎。又分左冠状动脉前降支结扎后1。7，21d3个时间点，各10只。另设假手术组(n=8)。各组于相应时间点处死大鼠后，取心肌梗死区和非梗死区组织标本，用反转录一聚合酶链反应技术检测标本神经生长因子mRNA表达。结果：去除死亡、心肌未梗死、小脑顶核电刺激或毁损失败的大鼠。最终54只大鼠资料完整。心肌梗死组、电刺激小脑顶核组、毁损小脑顶核组、假手术组分别为13。20，13，8只。①结扎左冠状动脉前降支后1，7，21d，梗死区神经生长因子mRNA表达量：心肌梗死组明显低于假手术组(q=10．047，13．869。7．044，P&;lt;0．01)；电刺激小脑顶核组明显高于心肌梗死组(0．42&;#177;0．07，0．46&;#177;0．07，0．51&;#177;0．08；0．26&;#177;0．08。0．19&;#177;0．06．0．36&;#177;0．07，q=5．358，9．888，4．822，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。②心肌非梗死区1，7，21d神经生长因子mRNA表达：心肌梗死组均明显低于假手术组和电刺激小脑顶核组(0．36&;#177;0．07，0．30&;#177;0．07，0．36&;#177;0．07；0，56&;#177;0．07。0．56&;#177;0．07．0．56&;#177;0．07；0．49&;#177;0．09，0．46&;#177;0．08，0．59&;#177;0．09，q：4．099～8．947，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组神经生长因子mRNA的表达量与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：大鼠心肌梗死后梗死区与非梗死区神经生长因子mRNA表达下调，电刺激小脑顶核可上调神经生长因子mRNA表达，起到神经保护作用。     

神经元谷氨酸转运体反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经保护作用

目的：测定神经元谷氨酸转运体(excitafory amino acid cartier 1，EAAC1)反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响，探讨脑缺血神经保护新方法。方法：将大鼠分为假手术组、模型组、反义寡核苷酸组(简称反义组)和正义寡核苷酸组(简称正义组)，用插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。运用Western blot法、神经功能缺损评分、TYC染色、尼氏染色观察缺血区EAAC1表达和EAAC1反义寡核苷酸对缺血大鼠神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响。结果：模型组缺血区EAAC1表达(0．61&;#177;0．03)明显高于假手术组(0．20&;#177;0．01)，差异有显著性意义(F=49．49，P&;lt;0．01)，而反义组表达(0．31&;#177;0．01)低于模型组，差异有显著性意义(F=49．33，P&;lt;0．05)。反义组大鼠梗死体积(101．33&;#177;15．08)mm^3显著小于模型组(140．5&;#177;20．27)mm^3，差异有显著性意义(F=6．66，P&;lt;0．01)，反义组大鼠神经功能缺损评分(3．33&;#177;0．41)分，显著高于模型组(1．42&;#177;0．34)分，差异有显著性意义(F=48．51，P&;lt;0．01)，海马各区数密度值均高于模型组(P&;lt;0．01和P&;lt;0．05)。结论：EAAC1反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤有神经保护作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

胶质细胞源性神经营养因子对脑出血大鼠神经功能的保护作用

目的：研究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic faetor，GDNF)对脑出血大鼠的保护作用，探讨其发生机制。方法：克隆胚胎鼠的GDNF基因，构建pCDNA3-GDNF-GFP质粒，注射于大鼠脑出血部位。选用成年SD大鼠制备脑出血模型，共分9组，每组20只，假手术Ⅰ组，脑出血Ⅰ组，干预Ⅰ组观察大鼠行为学、脑组织含水量、Na^+，K^+离子浓度的变化；假手术Ⅱ组，脑出血Ⅱ组，干预Ⅱ组观察血脑屏障的改变；假手术Ⅲ组，脑出血Ⅲ组。干预Ⅲ组观察组织形态学和GDNF。阳性细胞的表达。结果：出血组和干预组相比，神经缺损评分在出血后24h为8．53&;#177;1．44和8．34&;#177;1．28(P&;gt;0．05)，72h，7d，14d为7．58&;#177;1．08，5．46&;#177;0．74，3．06&;#177;0．43和4．21&;#177;0．76，3．25&;#177;0．52，1．92&;#177;0．26(P&;lt;0．01)。72h，7d时脑组织含水量为(84．26&;#177;0．64)％，(80．38&;#177;0．86)％和(78．26&;#177;0．42)％，(77．51&;#177;0．33)％(P&;lt;0．01)。72h，7d时Na^+，K^+离子浓度两组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。干预组坏死体积较出血组减小，GDNF阳性细胞表达明显增加(P&;lt;0．01)。结论：GDNF能改善出血大鼠行为学，减轻脑水肿，促进神经功能恢复，增加脑组织抗损伤能力，有一定的治疗意义。     

大鼠脑出血后血肿周围组织活化凋亡蛋白酶3表达与大承气汤的干预

目的：观察大鼠脑出血后血肿周围神经元活化凋亡蛋白酶3的表达和血肿变化，及大承气汤的干预作用。方法：实验于2003-10／2004-03在中南大学湘雅医院中西医结合研究所完成。健康SD大鼠65只随机分成4组，分别为正常组(5只)，假手术组(20只)，模型组(20只)，大承气汤组(20只)。除正常组外，其余3组设4个时间点：6h，1，3，5d。每个时间点5只。采用免疫组化方法检测大鼠脑内血肿周围活化凋亡蛋白酶3的表达，用直尺测量不同时间点大鼠脑内血肿的最大直径。结果：65只大鼠进入结果分析。①活化凋亡蛋白酶3阳性细胞计数：正常组未见阳性细胞表达。造模后模型组血肿周围于6h出现阳性表达细胞．1d阳性细胞计数达高峰，3d出现轻度下降，5d明显下降[模型组：6h(24．600&;#177;2．338)个，1d(115，900&;#177;2．215)个，3d(91．940&;#177;3，177)个。5d(67．900&;#177;2．261)个[。与假手术组比较差异明显[假手术组：6h(3．120&;#177;2．235)个，ld(1．360&;#177;2．097)个，P&;lt;0.01]。大承气汤组与同时间点模型组比较：6h计数无明显差异，1，3，5d均存在明显差异[大承气汤组：1d(114．440&;#177;3．239)个，3d(84．420&;#177;3，648)个，5d(51．460&;#177;3，038)个．P&;lt;0．05或P&;lt;0.01]。②血肿体积变化情况：造模后血肿于1d达到最大，3d有所变小，5d变小明显；大承气汤组在5d缩小程度与模型组比较有明显差异[大承气汤组5d(2．000&;#177;0．187)mm，模型组5d(2．480&;#177;0．148)mm，(t=4．496，P&;lt;0．01)]。但在6h，ld，3d与模型组比较血肿缩小程度差别无显著性意义。结论：大鼠脑出血后血肿周围神经元活化凋亡蛋白酶3表达明显上调；大承气汤能减少活化凋亡蛋白酶3的表达，阻止神经元的凋亡，同时也具有一定的促进血肿吸收的作用。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白的干预

目的：探讨灯盏花素干预脑缺血再灌注损伤后对Bcl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白的表达影响及其对大脑损伤的保护作用。方法：实验于2004-06／09在华中科技大学同济医学院生理学实验室进行，取SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组和灯盏花组3组，每组10只。假手术组不造模，模型组和灯盏花组建立脑缺血再灌注模型后分别腹腔注射生理盐水1mL／b和灯盏花素注射液1mL／kg。采用免疫组化法测定灯盏花素干预大鼠脑缺血24h后对BCl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达的变化?结果：30只大鼠均进入结果分析。①Bcl-2蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数与假手术组相比有显著差异[(40．83&;#177;2．69),(2．02&;#177;0．18)个／视野，t=7．12，P&;lt;0．01]，而灯盏花组又明显高于模型组[(64．88&;#177;3．13)个／视野，t=9．34，P&;lt;0．01]。②c-Fos蛋白：模型组大鼠脑组织中c-Fos蛋白表达水平显著高于假手术组[(72．47&;#177;4．23)．(2．30&;#177;0．34)个／视野，t=10．22，P&;lt;0．01]；灯盏花组较模型组明显减少[(48．23&;#177;5．12)个／视野，t=7．55，P&;lt;0．01]。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数明显高于假手术组[(126．3l&;#177;7．12)，(2．30&;#177;0．64)个／视野，t=15．74，P&;lt;0．01]，灯盏花组大鼠脑组织中阳性细胞数明显低于模型组[(42．22&;#177;4．24)个／视野，t=7．36．P&;lt;0．01]。结论：灯盏花素可能通过上调原癌期蛋白质c-bcl-2下调原癌基因蛋白质C-fos和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白水平，从而，抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,对脑损伤产生保护作用。     

脑缺血预处理对再次脑缺血大鼠神经功能、脑含水量及脑组织中Bcl-xl和P53蛋白表达的影响

目的：研究脑缺血预处理对再次脑缺血的神经功能、脑含水量以及脑组织中Bcl-xl蛋白、P53蛋白表达的影响，探讨脑缺血耐受引起的脑保护机制。方法：实验于2002-09／2003-10在锦州医学院科学实验中心进行，取48只雄性SD大鼠随机分成3组。假手术组(n=16)：颈部正中切口暴露颈总动脉后缝合皮肤；预处理组(n=16)：按Longa线栓法制成局灶-局灶脑缺血模型，将事先备好的线栓经右颈内动脉人颅插至大脑中动脉；缺血30min后，拔出线栓，缝合血管和皮肤；24h后如上步骤线栓再插至右侧大脑中动脉，再缺血时间为24h：脑缺血组(n=16)：线栓插至右侧大脑中动脉，缺血时间为24h。分别观察3组动物的以下指标：按Bederson6级5分进行神经功能评价；以干湿重法计算脑含水量；用免疫组织化学方法分别检测大鼠额顶叶皮质、海马及纹状体中Bcl-xl蛋白及．P53蛋白的表达。结果：神经功能评分：假手术组为0分，预处理组为(1．12&;#177;0．64)分，脑缺血组为(2．33&;#177;0．98)分，预处理组神经功能评分明显低于脑缺血组(P&;lt;0．05)。脑含水量测定：假手术组为(66．02&;#177;0．49)％，预处理组为(79．13&;#177;0．84)％，脑缺血组为(84．59&;#177;1．19)％，预处理组明显低于脑缺血组(P&;lt;0．05)。蛋白表达检测：预处理组额顶叶皮质、海马及纹状体中Bcl-xl蛋白表达均高于脑缺血组(P&;lt;0．05)，P53蛋白表达均低于脑缺血组(P&;lt;0．01)。结论：预处理组神经功能好于脑缺血组，再次缺血时脑水肿程度减轻，抑凋亡基因bcl-xl表达增多，促凋亡基因P53表达减少，提示缺血预处理后的脑组织耐受性明显增强，对再次缺血产生保护作用。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞影响的初步研究

目的：观察中药补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后内源性神经干细胞(neural stem cells，NSC)反应的影响探讨其可能机制。．方法：84只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组，采用线栓法复制大鼠脑缺血模型，分别给予不同处理，于术后12h，1，3，5，7d处死动物，运用免疫组织化学方法检测脑缺血后各组NSC的激活。另取5只大鼠为正常对照组。结果：正常大鼠脑组织中存在少量NSC，主要分布在皮质区；脑缺血后，NSC增殖，以皮质、缺血周围区增加明显，健侧海马区可见NSC激活；1d开始增多，5d达高峰，模型组1，3，5，7dNSC数分别为(10．3&;#177;1．3)，(14．2&;#177;1．7)，(18．3&;#177;1．2)，(16．4&;#177;1．6)个，补阳还五汤则分别为(10．8&;#177;1．1)，(15．4&;#177;1．4)，(23．5&;#177;1．1)，(22．0&;#177;1．4)个，两组比较NSC数在5，7d时间点差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。’结论：局灶性脑缺血后，NSC激活、增殖。补阳还五汤能促进NSC的增殖。     

脑缺血再灌注损伤后炎症反应与赛来昔布的脑保护作用

目的：细胞间黏附分子1及白细胞浸润参与了脑缺血再灌注损害过程，观察赛来昔布对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死体积、脑缺血坏死区周边细胞间黏附分子1和白细胞浸润的影响，探讨其是否具有脑保护作用。方法：实验于2003-12／2004-02在大连医科大学附属第二医院中心实验室进行。SD大鼠36只随机分为3组：赛来昔布组(n=16)、安慰剂组(n=16)及假手术组(n=4)，其中赛来昔布组和安慰剂组按脑缺血再灌注2，4，6，24h分为4个亚组(n=4)。手术前10min赛来昔布组用赛来昔布灌胃(0．25mg／g,以3mL生理盐水溶解)，安慰剂组安慰剂灌胃，剂量相同，然后参照改良的Longa-Zea线栓法制作大脑中动脉闭塞及再通模型，假手术组仅做颈部正中切口暴露右侧颈总动脉后缝合皮肤。观察大鼠大脑中动脉闭塞2h再灌注2，4，6，24h4个时相点梗死体积，缺血区白细胞计数，并应用免疫组织化学法染色观察细胞间黏附分子1阳性微血管数。结果：36只大鼠进入结果分析。①赛来昔布组再灌注后2，4，6，24h的梗死体积明显小于同时段安慰剂组[(4．8l&;#177;0．13)％，(8．22&;#177;0．25)％，(11．83&;#177;0．62)％，(15．93&;#177;0．42)％，(6．56&;#177;2．07)％，(10．12&;#177;2．37)％，(13．53&;#177;1．47)％，(17．86&;#177;2．78)％，P&;lt;0．05]。②假手术组细胞间黏附分子1阳性表达为(0．63&;#177;0．62)个，未见白细胞浸润。脑缺血再灌注后，脑缺血坏死区周边微血管内皮细胞细胞间黏附分子1达及白细胞浸润增多，并于24h达高峰，此时细胞间黏附分子1表达及白细胞浸润赛来昔布组低于同期安慰剂组[(43．00&;#177;1．41)，(6．25&;#177;1．26)，(59．50&;#177;2．25)，(6．75&;#177;1.8)个，P&;lt;0．01]。结论：赛来昔布可缩小脑缺血再灌注后的脑梗死体积，抑制局灶性脑缺血再灌注时炎症反应，非特异性地起到脑保护作用。 黏附分子l；白细胞     

肿瘤坏死因子-α在大鼠脑缺血再灌注中的表达及对神经细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α(tumor necmsis factor-alpha，TNF-α)表达及细胞凋亡情况，探讨TNF-α在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，分为3组：脑缺血再灌注组大鼠大脑中动脉阻塞2h，再灌注2，6，12，24，48，72，96h、假手术组及永久缺血组，分别测定TNF-α表达(用免疫组织化学法)及细胞凋亡数(原位凋亡检测试剂盒)。结果：脑缺血再灌注组TNF-α表达水平[6h：(15．0&;#177;3．21)个／mm^2，12h：(47．0&;#177;0．87)个／mm^2，24h：(49．0&;#177;10．3)个／mm^2，48h：(44．8&;#177;6．9)个／mm^2，96h:(37．9&;#177;6.4)个／mm^2、细胞凋亡数[2h：(33．3&;#177;0．8)个／mm^2，6h:(56．6&;#177;1．6)个／mm^2，12h:(72．3&;#177;4.2)个／mm^2．24h：(86．6&;#177;5．5)个／mm^2，48h：(96．8&;#177;0．9)个／mm^2]明显高于假手术组(P&;lt;0.01)及永久缺血组(P&;lt;0.05)；且TNF-α表达与细胞凋亡数关系密切(r=0．567．P&;lt;0，01)。结论：大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α在神经元迟发性坏死中起着重要作用。     

亚低温对大鼠缺血再灌注脑组织的保护作用

背景：近年来亚低温对脑缺血组织的保护作用以及亚低温治疗对脑缺血再灌注后的炎症反应已越来越引起重视。 目的：探讨亚低温对大鼠脑缺血区炎性细胞因子的影响，及其再灌注损伤的脑保护机制。 设计：以动物为观察对象的随机对照试验。 单位：湖北省人民医院。 材料：实验于2004-10／2005-02在武汉大学人民医院实验中心进行，选取健康清洁级SD大鼠50只。 方法：将SD大鼠50只，先随机选取10只分正常组和假手术组，每组5只；余下的40只随机分为常温脑缺血组和亚低温脑缺血组，每组20只。除正常组5只外，其余大鼠均采用Longa改良线拴法建立可逆的大鼠左侧大脑中动脉线栓模型。假手术组及常温组置于20℃室温，肛温稳定在37℃左右；亚低温组将大鼠置于4℃环境中，全身采用亚低温方法，控制大鼠肛温在（33．0&;#177;1．01℃，缺血结束后立即自然复温，脑缺血3h后开始再灌注过程。所有造模大鼠均进行神经功能缺失评分（0分为无神经缺损症状；1分为不能伸展对侧前爪；2分为行走时向偏瘫侧转圈；3分为向偏瘫侧倾倒；4分为不能自发行走，意识丧失）。 主要观察指标：观察缺血脑组织大鼠的肿瘤坏死因子和白细胞介素-1的表达，脑梗死灶体积百分比和神经功能评分。 结果：实验过程中有15只大鼠因颅内出血、麻醉意外、神经功能缺失评分不满足要求而被剔除，随机补充15只造模成功大鼠，进入结果分析大鼠保持50只大鼠。①肿瘤坏死因子免疫组化染色阳性细胞数：正常组和假手术组差异无显著性意义[（3．54&;#177;1．24，3．71&;#177;1．50）个／视野]；亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（31．94&;#177;7．23,69．20&;#177;9．43）个／视野，F=179．16， P〈0．001]。②白细胞介素-1免疫组化染色阳性细胞数：正常组和假手术组差异无显著性意义[（3．20&;#177;1．34，3．89&;#177;2．08）个／视野]；亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（28．95&;#177;4．97，55．79&;#177;7．93）个／视野，F=174．95， P〈0．001]。③梗死灶体积百分比：亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（21．06&;#177;2．42）％，（30．32&;#177;2．71），F=374．87， P〈0．001]。④神经功能评分：亚低温脑缺血组明显比常温脑缺血组低[（1．35&;#177;0．27）％，（2．04&;#177;0．34）％，F=117．17， P〈0．001]。 结论：①亚低温脑缺血组大鼠脑梗死灶体积较常温脑缺血组明显缩小，提示亚低温对缺血神经元具有保护作用。②正常组和假手术组仅见少许肿瘤坏死因子和白细胞介素1阳性表达，而缺血后再灌注24h脑缺血区即有较多阳性细胞表达，提示脑缺血启动了炎性细胞因子表达，诱发炎症级联反应，从而加重脑缺血再灌注损伤，因此对炎症级联反应的抑制是发挥脑保护作用的重要机制之一。     

雌激素对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积与Bcl—2蛋白表达的影响

目的：观察雌激素对局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡及其Bcl-2蛋白表达的影响，探讨雌激素的脑保护作用。方法：实验于2004—09在河南大学医学院形态实验室完成。选取健康级雌性Wistar大鼠30只，随机分为假手术组，手术对照组和雌激素用药组，每组10只．将手术对照组和雌激素用药组大鼠于造模前7d切除双侧卵巢，手术对照组切除卵巢后给予生理盐水腹腔注射7d，雌激素用药组给予雌二醇1mg／（kg&;#183;d）腹腔注射7d，假手术组只行开腹手术，但不切除卵巢，并给予生理盐水腹腔注射7d。采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型。缺血2h再灌注24h，在麻醉状态下断头取脑，应用免疫组织化学方法及10mL/L几四氮唑染色，观察脑梗死体积及Bcl-2蛋白的表达。结果：30只Wistar大鼠全部进入结果分析。假手术组未发现缺血性梗死灶，手术对照组脑梗死病灶体积明显大于雌激素用药组[（96．93&;#177;11．63，59．32&;#177;8．95）mm^3]（t=8．104，P〈0．05）。假手术组未见Bcl-2蛋白染色阳性细胞，雌激素用药组和手术对照组梗死病灶边缘出现大量Bcl-2阳性细胞，两组细胞数分别为（167&;#177;22，139&;#177;19）个／mm^2．差异有显著性意义（t=3．046，P〈0．05）。结论：雌激素可缩小大鼠局灶性脑缺血梗死灶体积，增强Bcl-2蛋白的表达，具有脑保护作用。     

纳洛酮对SD大鼠循环骤停后脑功能的保护作用

目的：观察纳洛酮对缺血缺氧后脑神经元内钙结合蛋白D28k表达的影响、脑组织超微结构的改变以及对神经功能的影响，探讨纳洛酮的脑功能保护作用机制。方法：实验选用29只SD大鼠，随机将大鼠分为4组：纳洛酮预处理组(8只)，纳洛酮后处理组(8只)，复苏对照组(8只)，假手术组(5只)。采用窒息+艾司洛尔(超短效B受体阻滞剂)的大鼠心肺骤停模型。纳洛酮预处理组：纳洛酮0．3mg在心肺骤停前30min由静脉导管注人大鼠体内；纳洛酮后处理组：复苏开始后30min纳洛酮0．3mg由静脉注入。心跳骤停5min后开始进行心肺复苏，7d后大鼠处死、取脑、切片，免疫组化分析钙结合蛋白D28k的活性表达情况，透射电镜下观察脑组织损伤情况，每天对大鼠进行神经功能评分。结果：心肺复苏7d后．纳洛酮预处理组、纳洛酮后处理组、复苏对照组、假手术组大鼠海马区神经元钙结合蛋白D28k的阳性百分率分别为(41．15&;#177;6．52)％，(38．44&;#177;5．42)％，(21．69&;#177;4．17)％，(45．71&;#177;5.78)％，纳洛酮预处理和后处理组钙结合蛋白D28k的表达明显强于复苏对照组(P&;lt;0．01)。假手术组、预处理组、后处理组、对照组电镜下观察组织损伤评分为0，(4．47&;#177;3．25)％，(5．24&;#177;3．88)％，(15．06&;#177;4．39)％，纳洛酮预处理及后处理组神经组织损伤程度也轻于复苏对照组(P&;lt;0．05)，神经功能缺陷评分高于复苏对照组(P&;lt;0，01)。结论：纳洛酮可能通过促进神经元内钙结合蛋白D28k表达或抑制其丢失而抑制钙超载，减轻组织损伤，对改善脑功能、促进脑复苏具有一定作用。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

电针对高血压大鼠脑缺血后再灌注不同时间点脑细胞损伤的干预作用

目的：观察电针督脉经“大椎”、“百会”二穴对高血压大鼠脑缺血再灌注不同时间点行为学评分、脑含水量、脑细胞超微结构的变化。方法：实验于2004-08／2005-08在广东省中医院中心实验室完成。将140只SD大鼠先用环形银夹狭窄双侧肾动脉，制成易卒中型肾血管性高血压大鼠，再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞脑缺血再灌注模型，采用随机数字表法分为假手术组、电针组和模型组，分别观察缺血2h后再灌注1d，7d．14d大鼠行为学评分、脑含水量、脑细胞超微结构的变化。结果：140只SD大鼠，进入结果分析126只，假手术组18只，电针组54只和模型组54只。①脑缺血再灌注1，7d后，电针组大鼠行为学评分明显小于模型组（1．44&;#177;0．62，1．87&;#177;0．73；0．60&;#177;0．50，0．97&;#177;0．50，P〈0．05），再灌注14d电针组行为学评分与模型组比较。差异无显著性（0．20&;#177;0．41．0．27&;#177;0．46，P〉0．05）。②脑缺血再灌注1，7d后，电针组和模型组大鼠脑含水量明显高于假手术组[（80．72&;#177;1．37）％，（83．63&;#177;1．33）％，（77．58&;#177;1．30）％；（79．43&;#177;1．25）％，（81．65&;#177;1．65）％，（77．58&;#177;1．30）％，P〈0．001]，模型组大鼠脑含水量比电针组升高更明显（P〈0．001）；再灌注14d后，电针组和模型组大鼠脑含水量下降[（78．66&;#177;1．30）％，（78．86&;#177;1．10）％]，与假手术组比较差异无显著性（P〉0．05）。③缺血再灌注1d和7d后，电针组大鼠脑梗死体积百分率明显小于模型组，差异具有显著性[（14．34&;#177;1．31）％，（18．84&;#177;1．41）％；（6．07&;#177;1．72）％，（8．86&;#177;1．18）％，P〈0．01]。缺血再灌注14d，电针组与模型组间脑梗死体积百分率差异无显著性[（5．77&;#177;1．07）％，（7．04&;#177;1．65）％，P〉0．05]。④再灌注1，7d后，电针组神经细胞的超微结构损害较模型组轻；再灌注14d后，电针组脑细胞的超微结构损害仍比模型组轻。结论：高血压大鼠脑缺血再灌注早期电针督脉经“大椎”，“百会”二穴可改善其神经行为学表现，减轻脑水肿，缩小脑梗死范围，减轻脑细胞超微结构损害。     

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡

目的：研究大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后心肌细胞凋亡的发生情况。方法：实验选用105只雌性SD大鼠，随机抽取78只以结扎左冠状动脉前降支的方法制备AMI模型，术后24h存活的43只作为心肌梗死组；另设假手术组(n=27)；各组再按观察时点随机分为48h和4周两亚组，即：心肌梗死48h(n=11)和心肌梗死4周(n=13)组，假手术48h(n=10)和假手术4周(n=10)组。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。结果：AMI大鼠梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时，梗死／瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著升高[心肌梗死48h组分别为(212．86&;#177;155．75)／1000，(198．16&;#177;120．0)／1000和(63．23&;#177;45.43)／1000，心肌梗死4周组分别为(235．14&;#177;130．43)／1000，(80．33&;#177;44．29)／1000和(31．61&;#177;16．39)／1000，P&;lt;0．05～0．01]。结论：大鼠发生AMI后，梗死区心肌细胞坏死和瘢痕形成的同时，梗死／瘢痕区、梗死边缘区和非梗死区均有心肌细胞发生凋亡。     

运动训练对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA表达的影响

目的：观察运动训练对脑梗死大鼠梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA表达的影响。方法：实验于2002-04-30／2003-04-20在河北省人民医院中心实验室完成。取雄性Wistar大鼠50只，随机分为假手术组（n=10）和模型组（n=40）。模型组大鼠采用电凝大脑中动脉法制作大脑中动脉阻塞模型，术后48h随机分为训练组和非训练组，每组20只，训练组每天被动跑笼1次，40min／次，每跑5min休息2min，非训练组不运动。假手术组不电凝大脑中动脉也不训练。假手术在术后7d处死，训练组和非训练组在造模后7，14，21和28d分别处死5只，用原位杂交法检测梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达。结果：经补充后50只大鼠进入结果分析。①梗死灶周围神经细胞黏附分子mRNA表达：模型组增加非常明显，于第7天最高，一直至第28天与假手术组比较仍有明显差异；训练组第14，21，28天其表达均明显高于非训练组（4．21&;#177;0．46。3．68&;#177;0．49，3．24&;#177;0．26；3．70&;#177;0.31，3．19&;#177;0．40，2．81&;#177;0．45。P〈0．05）。②梗死灶周围皮质胶质细胞源性神经营养因子mRNA：模型组表达强于假手术组（P〈0．01）；非训练组于第7天表达最高（4.07&;#177;0．23），第14天仍高于假手术组（3．84&;#177;0．42）；训练组于第14天时最高（4．19&;#177;0．59）．第2l天仍高于非训练组（3．65&;#177;0．40，3．46土0.37），但无统计学差异。结论：脑缺血梗死可诱发神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达，运动训练可增加其表达。提示神经细胞黏附分子和胶质细胞源性神经营养因子可能参与了脑缺血损伤后脑的可塑性变化过程且与功能恢复有关。     

银杏叶制剂对正常脑温脑缺血大鼠的脑保护作用

背景：在银杏叶提取物治疗脑缺血的实验研究中，由于使用全身麻醉药物，有可能诱导脑温改变，影响实验结果准确性。目的：研究常温状态下，国产银杏叶提取物对脑缺血再灌注组织抗氧化酶、脂质过氧化物及脑缺血组织含水量的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和材料：实验在华中科技大学同济医学院完成。取24只Wistar大鼠，体质量为250～300g，将实验大鼠随机分为假手术组(n=8)、脑缺血对照组(n=8)、脑缺血银杏叶提取物治疗组(n=8)，对照组及治疗组参考Nagasawa方法，制备正常脑温大鼠左侧大脑中动脉缺血2h再灌注2h动物模型，进行对照研究。干预：实验大鼠的脑温用颞肌温度反映，将测温探头包埋人大鼠左侧颞肌深部贴近骨外膜，用半导体氧化物温度传感器连续监测。用60w白炽灯头部加温和自动双控颅脑降温仪调节脑温，使脑温维持在常温(36．5～37℃)水平。按设计方案制备正常脑温大鼠脑缺血再灌注损伤模型，脑缺血银杏叶提取物治疗组大鼠在手术前12，8，4h和脑缺血及再灌注即刻，分别腹腔内注射银杏叶提取物注射液，每次3mL，共5次。脑缺血对照组及假手术组大鼠腹腔内注射相同次数和剂量的生理盐水。主要观察指标：脑缺血组织超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型谷胱甘肽、丙二醛含量及脑缺血组织含水量。结果：脑缺血对照组超氧化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶，还原型谷胱甘肽水平分别为(73．35&;#177;12.86)NU／mg，(167．37&;#177;54．34)μkat／g，(196．84&;#177;22．75)μg／g，明显低于假手术组的(96．02&;#177;16.83)NU／mg，(338．57&;#177;84．02)μkat／g，(337．51&;#177;34．89)μg／g(P&;lt;0．01或P&;lt;0．05)；脑缺血银杏叶提取物治疗组超氧化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶，还原型谷胱甘肽水平分别为(87．24&;#177;15．03)NU／mg，(316．56&;#177;93．52)μkat／g，(263．16&;#177;28．54)μg／g，明显高于脑缺血对照组(P&;lt;0．01或P&;lt;0．05)。脑缺血对照组丙二醛水平为(308．34&;#177;26．81)nmol／g，明显高于假手术组的(101．46&;#177;10．97)nmol／g(P&;lt;0．01)；脑缺血银杏叶提取物治疗组丙二醛水平为(125．86&;#177;13．90)nmol／g，明显低于脑缺血对照组(P&;lt;0．01)。脑缺血对照组脑缺血组织含水量为(80．45&;#177;0．44)％，明显高于假手术组的(78．20&;#177;0．25)％(P&;lt;0．01)；脑缺血银杏叶提取物治疗组脑缺血组织含水量为(79．63&;#177;0．46)％，明显低于脑缺血对照组(P&;lt;0．05)。结论：正常脑温状态下，国产银杏叶提取物能抑制脑缺血时自由基的过多产生和脂质过氧化反应，减轻脑水肿和血脑屏障破坏，保护脑缺血组织。