人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及其生物学特性

目的:介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系的建立,研究其生物学特性.方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系.通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,对其生物学特性进行研究.结果:首次建立一株人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1,现已传至100余代.其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;染色体为假二倍体,染色体丢失,且有三条标记染色体;具有集落形成能力;裸鼠皮下种植瘤生长快,与原组织形态相似;组织化学奥辛蓝过碘酸雪夫氏反应、免疫组化角蛋白7及波形蛋白染色均阳性.结论:BUPH:OVSC-1为一株高度恶性人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型.     

人卵巢癌细胞系OV1228的建立及其生物学特性

目的用人卵巢癌组织建立新的卵巢癌细胞系,为探讨卵巢癌细胞的发病机制和治疗药物的筛选提供可靠的材料。方法选用人复发卵巢癌组织,进行肿瘤细胞原代培养,通过克隆稀释法,培养建立卵巢癌细胞系,进行体外传代,并通过细胞形态学、生长动力学以及致瘤性来分析其生物学特性。结果该卵巢癌细胞系已在体外培养生存18个月以上,传代超过80余代,被命名为OV1228。其生物学特性显示：倍增时间为29．39h;软琼脂集落形成率为17．5％;接种至裸鼠后具有较高的致瘤性;染色体核型分析为多倍体,众数为21～61条;透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面有少量短的细胞突起,部分细胞间可见发育比较差的桥粒样结构,具有明显的恶性卵巢癌细胞特征。结论OV1228经体外长期培养后已形成永生化卵巢癌细胞系,并具有明显的恶性特征,为开展人类卵巢癌的基础及临床研究提供了理想的实验材料。     

端粒酶永生化原始乳腺癌组织来源细胞及其意义

背景与目的：乳腺癌细胞系大部分来源于乳腺癌转移所致的胸水或非原始乳腺癌组织来源，与真正的乳腺癌的生物学性状有很大差异。而仅部分细胞系直接由乳腺癌原代细胞在体外培养条件下成为永生化的细胞系，过表达人端粒酶逆转录酶（hTERT）可使正常人上皮细胞永生化。本研究将通过hTERT转染人原始乳腺癌组织来源的细胞建立永生化乳腺癌细胞系，并研究过表达hTERT对其他基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒pBABE-hTERT-puro将hTERT基因导人原始乳腺癌组织来源的细胞，建立稳定表达hTERT的永生乳腺癌细胞。再利用微阵列技术检测乳腺癌细胞中hTERT诱导的基因表达改变。结果：Real-TimeRT-PCR证实hTERT转染后的乳腺癌细胞中hTERT过度并稳定表达，为转染前表达量的1400倍以上，并使得被转染的细胞永生化，可以传40～50代以上。微阵列结果进一步证实hTERT在转染后的细胞中过表达，另外，有22个基因在转染后的乳腺癌细胞中上调，未观察到所有细胞株中均下调的基因。结论：过表达hTERT可导致乳腺癌原代细胞的永生化，并对部分基因有上调作用。     

人类输卵管上皮永生化细胞系的建立及鉴定

背景与目的:最近研究表明卵巢高级别浆液性癌可能起源于输卵管上皮。本课题通过基因沉默和端粒酶导入技术将原代输卵管上皮细胞永生化,为以后建立恶性转化细胞系和卵巢癌动物模型奠定基础。方法:分离并培养输卵管上皮细胞,导入p53和pRb shRNA结合hTERTcDNA,建立p53和pRb基因同时沉默并过表达hTERT的永生化细胞系,并对永生化细胞系进行连续传代、沉默基因的蛋白质印迹法(Western blot)测定、SA-β-gal染色和非停泊生长实验及体内致瘤活性鉴定。结果:我们建立了稳定表达p53、pRbshRNA和hTERT的永生化输卵管上皮细胞系:FTE248116/p53i+pRbi+hTERT及FTE312249/p53i+pRbi+hTERT。结论:可以通过导入端粒酶基因及敲除抑癌基因p53和pRb来建立永生化细胞系,并有望于构建恶性转化细胞系和人类高级别浆液性卵巢癌动物模型。     

腹水来源卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性

背景与目的:体外建立卵巢癌细胞系有利于深入了解卵巢癌干细胞的生物学特性及抗癌药物的筛选.本研究中我们以人卵巢癌患者腹水为材料建立卵巢癌细胞系,并进一步探讨其基本生物学特性.方法:体外分离卵巢癌患者腹水中的肿瘤细胞,纯化并传代培养,观察细胞形态学变化,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,进行染色体核型分析.收集体外培养上清,进行放射免疫法检测相关激素状况和肿瘤标志物表达.动物实验观察细胞成瘤性以及瘤体的病理形态.结果:该卵巢癌细胞系已在体外培养与传代传110余代,历时近2年,透射电镜下可观察到卵巢癌细胞有显著的异形核,体外生长的倍增时间为40.8 h,染色体核型分析为超二倍体,染色体数目分布为63～120条.第80代细胞培养上清中雌二醇为45.0 pg/mL、睾酮0.03 ng/mL、孕酮未测出,CA125为4.49 U/mL,CA19-9为4.09 U/mL.第51代细胞接种于裸鼠后有皮下成瘤性,为低分化腺癌.结论:腹水来源的卵巢癌细胞在体外培养已是永生化细胞系,并具有明显的恶性细胞的生物学特征.     

膀胱肉瘤样癌的诊断与治疗（2例报告及文献复习）

目的：探讨膀胱肉瘤样癌的组织学特性,提高对膀胱肉瘤样癌的诊治水平。方法：报告2例膀胱肉瘤样癌患者的临床、病理资料,复习相关文献进行讨论。结果：术后病理检查见上皮和肉瘤样间质2种恶性成分,癌与肉瘤样区有移行,诊断为膀胱肉瘤样癌。其中1例10个月后死于全身衰竭、多处转移。结论：膀胱肉瘤样癌具有浸润性生长的生物学特性,恶性程度高,预后不良,确诊依赖病理学及免疫组织化学检查;化疗、放疗都不太敏感[1],手术仍是首选治疗方式。     

SV40T抗原介导的人胚肝细胞的体外永生化及其机制…

含较高浓度氢化可的松的无血清培养系统宜于培养人胚肝细胞。经含ＳＶ４０ｌａｒｇｅＴ基因的逆转录病毒感染后，部分细胞获得了分裂增殖的能力。经历３个月的“危机”阶段后，有３个克隆独立地发展成为永生化的细胞系，现已培养１５个月并传６０代以上，细胞仍生长良好。永生化细胞系具有上皮细胞样形态，表达丰富的细胞角蛋白１８及人清蛋白，证明为肝上皮细胞来源。着重强调的是，人清蛋白的产生特别处于细胞分裂周期的细胞。此细     

α粒子照射诱发 BEP2D细胞恶性转化模型的建立

目的：建立α粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化模型。方法：α粒子照射永生化BEP2D细胞,通过细胞传代培养,最终经裸鼠成瘤实验,病理切片鉴定,瘤组织培养获取肿瘤细胞系,角蛋白多克隆抗体免疫组化鉴定细胞上皮来源。结果：（1）α粒子照射BEP2D细胞后,培养35代,54代细胞接种裸鼠成瘤,照后20代BEP2D细胞及未照射永生化BEP2D细胞接种鼠不成瘤;（2）瘤体病理切片鉴定为鳞状上皮癌;（3）瘤组织培养得到肿瘤细胞系2个,角蛋白多抗免疫组化实验,细胞胞浆强阳性,证实为上皮来源。结论：1．5Gyα粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化,成功建立α粒子照射诱发肺癌的细胞研究模型。     

人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性

目的: 采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EHH1,并对其生物学特性进行分析。方法：将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果：成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EHH1。EHH1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EHH1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6 μg/L) 。染色体G带显示,EHH1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论: 通过原代培养建立的肝癌细胞系EHH1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。     

Expression of cytokines and receptors in normal,immortalized, and malignant ovarian epithelial cell lines

BACKGROUND: Ovarian carcinoma originates from the epithelial cells on the surface of the ovary. This study evaluates cytokine production by these cells. MATERIALS AND METHODS: Normal human ovary surface epithelial cells (HOSE cells), immortalized HOSE cells and ovarian cancer cells were used for the study of cytokines. RESULTS: Eight of 14 cytokines were increased in > or = 3 ovarian cancer cell lines compared with normal HOSE cells. Three cytokines were increased 5-fold in the immortalized HOSE cell line and in multiple ovarian cancer cell lines. Cytokine receptor expression revealed that 7 of 8 ovarian cancer cell lines had > or = 1 autocrine loop. Anti-EGFR antibody failed to inhibit growth of ovarian cancer cells which expressed multiple cytokine receptors. CONCLUSION: Ovarian cancer cells produce more cytokines than normal HOSE cells. Immortalized HOSE cells display a cytokine profile similar to the cancer cells. Finally, multiple autocrine loops in ovarian cancer may limit the therapeutic usefulness of single cytokine receptor blockade.     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

可溶性重组人CD40配体抑制人胶质瘤细胞生长

背景和目的：CD40是存在于B细胞,单核细胞,树突状细胞,内皮细胞和多种肿瘤细胞上的肿瘤坏死因子受体超家族成员,已有研究证明用CD40抗体或CD40配体激活CD40可引起人卵巢癌,结肠癌,乳腺癌和肺癌细胞凋亡或死亡,并抑制鼠体内移植瘤生长,本研究拟了解可溶性重组人CD40配体（srhCD40L)对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法：用免疫组化法检测胶质瘤标本中CD40的表达,用流式细胞仪检测人胶质瘤细胞中CD40的表达,然后在其培养基中加入srhCD40L孵育,在分别培养72h和24h后检测细胞增殖和凋亡指标。结果：23个胶质瘤标本中有7个和3个胶质瘤细胞系有1个具有CD40表达。有CD40表达的胶质瘤细胞系与srhCD40L共孵育后发现细胞活力从98%降至87%;凋亡和坏死升高了17.4%。结论：在体外用CD40配体激活CD40可抑制有CD40表达的人胶质瘤细胞的生长,提示CD40配体在治疗胶质瘤上有潜在的临床应用价值。     

Antitumor activity of a novel glyco-nitric oxide conjugate in ovarian carcinoma

BACKGROUND: Several studies have shown that nitric oxide (NO)-releasing agents can kill tumor cells. Unfortunately, currently available NO delivery molecules do not target tumor cells preferentially. To exploit the overexpression of glucose transport proteins and the high level of glucose transport characteristics of tumor cells, glucose was conjugated to S-nitroso-N-acetyl-penicillamine (2-gluSNAP) and evaluated for cytotoxicity in human ovarian carcinoma cells. METHODS: The cytotoxicity of 2-gluSNAP and SNAP was assessed by clonogenic cell survival assays performed in A2780S (cisplatin sensitive) and A2780cP (cisplatin-resistant) ovarian carcinoma cells in vitro. Immunoblotting and immunohistochemistry were used to assess the expression of Glut-1 hexose transport protein in the cell lines as well as in paraffin blocks from 28 surgical specimens of epithelial ovarian carcinoma. Apoptosis was assessed by an end-labeling assay. RESULTS: The ovarian carcinoma cell lines consistently were more sensitive to 2-gluSNAP than SNAP alone. The median effective doses (MEDs) for 2-gluSNAP and SNAP in the A2780s cell line were 0.0042 microM and 20.4 microM, respectively. Therefore, 2-GluSNAP was nearly 5000-fold more potent than the NO-donating moiety (SNAP) alone. In the A2780cP cells, the MED for 2-gluSNAP (0.38 microM) was 250-fold lower than that for SNAP alone (100 microM). Immunoblotting and immunohistochemistry studies showed overexpression of Glut-1 in the cell lines and in 23 of 28 epithelial ovarian carcinoma specimens. CONCLUSIONS: The novel glyco-NO conjugate 2-gluSNAP exhibits a much greater cytotoxicity than the parent NO donor without the hexose moiety. These agents have the potential to target tumor cells preferentially, that overexpress Glut-1. This transporter is expressed highly in epithelial ovarian carcinoma.     

小鼠卵巢癌荷瘤动物模型的构建及其细胞系生物学特性分析

背景与目的:目前缺少可靠特异性早期发现卵巢癌,并防止复发和预防耐药的方法。良好的实验模型不仅可以很好地理解影响此疾病表型特征的生物遗传因素,还可以为干预策略的发展提供理论基础。本研究旨在构建小鼠的卵巢癌模型,建立卵巢癌细胞系,分析其生物学特性。方法:对8周龄的C57BL/6N×C3H/He杂交一代(F1)雌性小鼠,用剂量2.7Gy的252Cf的中子放射源给予全身放射线照射,诱导成卵巢癌后进行鼠间传代11次,取瘤组织体外分离培养瘤细胞并传代和建立肿瘤细胞系,应用细胞、分子生物学实验手段对建立的细胞系进行生物学特性检测。结果:经放射线照射成瘤的细胞在鼠间历时23个月传至第11代,皮下移植瘤存活率为100%,体外建立的细胞系OV99与阳性对照卵巢癌细胞系OVHM一样,在体外生长性能稳定。OV99细胞形态学和超微结构符合卵巢癌上皮组织基本特征;细胞含有76条染色体,呈端着丝粒,为鼠肿瘤细胞异常染色体;OV-99的细胞生长状态、细胞周期分布、癌基因p21、p185和抑癌基因p53的蛋白表达定量以及细胞周期蛋白PCNA和CyclinD,MHC表达量,和MAGE-1,MAGE-3mRNA表达等细胞生物学行为和OVHM的结果差异无显著性,但与鼠的正常卵巢组织中癌基因p21、p185和抑癌基因p53的蛋白表达定量以及细胞周期蛋白PCNA和CyclinD以及MHC表达量相比明显升高,MAGE-1、MAGE-3mRNA表达增强。结论:小鼠卵巢癌荷瘤模型及其细胞系OV99的建立为卵巢癌的研究提供了良好的实验材料。通过对OV99细胞的病理形态学、超微结构、染色体分布、细胞周期分布及不同肿瘤特征性基因等生物学行为分析,OV99符合卵巢癌细胞系的特征。     

干扰素介导的跨膜蛋白1与卵巢上皮性癌耐药相关性研究

目的:探讨干扰素介导的跨膜蛋白1（IFITM1）与卵巢上皮性癌化疗耐药性的相关性。方法:应用免疫组化测定68例初治卵巢上皮性癌组织和卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780、顺铂耐药细胞株CP70中IFITM1的表达,Western blotting检测两种卵巢癌细胞株中IFITM1蛋白的表达。结果:免疫组织化学显示铂类化疗敏感性卵巢癌组和耐药性卵巢癌组的表达强度之间的差异有统计学意义（P=0.043）,Western blot实验显示卵巢癌CP70细胞株中IFITM1表达水平明显高于A2780细胞株。结论:IFITM1表达强度与卵巢癌铂类化疗的敏感性相关,检测IFITM1对判断卵巢癌化疗疗效具有临床意义。