RGD肽在肿瘤靶向纳米给药系统中的应用

RGD肽是一类含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽,作为肿瘤细胞或者新生血管特异表达的整合素和其配体相互作用的识别位点,可介导肿瘤的靶向治疗.抗肿瘤药物及其递送系统经过RGD肽修饰.可增加药物的肿瘤主动靶向特性,达到更有效、精确和安全的治疗.本文主要综述了RGD肽在脂质体、聚合物胶束、基因载体等...     

短肽在靶向药物递送系统中的研究进展

近年来研究发现许多肿瘤细胞表面高表达一些肽类受体，这些肽类受体与相应的配体亲和性高，能以配体-受体方式特异性结合。以小片段活性肽作为导向物形成复合物而发展的靶向药物递送系统，能够将药物定向转运到靶细胞内，显示了良好的研究价值和应用前景。如蛙皮素/胃泌素释放肽受体介导的靶向药物递送系统、生长抑素受体介导的靶向药物递送系统、十肽SynB₃受体介导的靶向药物递送系统、黄体酮释放激素受体介导的靶向药物递送系统及其他肽类受体介导的靶向药物递送系统，其中短肽作为靶向基团与阿霉素、吡咯阿霉素、甲氨蝶呤、顺铂和喜树碱等结合形成高效的复合物，用于表达有相应受体的肿瘤，获得靶向治疗的研究非常有意义。     

miR-486对CD133+胶质瘤干细胞的影响

目的 研究miR-486对CD133 胶质瘤干细胞的影响。方法 CD133抗体标记U87胶质瘤细胞系,流式细胞分选纯化CD133 胶质瘤干细胞,实时定量PCR检测CD133 胶质瘤干细胞中miR-486的表达量。脂质体转染方法构建过表达miR-486的CD133 胶质瘤干细胞,MTT法检测其凋亡率,流式分析仪检测细胞增殖率与生长周期。结果 流式分选后CD133 胶质瘤干细胞纯度达到实验要求,CD133 胶质瘤细胞中miR-486表达量较CD133-胶质瘤细胞中下降（P<0.01）,转染miR-486模拟物的CD133 胶质瘤干细胞较转染miRNA对照模拟物的CD133 胶质瘤干细胞相对增殖率降低,细胞周期检测对照组细胞位于G0/G1期的比例低于转染miR-486后的细胞（P<0.05）,转染miR-486后细胞凋亡率显著提高（P<0.001）。结论CD133 胶质瘤干细胞中miR-486表达量减少,过表达miR-486的CD133 胶质瘤干细胞增殖受到抑制,生长周期被阻滞于G1/S期,凋亡率显著提高,可能是胶质瘤靶向治疗中队胶质瘤干细胞的有效靶点。     

T7/A7R肽修饰的替莫唑胺脂质体制备与表征

摘要：目的:制备由T7、A7R肽双重修饰的替莫唑胺脂质体,并进行初步的体外表征。方法:分别将T7、A7R与DSPE-PEG2000-Mal反应生成DSPE-PEG2000-T7和DSPE-PEG2000-A7R,逆相蒸发法制备双肽修饰的脂质体（T7/A7R-LP）,并进行相应的体外表征。结果:制备的脂质体近球形,粒径均匀,平均粒径（96.6±6.5） nm, zeta电位为-（5.15±1.03） mV,包封率（36.38±3.95）%;在4～8℃条件下放置30 d,粒径和zeta电位无显著变化,体外6 h释药完毕;细胞摄取试验表明T7/A7R-LP具有较好的脑部靶向递送能力。结论:制备的T7/A7R肽修饰的脂质体理化特性良好,性质较为稳定,具有一定的脑部药物递送前景。     

基于前药构建混合胶束实现紫杉醇/阿霉素共递送

为了达到靶向递送,实现肿瘤的联合治疗,制备两亲性紫杉醇-聚乙二醇前药以及小分子阿霉素前药,两者共同构成混合胶束实现共递送.合成还原敏感性的聚乙二醇-紫杉醇前体药物(mPEG-SS-PTX)和靶向性叶酸修饰的聚乙二醇-紫杉醇前体药物(FA-PEG-SS-PTX).同时合成pH敏感阿霉素-乌头酸酐(CAD)小分子前药,采用...     

MT肽修饰阳离子脂质体作为新型基因载体的体外细胞学评价

目的 通过体外细胞学实验对MT肽修饰的阳离子脂质体进行基因载体递送能力的评价.方法 通过点击反应制备DSPE-PEG2000-MT用于修饰阳离子脂质体,并通过1H-NMR对DSPE-PEG2000-MT进行结构表征.以能够表达增强型绿色荧光蛋白的pEGFP-C1报告基因为模型基因,首先通过琼脂糖凝胶电泳实验进行复合物包...     

利用C6胶质瘤干细胞建立小鼠脑胶质瘤模型及评价

目的利用C6胶质瘤干细胞建立ICR小鼠动物模型,为深入研究胶质瘤干细胞在脑胶质瘤中的作用提供理想的模型。方法采用悬浮生长法体外培养C6胶质瘤干细胞,用Nestin巢蛋白抗体进行鉴别;利用C6干细胞建立ICR小鼠脑胶质瘤模型,考察小鼠术后的生存状态和肿瘤体积变化;通过HE染色及CD133免疫组化考察小鼠术后的病理学变化。结果 C6胶质瘤干细胞中Nestin表达量为96.01%,Nestin在所培养的C6胶质瘤干细胞球中高表达;小鼠接种肿瘤后食欲不振,体质量偏轻,且行为缓慢,反应呆滞;建模21 d时肿瘤体积为(9.77±6.58)mm3;模型经HE染色后可见脑组织呈浸润性生长,肿瘤细胞核皱缩,排列紊乱;免疫组化CD133染色显示肿瘤细胞胞质显棕色,肿瘤组织中存在大量的脑胶质瘤干细胞。结论利用胶质瘤干细胞建立的脑胶质瘤模型成瘤率高,成瘤周期短,可作为后期脑胶质瘤模型的理想模型。     

胶质瘤中CD133、Nestin和ABCG2阳性细胞及其壁龛分布

目的探讨胶质瘤干细胞生存微环境—壁龛的结构和分布特征。方法采用免疫组化法检测26例胶质瘤标本中CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛的表达,计算其阳性细胞及壁龛数,并分级,分析其与病理分级的相关性。结果低级别(Ⅱ级)12例,高级别14例(Ⅲ级10例、Ⅳ级4例)。CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及其壁龛多半分布于血管周围以及血管相对富集的肿瘤边缘,三者均与病理分级呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论 CD133、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛均以血管周围分布为主,与病理分级呈正相关关系;胶质瘤干细胞壁龛在胶质瘤发生、发展和浸润扩散中起着重要作用。     

RVG29修饰脂质体对脑胶质瘤靶向性的初步研究

目的 研究一种新型配体RVG29修饰脂质体后,对体外脑胶质瘤的靶向性.方法 采用有机相合成法制备DSPE-PEG2000-RVG29 PPP(D-RVG29)材料,按照薄膜分散法制备脂质体,通过C6细胞和Hela细胞的细胞摄取考察D-RVG29修饰脂质体后,对体外脑胶质瘤的靶向性.结果 在脂质体处方中加入DSPE-PEG2000-OME(D-OME)可使D-RVG29修饰脂质体具有更好的粒径和分布范围,C6细胞对D-RVG29修饰脂质体的摄取强于未修饰D-RVG29的脂质体,Hela细胞对两种脂质体的摄取强度无明显区别.结论 D-OME可以提高D-RVG29修饰脂质体的稳定性,D-RVG29修饰脂质体具有体外脑胶质瘤细胞的靶向性.     

舌鳞癌组织中肿瘤干细胞的分离培养及PIWIL4对其的影响

目的：从人舌鳞癌组织中分离培养肿瘤干细胞细胞（CSC）,鉴定其生物学特性,并研究PIWIL4在CSC中的表达和意义。方法收集9例不同临床分期舌鳞癌患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133＋CD44＋细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL4 mRNA在CSC中的表达;裸鼠皮下接种CSC,观察其成瘤能力。结果成功的从人舌鳞癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSC,CSC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×10^4、1×10^5个CSC均可全部成瘤,PIWIL4 mRNA在CSC的表达也显著高于正常舌组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人舌组织中分离获得CSC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL4,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。     

Fluorescence microscopy to follow the targeting of liposomes and micelles to cells and their intracellular fate

Fluorescence microscopy may provide important information regarding interactions between nanoparticulate drugs carriers, such as liposomes and micelles, with target cells as well as their intracellular fate. Current paper describes various applications of fluorescence microscopy to investigate specific targeting of antibody-modified drug carriers to cancer cells. The enhanced antibody-mediated targeting of drug-loaded immunomicelles confirmed by fluorescence microscopy resulted in enhanced cancer cell killing compared to free drug or drug-loaded nontargeted micelles. Fluorescence microscopy was also used to prove the endosomal escape of properly assembled polymeric micelles (based on polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine conjugate, PEG-PE) containing various additives destabilizing the endosomal membrane. When loaded with the anticancer drug (paclitaxel or vitamin K3), such micelles demonstrate increased cytotoxicity. Fluorescence microscopy was also applied to investigate the capture of cell-penetrating TAT peptide-modified liposomes by various cells and stability and intracellular trafficking of captured TAT-liposomes inside cells. It was also used to confirm the successful transfection of cells with TAT-liposomes bearing the plasmid encoding for the Green Fluorescent Protein (GFP).     

人卵巢癌HO8910细胞株中干细胞的筛选及生物学特性鉴定

目的筛选人卵巢癌HO8910细胞株中的干细胞并观察其生物学特性。方法以常规培养的HO8910细胞为基础(对照组),采用紫杉醇结合无血清培养基悬浮培养法筛选卵巢癌干细胞(干细胞组)。对筛选出的干细胞分别采用MTT法检测细胞的增殖情况;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测CD24、CD44、CD45、CD133、CD117表达及Hoechst33342染色阳性率;Western blot检测ABCG2、Nanog、Oct4及BCRP等干细胞标志基因的蛋白表达,并对卵巢癌干细胞在裸鼠体内的致瘤性进行检测。结果 (1)在紫杉醇结合无血清培养筛选条件下,部分HO8910细胞能够较好的生长,具有干细胞特性。(2)干细胞组各时间点的细胞增殖能力较对照组明显增强。(3)干细胞组穿膜细胞数较对照组明显增多。(4)干细胞组CD24+、CD44+、CD45+的阳性表达率与对照组比较,差异均无统计学意义;CD133+、CD117+的阳性表达率及Hoechst33342染色阳性率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)干细胞组ABCG2、Nanog、Oct4、BCRP等干细胞标志基因的蛋白表达水平与对照组比较均明显增强。(6)干细胞组细胞在裸鼠体内致瘤性明显高于对照组。结论紫杉醇结合无血清培养基悬浮培养法能够筛选出具有干细胞特征的卵巢癌干细胞;卵巢癌干细胞在体外及体内的生物学特性较普通卵巢癌细胞有很大差异。     

靶向CD19嵌合抗原受体T细胞体外构建、扩增及抗肿瘤活性研究

目的  探索特异性靶向CD19的嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor, CAR）T细胞的构建与制备方法,并研究其体外杀伤靶细胞的效果。方法  通过基因合成和分子克隆手段构建anti-CD19-CAR片段并将其插入plenti6.3慢病毒载体,利用293FT悬浮细胞系包装慢病毒并转染人外周血单个核细胞来源的CD3⁺ T细胞,通过流式细胞术鉴定转染效率,并通过实时无标记细胞分析法和细胞计数试剂盒8检测anti-CD19-CAR-T细胞体外杀伤效果。结果  获得了表达抗CD19的单链抗体基因的慢病毒,病毒滴度可达3.2×10⁸ 噬斑形成单位/ml。经慢病毒转染的CD3⁺ T细胞在体外培养14 d后,细胞扩增效率达(60.2±11.5)倍,anti-CD19-CAR-T细胞阳性率达90.57%。经检测,anti-CD19-CAR-T细胞均可有效杀伤CD19⁺靶细胞。结论  建立了基于无血清悬浮细胞系的anti-CD19-CAR慢病毒包装系统,成功构建靶向CD19抗原的CAR-T细胞,能特异性杀伤CD19+肿瘤细胞。     

纳米雄黄对MCF-7乳腺癌干细胞的体外抑制作用

目的 研究纳米雄黄对乳腺癌干细胞的体外抑制作用.方法 以人乳腺癌MCF-7亲本细胞为对象,采用无血清培养法培养获得乳腺癌干细胞.以阿霉素(1 mg/L)为阳性对照,以相同质量浓度的水飞雄黄为参照,采用CCK-8法检测纳米雄黄对MCF-7亲本细胞及干细胞增殖的影响;借助悬浮球形成及分化实验、划痕实验、Transwell侵...     

MiR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究

目的 探讨miR-19反义核酸与CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133⁺细胞亚群种群比例的影响。MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133⁺HT29细胞亚群能力的影响。利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133⁺HT29细胞亚群中PTEN的表达。运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系,并且CD133⁺细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133⁺细胞亚群的比例,然而联用miR-19反义核酸后CD133⁺HT29细胞亚群的种群比例显著下降。MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133⁺HT29细胞亚群的杀伤活性。Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN。MiR-19反义核酸可显著抑制CD133⁺HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化,增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合,从而提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性。     

地佐辛和吗啡对胃肠道肿瘤患者术中免疫功能的影响

目的:比较地佐辛和吗啡对胃肠道肿瘤患者术中T淋巴细胞群和NK细胞数量的影响。方法:60例胃肠道肿瘤行根治手术的患者,随机数字表法随机分为地佐辛(D)组和吗啡(M)组。D组麻醉前肌注地佐辛1 mg·kg^-1,M组麻醉前肌注吗啡1 mg·kg^-1。分别在麻醉前、手术1 h、术毕、术后1 h抽取患者外周静脉血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD3⁺ CD4⁺、CD3⁺ CD8⁺)、活化T细胞(CD3⁺ HLA-DR⁺)和自然杀伤(NK)细胞(CD3^-CD16⁺CD56⁺)数量的变化。术后随访观察、记录2组患者VAS评分及不良反应。结果:2组患者手术1 h时点CD3⁺、CD3⁺ CD4⁺、CD3⁺ CD4⁺/CD3⁺ CD8⁺、CD3⁺ HLA-DR⁺、NK细胞数量较麻醉前相比明显下降,M组各细胞数量在此时点明显低于D组。术毕和术后1 h 2组各细胞数量有所回升,但M组明显低于D组和麻醉前水平。2组患者VSA评分无显著差异(P>0.05)但D组术后不良反应发生率较M组低(P<0.05)。结论:地佐辛对胃肠道肿瘤患者术中T淋巴亚群和NK细胞抑制作用较吗啡小。     

Anti-tumour effect of the fourth-generation chimeric antigen receptor T cells targeting CD133 against cholangiocarcinoma cells

Current treatment of cholangiocarcinoma (CCA) – a lethal bile duct cancer – is ineffective because the disease is usually diagnosed at late and advanced stage. Thus, a novel therapeutic modality is urgently required. Fourth-generation chimeric antigen receptor (CAR4) T cells was created to target CD133, a well-known cancer stem cell marker, that is highly expressed and associates with cancer progression. The anti-CD133-CAR4 T cells showed high efficacy against CD133-expressing CCA cells. Tumour cell lysis occurred in a dose- and CD133 antigen-dependent manner, and significantly higher, up to 57.59% ± 9.62 at effector to target ratio of 5:1 in a CCA cell line – KKU-213A cells, compared to mock control (p = 0.008). Similarly, significant IFN-γ (p = 0.011) and TNF-α (p = 0.002) upregulation was observed upon tumour treatment. The effectiveness of our anti-CD133-CAR4 T cells will be beneficial not only for CD133-expressing CCA, but also for other CD133-expressing tumours. This study may guide future in vivo study and clinical trials.     

从PC-3细胞中富集前列腺癌干细胞的实验研究

目的从PC-3人前列腺癌细胞中分离并富集前列腺癌干细胞。方法体外无血清悬浮培养PC-3细胞,通过传代更新、诱导分化验证PC-3悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新及分化潜能,实时荧光定量核酸扩增检测系统检测CD44和CD133mRNA的表达,流式细胞术检测CD44+CD133+细胞和侧群(SP)细胞比例。结果 PC-3成球细胞可以在无血清培养液(SFM)中生存并形成可以稳定传代的悬浮细胞球。PC-3成球细胞具有自我更新和分化能力,其前列腺癌干细胞标志物CD44和CD133mRNA的相对表达量分别是PC-3贴壁细胞的41.83倍和10.48倍(P<0.05)。PC-3悬浮成球细胞中CD44+CD133+细胞比率为13.94%,SP细胞含量为3.10%,均显著高于PC-3贴壁细胞的0.77%和0(P<0.05)。结论通过无血清悬浮聚球培养可以从PC-3细胞中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。     

CD133+ cells as a therapeutic target for kidney diseases

INTRODUCTION: The availability of antibodies recognizing the glycosylation-dependent expression of AC133 epitope of CD133 allowed the identification of stem cells in different human tissues. In the kidney, CD133 has been identified as a marker of progenitor cells within the nephron, both in the cortex and in the inner medulla, showing features of non-differentiated mesenchymal progenitors. In addition, CD133 may be considered a marker of renal repair, as the hypoxic microenvironment occurring after injury may favor the acquirement of CD133 progenitor properties by cells of the nephron. AREAS COVERED: Areas covered in this review include CD133 expression that, in renal pathology, has been related to excessive proliferation and/or reduced differentiation of renal progenitors, which occurs in polycystic kidney disease and glomerular diseases. Also included are data from literature, which by contrast, indicate CD133 cannot be considered a promising marker for renal cancer stem cells. EXPERT OPINION: CD133 could be of interest as a possible therapeutic target for nonmalignant renal pathology. Selective targeting of CD133 may allow pharmacological approaches to control proliferation or induce differentiation of CD133+ cells. In the light of a possible role of CD133 in the regulation of the anaerobic glycolytic metabolism, CD133 modulation could be of therapeutic interest in renal regeneration or diseases. Successful exploitation of CD133 will nevertheless require a better understanding of its molecular function.     

类风湿关节炎合并肺部感染患者外周血T淋巴细胞和NK细胞水平及其临床意义

目的探究类风湿关节炎(RA)合并肺部感染患者外周血T淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)的水平及其临床意义。方法选取48例RA合并肺部感染患者作为RA合并感染组,64例RA未合并肺部感染患者作为RA未合并感染组,另选取同期于本院健康体检中心进行体检的30例健康成年人作为对照组。比较三组外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平,比较稳定期与活动期RA合并与未合并肺部感染患者的T淋巴细胞亚群及NK细胞水平。结果RA合并感染组CD3⁺(641.21±438.08)个/μl、CD4⁺(171.58±96.42)个/μl、CD8⁺(215.48±110.16)个/μl、CD4⁺/CD8⁺(0.82±0.26)、NK细胞(26.57±4.88)个/μl;RA未合并感染组CD3⁺(1051.36±434.65)个/μl、CD4⁺(308.07±101.69)个/μl、CD8⁺(324.17±108.16)个/μl、CD4⁺/CD8⁺(0.96±0.24)、NK细胞(40.52±8.92)个/μl;对照组CD3⁺(1403.00±402.77)个/μl、CD4⁺(610.07±82.58)个/μl、CD8⁺(532.47±168.45)个/μl、CD4⁺/CD8⁺(1.35±0.21)、NK细胞(365.15±117.61)个/μl。RA合并感染组、RA未合并感染组CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RA合并感染组CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于RA未合并感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。稳定期RA合并肺部感染患者CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于稳定期RA未合并肺部感染患者,差异有统计学意义(P<0.05);活动期RA合并肺部感染患者CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于活动期RA未合并肺部感染患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论合并肺部感染的RA患者T淋巴细胞、NK细胞明显偏低,T淋巴细胞及NK细胞可能在一定程度上对RA合并肺部感染发挥一定的预测价值,指导临床诊疗。