新型三唑苄胺类化合物体外抗真菌活性及构效关系

目的：研究23个1－[2－（N－甲基－N－取代苄基）氨基－2（2,4－二氟苯基）乙基]－1H－1,2,4－三唑类化合物的体外抗真菌活性,并初步探讨其构效关系。方法：选择8种临床致病真菌为试验菌,观察本类化合物对它们的体外抑菌作用,并与布替萘芬和益康唑作比较。结果和结论：所有目标化合物对8种试验真菌均有不同程度的抑制作用,大部分化合物对白念珠菌和近平滑念珠菌的活性明显高于布替萘芬;化合物2、13对新型隐球菌的活性是益康唑的64－128倍,化合物2、3、13、16对多数真菌显示较强活性。构效关系研究表明,苄胺类和氮唑类化合物的特征结构组合在一起,对某些真菌的抑菌活性起到了取长补短的作用;但苄基为萘苄时,对多数深部真菌活性较差。     

三唑类抗真菌药的临床应用进展

由于广谱抗菌药物、肾上腺皮质激素、抗肿瘤药、免疫抑制剂的滥用和侵袭性操作的大量应用,导致菌群失调和机体对真菌的抵抗力降低,致使深部真菌感染的发病率日趋增高;因此,抗真菌药物的开发及临床应用日益受到重视。其中三唑类抗真菌药物是目前临床应用最广泛、研究最热门的一类药物。由于三唑类药物对哺乳动物的细胞色素P450酶系统有很强的抑制作用,会产生肝毒性等不良反应,临床应用受到限制。本文对目前临床用于治疗深部真菌感染的三唑类药物作一综述,供临床工作者参考。     

3-取代三唑类抗真菌化合物的设计、合成及体外抗真菌活性

目的合成1,2,3-三唑侧链取代三唑醇类化合物并考察其体外抗真菌活性。方法设计合成了21个三唑醇类新化合物,所得化合物结构都经过1HNMR、MS确证;选择8种真菌为实验菌株,进行体外抗真菌活性测试。结果所合成的化合物均具有一定的体外抗真菌活性,其中化合物7{1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2,4二氟苯基)-3-[N,N-(4-亚甲基-1-取代苄基-1H-1,2,3三唑)]-2-丙醇}对白色念珠菌的MIC80值为0.25μg/ml,是氟康唑活性的4倍,化合物Ⅵ{1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2,4二氟苯基)-3-(N,N-二炔丙基)-2-丙醇}对白色念珠菌的MIC80值为0.0156μg/ml,是氟康唑活性的64倍,是伊曲康唑的4倍。结论利用13偶极加成反应可以方便地在化合物中引入1,2,3-三唑基;较大的侧链结构可能不利于目标化合物活性的提高。     

白色念珠菌对四种抗真菌药物敏感性研究分析

目的 研究抗真菌药物对抗白色念珠菌药物的敏感性.方法 回顾性调查分析2005年3月至2007年4月临床送检的各种标本受试菌株共165株,对各组间药物敏感性比较采用卡方检验方法.结果 伊曲康唑、两性霉素-B、氟康唑、5-氟胞嘧啶四种药物之间药物敏感性无显著性差异.结论 四种抗真菌药物对白色念珠菌均具有极高的敏感率,耐药率最高的为伊曲康唑.     

环孢菌素A与细胞因子联合逆转白血病多药耐药性的体外研究

目的 探讨环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）联合细胞因子对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的逆转作用,方法 以甲基四唑蓝法测定柔红霉素（ＤＮＲ）的细胞毒性,用流式细胞仪技术测定细胞内罗丹明（Ｒｈ１２３）浓度,用ＲＴ－ＰＣＲ及ＪＳＢ－１抗体分别检测多药耐药（ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ及其Ｐ糖蛋白的表达。结果 １μｍｏｌ／ＬＣｓＡ,５００Ｕ／ｍｌ干扰素２００Ｕ／ｍｌ白介素２（ＩＬ－２）均能增加ＤＮＲ对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的     

含哌嗪环的叔丁基三唑醇类化合物的合成及体外抗真菌活性

目的:设计合成含哌嗪环侧链的叔丁基三唑醇类化合物;并研究其体外抗真菌活性.方法:以一氯频哪酮为起始原料经多步反应合成含哌嗪环的叔丁基三唑醇类化合物,化合物结构经1HNMR确证为1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-[(4-取代哌嗪)-1-基]-2-丙醇类化合物;选择白念珠菌(Candida albicans)ATCC76615、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)ATCC32609、热带念珠菌(Candida tropicalis)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)、羊毛样小孢子菌(Microsporum lauosum)、紧密着色真菌(Fonsecaea compacta)以及薰烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)8种真菌为实验菌株,按国际标准抗真菌敏感性实验方法测定体外抑菌活性.结果:设计合成了11个新化合物.所有目标化合物对8种真菌均具有一定的抑制作用.结论:化合物9对新生隐球菌的活性高于对照药氟康唑和伊曲康唑,化合物8对薰烟曲霉菌的活性高于对照药氟康唑,这两个化合物有进一步研究的价值.     

1-(1H -1,2,4-三唑基)-2-(2′,4′-二氟苯基)-3-含硫侧链-2-丙醇类化合物的合成及其抗真菌活性

目的:研究不同含硫侧链的引入对三唑醇类化合物抗真菌活性的影响.方法:设计合成了15个含硫侧链取代三唑醇类化合物,其中13个为新化合物;选择了8种真菌为实验菌株,进行体外抑菌活性测试.结果:目标化合物对所选菌株均有一定的抑制活性,其中化合物2对白色念珠菌的MIC80值为2 μg/ml,与氟康唑的活性相当;化合物7和10对白色念珠菌的MIC80值为0.5和0.25 μg/ml,分别为氟康唑活性的4倍和8倍.结论:适当的脂水分配系数对该类化合物体外抑菌活性的影响可能大于立体化学因素的影响.     

外阴阴道念珠菌病白念珠菌基因型和抗真菌药物敏感性研究

目的 探讨外阴阴道念珠菌病(VVC)白念珠菌基因多样性与抗真菌药物敏感性的关系.方法 采用最近开展的CAI微卫星法聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术鉴定VVC患者白念珠菌的基因型,采用E-test法对检出的念珠菌进行体外药敏试验.结果 从VVC患者分离出89株白念珠菌,鉴定出26种基因型.白念珠菌对两性霉素B、氟胞嘧啶、酮康唑和氟康唑敏感.主要基因型(A、B、C、D)占69.7%(62/89),白念珠菌B基因型菌株及非B基因型菌株对伊曲康唑(ITR)的耐药率分别为66.7%(14/21)和4.4%(3/68),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCP-SSCP技术有利于研究白念珠菌对抗真菌药物的耐药机制.白念珠菌B基因型菌株对ITR有更高的耐药性.     

抗真菌药的进展回顾与临床评价

真菌(Fungus)有别于细菌,其细胞壁肥厚并有明显的细胞核。常见的条件致病菌主要有念珠菌、白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌(耐氟康唑)、其他念珠菌、隐球菌、毛霉菌、曲霉菌。其发展趋势为念珠菌属中非白念珠菌株增多,不同临床科室的病人所发生感染的真菌不同,在同一人体内可同时伴有两种或两种以上的真菌感染。     

大蒜素与两性霉素B体外联合应用抑制白色念珠菌菌丝形成的研究

目的  研究大蒜素与两性霉素B体外联合应用对白色念珠菌菌丝形成的抑制作用,并检测联合应用时细胞毒性的变化。方法  采用微量稀释法测定两类药物联合抗白色念珠菌的作用,采用FICI法对联用结果进行评价。用10％小牛血清RPMI 1640培养基诱导菌丝形成,检测大蒜素与两性霉素B联合应用对白色念珠菌芽管率和菌丝形成的影响。通过对细胞形态的观察及MTT法检测联合用药后对人宫颈上皮细胞H8毒性的变化。结果  两种药物联用对白色念珠菌表现为协同作用,大蒜素能够加强两性霉素B抑制菌丝形成的能力,联合用药后能够显著降低对H8细胞的毒性。结论  大蒜素能够提高两性霉素B抗白色念珠菌的作用,是临床上减少两性霉素B用量,减轻其副作用的最佳选择。     

抗白色念珠菌IgY的稳定性与应用研究

目的：观察抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY的稳定性与体外生物学效应。方法：用水溶法从免疫鸡蛋黄中提取抗白色念珠菌抗体IgY,ELISA法检测抗体耐热,耐酸,耐碱的稳定性,观察IgY抑制白色念珠菌生长和抑制白色念珠菌粘附肠上皮细胞（IEC－6）,结果：IgY在巴氏消毒后活性为对照的61％,在pH7.0至3．0酸性环境中活性改变不显著,在pH7.9,37℃作用150min活性仍对照的60％,IgY在10mg/ml时能明显抑制白色念珠菌生长和对肠上皮细胞的粘附,明显降低细胞上清二胺氧化酶（DAO）释放。结论：鸡蛋黄抗抗IgY具有高度稳定性和良好的体外生物学效应。,     

肾移植术后患者白念珠菌分离株的唑类药物敏感性观测

目的 了解肾移植术后患者分离的白念珠菌对唑类药物的敏感性。方法 参照美国国家临床实验标准委员会(NCCLS)公布的M27-A方案微量稀释法,对我院近年的19株肾移植术后患者的白念珠菌临床分离株进行氟康唑和伊曲康唑药物的敏感性观测。结果 19株临床分离株中,发现氟康唑耐药株7株,敏感株8株,剂量依赖的敏感菌株4株;伊曲康唑耐药株9株,敏感株8株,余2株为剂量依赖的敏感菌株。结论 目前肾移植患者人群白念珠菌分离株存在严重的唑类药物耐药,而且氟康唑和伊曲康唑之间也存在交叉耐药。     

等离子体体外抑制白假丝酵母菌生长的实验研究

选择白假丝酵母菌ATCC10231 作为实验菌株,以低温等离子体对其进行照射,观察照射后菌落生长情况. 经低温等离子体照射30、60、120、180 s后,在培养基中心照射位置处,出现明显的抑菌环,随着照射时间的延长,抑菌环逐渐增大;连续观察3 d,抑菌环没有改变. 低温等离子体在体外可抑制白假丝酵母菌的生长,为其将来成为治疗白假丝酵母菌感染的一种新手段提供了实验室依据.     

临床常见念珠菌对抗真菌药物体外敏感性的研究

目的:研究念珠菌对6种抗真菌药物的敏感情况。方法:念珠菌收集2004年7月~2005年4月临床患者提供的标本,测定从临床血液、尿液、痰等标本中分离的300株常见念珠菌对两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、咪康唑、克霉唑、酮康唑的敏感性。结果:白色念珠菌最常见占64.0%,其次为热带念珠菌占19.7%,光滑球拟酵母菌占11.7%,近平滑念珠菌占2.3%,其他念珠菌占2.3%。临床常见念珠菌对两性霉素B、制霉菌素、氟康唑敏感性最高,对唑类药物存在不同程度的耐药性。结论:应加强对念珠菌药物敏感性的检测,以指导临床抗感染治疗合理选择药物。     

Effects of Two Curcuminoids on Candida albicans

Objective To investigate and compare the action of curcuminoids on the causal pathogens of Candida albicans growth. Methods The effects of curcumin (CUR) and demethoxycurcumin (DMC) on C. albicans growth were first investigated and compared by microcalorimetry coupled with multiple analytical methods. The quantitative thermo-kinetic parameters obtained from these curves were analyzed to show difference of the actions. Results By analyzing the main parameters screened from principal component analysis together with 50% inhibiting concentration values, it was demonstrated that both CUR and DMC showed good antifungal activities and CUR was stronger. It was further concluded from structure-activity relationship that the existence of methoxy group might enhance lipophilicity of the mother nucleus, which made it easier for the molecular to enter into the cell membrane of fungi to inhibit its growth. Conclusion This study provides a new method for screening new antifungal agents with high efficacy and low toxicity. Meanwhile, it contributes to the application of curcuminoids as food additive, colorant, and drug. Microcalorimetry is real-time, online, and dynamic, and it could be used to characterize the subtle difference among the effects of synthetic and natural products on the vital process of fungi.     

Antifungal susceptibility analysis of berberine, baicalin, eugenol and curcumin on Candida albicans

Objective： To analyze the antifungal effects of Chinese herb monomers, i.e. berberine, baicalin, eugenol and curcumin, on Candida albicans. Methods： After Candida albicans strain Y01-09 was incubated for 48 h in YEPD broth which contained different concentrations of Chinese herb components, the cell cycle, fluorescent intensity and the size of cell volume were detected by flow cytometry. Results： The 4 Chinese herb monomers could affect the cell cycle of Candida albicans in different ranges. The ratio of cells in S-G2-M period decreased as the agents concentration increased, indicating that the cell division was inhibited. The fluorescent intensity of Candida albicans cells became weaker after being incubated, which reflected the loss of DNA fragments. The higher the concentration was, the weaker the fluorescent intensity became. The cell size, cell diopter and particle size changed much as the agents concentration increased. Conclusion： Chinese herb monomers play the antifungal role in inhibiting cell division. FCM could be used to determine the susceptibility of antifungal agents.     

白色念珠菌对人肺上皮细胞的黏附作用及其影响因素

目的　在体外研究白色念珠菌临床分离株对人肺上皮细胞的黏附作用及其影响因素。方法　将不同浓度的白色念珠菌和人肺上皮细胞在体外作用不同的时间 ,固定后经革兰染色 ,在倒置显微镜下计数白色念珠菌黏附人肺上皮细胞的黏附数。观察胰酶、白色念珠菌培养上清液、加热等处理因素对白色念珠菌黏附人肺上皮细胞的影响。结果　白色念珠菌的黏附与浓度、时间有关 ,在 5× 10 3～ 5× 10 7CFU/ml范围内 ,黏附数随浓度的增加而增加。该黏附作用 15min后趋于饱和。在 15min内 ,白色念珠菌对肺上皮细胞的黏附随时间的延长而增强。白色念珠菌经胰酶或 10 0℃ 30min处理后黏附数降低 ,培养上清液及上清液经加热或胰酶处理后都能抑制白色念珠菌的黏附作用。结论　白色念珠菌对人肺上皮细胞的黏附作用与浓度和时间有依赖的关系 ,是特异性黏附过程。不同因素处理白色念珠菌和肺上皮细胞 ,其黏附数发生改变 ,说明黏附作用与白色念珠菌表面黏附因子和人肺上皮细胞表面的黏附受体的数量和结构有关。     

抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的：观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法：应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡,通过改良水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY,双紫外光测定抗体含量,SDS-APGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定该抗体来源,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果：抗体含量13mg/ml蛋黄液,抗体纯度达到95%,Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性,其具有良好的热稳定性。结论：鸡蛋黄内含有丰富的抗体,通过WD水溶提取法可得到高产量,高纯度的特异性抗体IgY,证明其来源于鸡血清中的IgG,对热具有高度稳定性。     

盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌成熟生物膜的抑制作用及其形态学的影响

目的研究盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌(Candida albicans)成熟生物膜(biofilm,BF)的影响。方法用微孔板法建立体外白色假丝酵母菌ATCC 90028 BF模型;采用甲基四氮盐(the abated tetrazolium salt,XTT)减低法定量评价盐酸氨溴索对白色假丝酵母菌成熟BF的抑制作用;银染后,倒置显微镜下观察该药对白色假丝酵母菌成熟BF的形态学影响。结果在96孔微量细胞培养板上成功建立白色假丝酵母菌BF模型;1.25、2.5、5、7.5 mg/ml的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF 12 h后,XTT减低法D(450)值分别为(0.63±0.05)、(0.52±0.08)、(0.31±0.05)和(0.11±0.03),分别与空白对照组(0.71±0.07)比较,差异有显著性(P<0.05);0.625 mg/ml的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF后,D(450)值为(0.67±0.04),与空白对照组比较,差异无显著性(P>0.05);不同浓度的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF,组间比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌成熟...