人胚肝核基质的电镜观察及蛋白电泳分析

用2mol/LNacl从人胚肝中提取核基质。对24周龄胚肝细胞核及核基质进行电镜观察，发现其具备细胞核及核基质的基本结构特点。核基质周膜界限完整。可见核孔复合物结构及核仁残骸，有比较清楚的网络状核蛋白基质纤维及颗粒。核基质经牛胰DNase酶解，再经SDS-PAGE分析，表明人胚肝核基质中的非组蛋白（NHP）种类与含量随发育过程而变化。     

一种实用有效的整装电镜制样法：K562细胞核其质—中间纤维…

采用培养板钻孔后覆以Ｆｏｍｖａｒ膜代替金网为支撑物培养细胞，并改良了抽提条件及观察条件，对人红白血病细胞Ｋ５６２的核基质－中间纤维体系结构进行了观察。结果显示，Ｋ５６２细胞核基质粗细不等、分布不规则的纤层与核基质相连。本结构，胞质中的中间纤维主要呈放射状分布，并借网板状的核纤层与核基质相连。本研究所采用的整装电镜制样的方法与同类方法相比较，材料来源方便、经济，盲目性小，研究所采用的整装电镜制样方法     

杜氏盐藻核基质的制备

目的：制备盐藻核基质,进而分离核基质结合区(matrix attachment regions)。方法：采用体积分数0．5％ TritonX—100破碎细胞,体积分数15％Percoll分离盐藻细胞核,二碘水杨酸锂(1ithium diiodosalicylate,LIS)抽提核蛋白,SDS—PAGE电泳分析蛋白质成分。结果：分离出了高纯度的盐藻细胞核,电泳分析表明绝大部分核蛋白已被去除。结论：体积分数0．5％TritonX—100能有效破碎盐藻细胞,体积分数15％Percoll可分离高纯度的盐藻细胞核,25mmol／L LIS抽提可除去盐藻绝大部分核蛋白获得核基质。     

ADP—核糖基化对大鼠肝,脾细胞核转录活性的影响

ADP-核糖基化对大鼠肝、脾细胞核RNA聚合酶(Ⅰ Ⅲ)、Ⅱ[简称pol(Ⅰ Ⅲ)、polⅡ]的转录活性均有抑制作用,对pol(Ⅰ Ⅲ)活性的抑制率高于polⅡ,提示ADP-核糖基化是肝、脾细胞核RNA聚合酶,特别是pol Ⅰ活性的影响因素。当核糖化液中加入ADP-ribose转移酶(ADPRT)的特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB),核糖基化对细胞核转录活性的抑制作用消失,进一步确证了RNA聚合酶活性的降低是由于ADP-核糖基化所致。     

紫杉醇作用于肺癌A549细胞核转录因子荧光素酶值变化的意义

目的?研究紫杉醇作用于肺癌A549细胞核转录因子荧光素酶值变化的意义。方法?于含10%胎牛血清RPMI1640培养基中,在37℃、5% CO₂条件下细胞培养,转染核转录因子κB（NFκB）及环磷酸腺苷（CREB）质粒,单光子仪测定检测荧光素酶值,激光共聚焦显微镜观察NFκB核易位。结果? 紫杉醇组NFκB及CREB荧光素酶均值分别为22387±1805、70403±4446明显高于未加药物的空白对照组1967±539、2607±665 (P<0.01),激光共聚焦显微镜观察到NFκB在紫杉醇作用下由细胞核转出到细胞质内。结论?紫杉醇作用于肺癌A549细胞后,核转录因子NFκB及CREB荧光素酶值升高,提示活性增强,紫杉醇可以使NFκB转入到细胞核。      

食管癌细胞核基质蛋白电泳行为的分析

以Robinson法制备食管癌细胞核基质，用10%分离胶，4%浓缩胶进行SDS-PAGE分离。结果表明，食管癌细胞核基质在4KD-60KD区间含有五条浓染蛋白区带。这五条核基质蛋白在食管癌细胞核中同样出现，但含量较低，这表明它们是一组富集的核基质蛋白。     

核因子kappa B的结构与功能研究进展

核因子kappaB是一种重要的核内转录因子，在细胞炎性反应、免疫反应以及细胞凋亡等过程中起着举足轻重的作用。自10多年前被发现开始，其结构、功能及作用机制就一直是研究的热点。作者就近年来在核因子kappaB结构和功能上的研究进展作一回顾，并简要介绍核因子kappaB的抑制因子和辅转录因子及其与其他转录因子之间的相互作用。     

NF-κB信号转导通路及其与椎间盘退变的相关性研究进展

核因子κB(NF-κB)是一个可诱导转录因子,紧密地调节着大群基因的表达。NF-κB的激活在细胞质及细胞核内被紧密地调控着,其异常激活与感染、炎症性肠病、风湿性关节炎及肿瘤等疾病相关。NF-κB可能在椎间盘退变中起重要作用。新近研究显示退变椎间盘中有NF-κB的表达,其在椎间盘中的激活,能调节许多细胞因子、趋化因子、黏附分子、炎性介质和基质降解酶的表达,从而诱发椎间盘的退变。     

一种实用有效的整装电镜制样法──K_（562）细胞核基质─中间纤维的研究

采用培养板钻孔后覆以Ｆｏｒｍｖａｒ膜代替金网为支撑物培养细胞，并改良了抽提条件及观察条件，对人红白血病细胞Ｋ５６２的核基质－中间纤维体系结构进行了观察。结果显示，Ｋ５６２细胞核基质为粗细不等、分布不规则的纤维交织而成的网状结构，胞质中的中间纤维主要呈放射状分布，并借网板状的核纤层与核基质相连。本研究所采用的整装电镜制样方法与同类方法相比较，材料来源方便、经济，盲目性小，人工假象少，成功率较高，所得的Ｋ５６２细胞核基质－中间纤维图像清晰，为研究哺乳类红系细胞终末分化期的自然排核机理提供了有效手段，并为进一步探讨核基质－中间纤维体系在肿瘤细胞恶性调控中所起的作用奠定了形态学基础。     

核转录因子Egr-1及其在肿瘤性疾病中的研究进展

大量的研究发现,细胞外信号通过细胞质中的信号转导通路,可激活核转录因子即刻早期反应因子(Egr-1)的表达合成,使其进入细胞核内,调控细胞核内的相关靶基因的转录表达,使细胞产生适应性变化。因此细胞的许多生物学功能可归因于转录因子Egr-1的表达活化。本文探讨了在细胞增殖和细胞凋亡的过程中,转录因子Egr-1的生物学功能。特别是其在肿瘤性疾病发生、发展中的作用已成为近年来研究的热点。     

核基质对成骨细胞的调控作用

核基质蛋白及核基质结合蛋白在成骨细胞的增殖分化、信号转导以及凋亡等过程中均扮演着重要角色.本文概述了Nmp4/CIZ、Satb2、DNA TopoisomeraseⅡ等重要核基质蛋白在成骨细胞上述过程中的调控作用.     

组织原位核基质制备方法的建立

目的：建立组织原位核基质(NM)制备法。方法：用改进的硫酸铵沉淀法对食管癌组织冷冻切片进行NM制备。结果：经NM制备后切片的组织结构基本保持完好，细胞核淡染，呈丝网状，组蛋白H1染色阴性，Feulgen DNA染色弱阳性。结论：建立了可保持完好组织结构的原位NM制备法。     

人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析

目的分离、克隆人基因组随机MARs片段,分析其序列特征,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础.方法用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核,分离人T细胞基因组随机MARs片段,并将其克隆进入PUC19质粒;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序,生物信息学分析其序列的特征.结果从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段,构建成MARs库,初步任意挑选58个克隆,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性,对其中1个克隆的序列分析表明,其序列AT含量较高,不仅含有AC-和ATAT基序,还包含有多个转录/复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列.结论分离获得的DNA片段具有MAR的特性,同一DNA序列中存在不同的元件组合,其参与基因表达调控的功能应该是复杂、多样的.     

胃癌组织核基质与p16基因上游序列的相关性研究

目的 :研究胃癌组织核基质蛋白与 p16基因上游序列的相关性。 方法 :应用SDS PAGE技术和Southwestern印迹技术 ,对 2 2例胃癌组织、癌旁组织及正常组织的核基质蛋白进行研究。结果 :与正常组织比较 ,胃癌组织 3 0kD、2 8kD的核基质蛋白表达量明显减少 (P <0 .0 5 ) ;不同分化类型及不同临床分期胃癌组织间比较 ,3 0kD、2 8kD核基质蛋白表达量无明显差异 (P >0 .0 5 )。正常组织核基质蛋白与p16基因上游序列的结合主带为 2 8kD、3 0kD、40kD、43kD、5 0kD ,胃癌组织中为 40kD、66kD。胃癌组织与正常组织比较 ,66kD结合阳性信号明显增强 (P <0 .0 5 ) ;而不同分化类型及不同临床分期胃癌组织间 ,66kD结合阳性信号无显著性差异。结论 :胃癌组织中核基质蛋白的改变及 66kD蛋白与p16基因上游区结合量的异常可能是胃癌发生的早期分子事件。     

尿核基质蛋白在膀胱癌中的临床意义

目的：探讨尿核基质蛋白22（NMP22）测定在膀胱癌诊断中的临床应用价值。方法：应用免疫酶标记法（ELISA）检测28例初发性膀胱癌,10例复发性膀胱癌和20例对照组尿中NMP22水平。初发性膀胱癌组中有10例患者在术后5～7d再次检测其尿NMP22。结果：初发性膀胱癌组尿NMP22的中位数为27．1149IU／mL,复发性膀胱癌组为13．001IU／mL均明显高于对照组1．6574IU／mL（P〈0．001）;初发性膀胱癌患者尿NMP22随肿瘤病理分级的递增而升高。lO例初发性膀胱癌患者术后复测尿NMP22,结果较术前明显下降。结论：尿NMP22作为膀胱癌的肿瘤标记物具有较高的特异性和敏感性,并可在一定程度上反映肿瘤的恶性程度和预后。     

胃癌组织中核基质蛋白的变化

目的：研究胃癌组织核基质蛋白的改变。方法：应用SDS－PAGE技术及Geneools定量分析软件，对22例胃癌组织及正常组织的核心基质蛋白进行了研究，结果：胃癌组织与正常组织比较，Mr为30000，28000的核基质蛋白表达量明显减少（P＜0．05），不同分化类型及不同临床分期胃癌组织间比较，此种核基质蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0．05），结论：胃癌组织中核基质蛋白的改变可能在肿瘤的早期已经发生，是胃癌发生的早期分子事件。     

核基质蛋白22对膀胱移行上皮癌的诊断意义及临床应用

目的探讨核基质蛋白22(NMP22)检测膀胱癌的意义.方法应用酶联免疫吸附试验检测90例患者(其中膀胱癌40例,非膀胱癌患者50例)尿中的NMP22的水平,并与尿脱落细胞学(UC)检查比较.结果膀胱癌组患者术前的NMP22水平较对照组明显升高(分别为115.6 U/ml及6.1 U/ml),统计学上差异显著(P＜0.001),血尿不影响NMP22的检测.NMP22较UC敏感性高,但特异性不如UC.结论 NMP22检测膀胱癌的敏感性较高,可用于膀胱癌的筛选及术后随诊.     

系膜增殖性肾炎核因子-κB活化及其与系膜基质扩大的关系

目的：探讨系膜增殖性肾炎（MsPGN)患儿肾组织中核因子－kB(NF-kB)的活化及其与系膜基质扩大的关系,明确NF－kB在MsPGN发病机制中的作用。方法：应用免疫组化及真彩色医学图像分析系统观察MsPGN患儿肾活检组织中VF－kB的活化,并分析其与MsPGN病理改变的关系。结果：MsPGN患儿肾小球及肾小管中NF－kB的活性显著增加,且与MsPGN病理程度及肾间质中单核细胞浸润密切相关。肾小球中NF－kB的活化与系膜基质扩大呈直线相关。结论：NF－kB的活化在MsPGN发病机制中发挥着重要作用,阻断NF－kB的活化将可能为防治MsPGN的发生和进展提供新的思路。     

胃癌组织中核基质蛋白与P16基因上游序列结合检测

目的 :研究胃癌组织核基质蛋白与p1 6基因上游序列的结合情况及其意义。方法 :采用Southwestern印迹技术及Genetools定量分析软件 ,对 2 2例胃癌及相应正常组织的核基质蛋白与P1 6基因上游序列的结合进行了检测。结果 :正常胃组织核基质蛋白与p1 6基因上游序列结合主带的相对分子质量 (Mr)为 2 80 0 0、30 0 0 0、4 0 0 0 0、4 30 0 0、5 0 0 0 0 ,胃癌组织中为 4 0 0 0 0、6 6 0 0 0。与正常胃组织比较 ,胃癌组织中核基质蛋白与P1 6基因上游序列结合的6 0 0 0主带阳性信号明显增强 (P <0 .0 5 ) ;而不同分化程度及不同临床分期胃癌组织间 ,此主带阳性信号强度差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :胃癌组织中 6 6 0 0 0蛋白与p1 6基因上游区结合量的异常可能是胃癌发生的早期分子事件。