慢性心衰大鼠心肌细胞内异常钙诱导钙释放的研究

目的研究慢性心衰大鼠心肌细胞内异常的钙诱导钙释放。方法将实验动物分为手术组和假手术组,运用全细胞膜片钳、激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹（Western-blot）等方法研究胞浆内钙诱导钙瞬变及钙调控相关蛋白L-型钙通道（LTCC）表达的变化。结果慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=12.72±1.13）显著低于对照组大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=28.87±2.02,P〈0.01）;慢性心衰大鼠心肌细胞内LTCC的表达较对照组下调。结论 LTCC表达下调所致心肌兴奋-收缩耦联的异常是导致心衰的原因之一。     

槲皮素对大鼠血管平滑肌肌张力的影响

[目的]观察槲皮素对血管平滑肌肌张力的影响并初步探讨其机制。[方法]Wistar大鼠,取胸主动脉,制成血管环,采用离体血管环灌流法,观察不同浓度的槲皮素对血管平滑肌肌张力的影响。[结果]对于内皮完整的血管环,低浓度（≤10-5mol.L-1）槲皮素可明显抑制去甲肾上腺素或氯化钾引起的血管收缩,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性;对于去内皮的血管环,抑制作用则不明显;高浓度（〉10-5mol.L-1）槲皮素,无论是对于内皮完整的还是去内皮的血管环,均可使血管收缩,其收缩作用可被异博定阻断。[结论]槲皮素在低浓度时,对于非内皮损伤所致的高血压具有一定的降压作用;同时槲皮素可激活血管平滑肌L-型钙通道,因此高浓度则表现出相反作用。     

大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙通道亚型研究

目的　研究大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞钙离子通道的亚型。方法　利用全细胞膜片钳技术 ,在维持电压 - 70m V的条件下 ,给予细胞 4 0 ms,从 - 6 0 m V到 +6 0 m V的序列除级方波 ,阶跃 10 m V,引导出钙通道电流 (ICa) ,观察不同类型钙通道阻滞剂对 ICa的影响。结果　用 10 μmol/ L 硝苯地平 (NIF)、 1μm ol/ Lω- conotoxin GVIA和 10 0 nmol/Lω- agatoxin IVA灌洗细胞 10 m in,对 ICa有明显的抑制作用 ,抑制率分别为 (44 .6± 2 .0 ) %、 (31.3± 2 .0 ) %和 (2 0 .6± 2 .0 ) %。结论　在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞中 ,L 型钙通道是主要的 ,同时也存在 N型和 P/ Q型钙通道     

槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌caspase-3基因蛋白表达的影响

为观察槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌细胞半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )基因蛋白表达的影响 ,采用大鼠急性心肌缺血模型 ,应用免疫组织化学PAP法检测caspase 3基因蛋白的表达 ,并用图像分析系统进行定量分析。发现 :大鼠急性心肌缺血后心肌细胞caspase 3基因蛋白表达明显增强 ,槲皮素预保护可降低caspase 3基因蛋白的表达。提示 :槲皮素对急性心肌缺血损伤有保护作用 ,这种保护作用可能是通过抑制心肌细胞caspase 3基因蛋白的表达实现的。     

大鼠基底动脉和肾动脉肾上腺素受体的异质性

用离体小血管收缩功能实验法比较了Ｗｉｓｔａｒ大鼠基底动脉（ＢＡ）和肾动脉（ＲＡ）β和α（α_１和α_２）肾上腺素受体分布和功能的差异。结果表明：（１）由β受体介导的非内皮依赖性舒张反应在ＢＡ明显强于ＲＡ，提示ＢＡ的β受体分布多于ＲＡ。（２）大多数ＢＡ对α_１激动剂无反应，仅个别ＢＡ对α_１激动剂显示一种低亲和力、低效能的收缩反应，这与ＲＡ明显不同。提示大多数ＢＡ无α_１受体分布，仅个别ＢＡ有α１受体分布，但其亚型可能不同于ＲＡ上的α_１受体亚型。（３）无论是保留内皮还是去除内皮，ＢＡ对α_２受体激动剂ＢＨＴ９２０（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）均无反应，而在ＲＡ保留内皮对ＢＨＴ９２０（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）呈舒张反应，去内皮后则呈收缩反应。提示在大鼠ＢＡα２受体分布极少，而在ＲＡ则有α_２受体分布，且内皮之α_２受体介导内皮依赖性舒张反应，平滑肌之α_２受体介导内皮非依赖性收缩反应。     

槲皮素对压力超负荷所致大鼠心肌肥厚的影响

大鼠腹主动脉部分狭窄５周后，形成实验性心肌肥厚模型，心肌和左心室重量明显增加，心肌过氧化脂质含量显著增加，ＳＯＤ活性下降，心肌和主动脉Ｃａ＾２＋含量明显增加。给槲皮素７５，１５０ｍｇ／ｋｇ后均能明显降低心肌和左心室降低心肌ＬＰＯ含量，增加ＳＯＤ活性，降低心肌和主动脉Ｃａ６２＋的含昨，提示槲皮素抗心肌肥厚作用与清除氧自由基和钙拮抗有关。     

槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用机制的研究

目的 研究槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用的机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为假手术组、心衰组、低（5 mg·kg-1）、中（10 mg·kg-1）、高（20 mg·kg-1）剂量槐定碱干预组（每组12只）,运用激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹等方法研究各组心肌细胞胞浆内咖啡因诱导钙瞬变及钙泵（SERCA2a）表达的变化.结果 与假手术组相比较,心衰组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度显著下降（18.33±1.52与36.18±2.64,P＜0.05）;中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度较心衰组明显升高（33.45±2.47、32.19±1.98与18.33±1.52,P＜0.05）;心衰组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较假手术组明显下调,中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较心衰组均明显升高.结论 SERCA2a表达上调促使肌浆网内钙容量增加是槐定碱心肌保护作用的主要机制之一.     

Effect of micronized fenofibrate on vascular endothelial function in patients with hypertriglyceridemia

Objective To investigate the effect of micronized fenofibrate on vascular endothelial function in patients with hypertriglyceridemia. Methods Using high-resolution ultrasound, we measured flow- and nitroglycerin-induced dilatation of the brachial artery in 30 patients with hypertriglyceridemia before and after treatment with micronized fenofibrate at a dose of 200 mg once daily for 4 weeks. Simultaneously, both serum lipid and plasma endothelin (ET) levels were determined.Results After micronized fenofibrate therapy, serum triglyceride (TG) levels decreased significantly (P<0.05). Plasma ET levels also decreased markedly ［(82.66±15.46） μg/L vs. （106.22±19.16） μg/L, P<0.001］. Flow-induced vasodilatation was much improved (11.0%±9.0% vs 2.7%±2.0%, P<0.01). However, no significant changes in vasodilatation occurred in response to nitroglycerin (16.2%±6.0% vs 15.0%±5.0%, P>0.05) in patients with hypertriglyceridemia. Conclusions Micronized fenofibrate can improve impaired endothelium-dependent vasodilatation in patients with hypertriglyceridemia. Improving endothelial function may also be the mechanism responsible for the beneficial effects of micronized fenofibrate.     

ROS对内皮细胞胞浆游离钙水平的影响

目的探讨活性氧（ROS）在TNFα刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）胞浆游离钙水平变化中的作用。方法用氧化-还原敏感的荧光探针2,7-Dichlorofluorescein（DCF）检测细胞内氧化-还原水平。用激光共聚焦显微镜检测胞浆游离钙浓度。结果TNFα（200U/ml）处理24h后,HUVEC胞内ROS水平和游离钙浓度均明显升高;NAC（20mmol/L）预处理可明显抑制胞浆内游离钙浓度（P〈0.01）。结论ROS部分介导了TNFα对胞浆内游离钙水平的诱导作用。     

缺血再灌注致心律失常大鼠模型钙调蛋白介导的L型离子通道电流的变化

目的：探讨缺血再灌注致心律失常大鼠钙调蛋白（CaM）的变化及其对L型离子通道电流的影响。方法：选取健康SD大鼠48只,以单盲法随机分为4组（n=12）;空白组不做任何处理,模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型,干预组在制备缺血再灌注致心律失常模型前肌注钙调蛋白抑制剂W-7（100μmol／kg）,假手术组仅进行开胸手术和动脉套线,无结扎。模型制备成功后,取大鼠心脏组织,以免疫印迹法检测L型钙离子通道主要亚型CaV1．2功能决定性亚单位α1C和CaM的表达水平;同时分离大鼠心肌细胞,以膜片钳技术进行L型离子通道电流（ICa,L）测定。结果：模型组大鼠心肌组织的a1C、CaM的表达水平,以及ICa,L均高于空白组和假手术组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;较模型组相比,干预组CaM的表达水平和ICa,L均有降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）;I—V曲线有所上移,a1C的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ICa,L过激所致Ca抖内流和细胞超载为缺血再灌注后心肌损伤和心律失常的重要因素之一,CaM在该病理过程中能够发挥不依赖于L型离子通道表达水平的调节作用,可作为其临床治疗的新靶点。     

五味子醇甲对大鼠离体胸主动脉环作用研究

目的:研究五味子醇甲对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能机制。方法:应用离体血管环灌流模型观察五味子醇甲对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录苯肾上腺素(PE,1×10-6mol/L)预收缩大鼠离体胸主动脉环的张力变化。采用一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,3×10-4mol/L)、鸟嘌呤环化酶抑制剂1H-[1,2,4]二唑[4,3-α]喹喔啉-1-酮(ODQ,1×10-5mol/L)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol/L)预孵后,观察五味子醇甲对血管张力变化的影响,并观察对PE诱发的内钙释放和Ca Cl2引起的外钙内流的影响。结果:在不改变基础张力的条件下,五味子醇甲对PE预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均有明显的舒张作用,差异有统计学意义(P<0.05)。预先用L-NAME、ODQ孵育后,五味子醇甲的舒张血管作用减弱,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);用INDO孵育后,五味子醇甲的舒张血管作用较对照组无明显变化;且五味子醇甲对Ca Cl2引起的收缩有明显抑制作用。结论:五味子醇甲可浓度依赖性抑制由PE引起的血管收缩,并具有内皮依赖性和非内皮依赖性。内皮依赖性机制可能与一氧化氮-环磷酸鸟苷(NO-c GMP)途径有关,非内皮依赖性机制可能与抑制血管平滑肌上的受体依赖性钙通道,降低外钙内流有关。     

槲皮素抑制脊髓小胶质细胞基质金属蛋白酶的表达改善术后疼痛的机制研究

考察槲皮素对足底切口诱发的术后疼痛的影响,并探讨其对脊髓小胶质细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9和MMP-2的抑制作用并考察其作用机制。制备小鼠足底切口术后痛模型,利用Von Frey Hairs检测小鼠机械痛阈值;利用明胶酶谱法检测槲皮素对脊髓水平MMP-9和MMP-2活力的影响;Western blot法检测小鼠脊髓小胶质细胞标记分子钙离子结合蛋白1(IBA-1)以及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化。结果发现,给予槲皮素(20,40,80 mg/kg,ip)能够显著地抑制足底切口手术引起的机械性痛觉异常以及脊髓小胶质细胞中MMP-9和MMP-2水平的升高;并抑制术后切口引起的脊髓水平IBA-1和p-p38的表达。研究结果表明,槲皮素可能通过抑制脊髓小胶质细胞中MMP-9和MMP-2的活化而改善术后疼痛。     

槲皮素对内毒素性心肌损伤的保护作用及机制

目的观察槲皮素对内毒素心肌损伤心肌的保护作用。方法C57BL/6J 小鼠随机分为阴性对照组、槲皮素对照组、内
毒素血症组以及槲皮素干预组。阴性对照组给予等体积生理盐水腹腔注射,槲皮素干预组大鼠食用含按槲皮素的鼠饲料
（100 mg/kg）。内毒素组小鼠腹腔注射LPS（10mg/kg）诱导内毒素血症模型。槲皮素干预组大鼠先食用含槲皮素（100 mg/kg）
的饲料7 d后,腹腔注射LPS（10mg/kg）。6 h后超声心动仪测定小鼠心功能;Western blot法检测小鼠心肌组织Bax、Bcl-2、NOS
和eNOS表达水平,以及血清中NO含量。同时,记录小鼠5 d生存率,并描绘生存曲线。结果槲皮素预处理后,与内毒素组相
比,小鼠心肌功能显著得到了改善;内毒素组小鼠心肌组织中iNOS蛋白水平增高,eNOS水平降低。而经槲皮素干预后,iNOS
蛋白表达量明显降低,eNOS表达水平增高;LPS处理后,Bax显著增高,Bcl-2轻微降低。槲皮素干预后,Bax降至对照组水平,
Bax/Bcl-2比值降低;内毒素组小鼠血清NO水平增高近3.5倍。槲皮素处理后,NO含量明显降低(P<0.05);内毒素组5d后小鼠
生存率为10%,而槲皮素干预组生存率达45%（P<0.05）。结论槲皮素可减轻LPS 所致的小鼠心功能不全,改善生存率。
     

钙通道在大鼠逼尿肌不稳定膀胱中的表达及变化

目的　探讨电压依赖钙通道与逼尿肌功能变化之间的关系。方法　根据膀胱压力容积测定结果将动物分为稳定组 ( 2 9只 )和不稳定组 ( 9只 ) ,其中稳定组分为BOO( 11只 )、SCI模型 ( 9只 )和对照组 ( 9只 ) ,通过RT PCR技术测定逼尿肌中L型和T型钙通道mRNA表达及变化。结果　正常大鼠中逼尿肌不稳定发生率为 2 4.3 %。L型和T型钙通道在逼尿肌中均有表达。正常对照组膀胱逼尿肌L型钙通道mRNA含量明显多于T型钙通道mRNA ,两者之比约 2 .1∶1;BOO组、SCI组和不稳定组中L和T型mRNA含量均有不同程度增加 ,T型钙通道mRNA增加更明显 (P <0 .0 1) ,两者比值明显缩小 ,分别为 1.5 3、1.41和 1.83。结论　钙通道的表达增加可能是导致平滑肌细胞自发性除极易化、兴奋性增高、引起逼尿肌不稳定的重要原因 ,其中T型钙通道起着重要的作用     

二至丸对自然衰老小鼠血液流变学及心肌能量代谢酶的影响

目的：研究长期给予二至丸对自然衰老小鼠血液流变学及心肌能量代谢的影响。方法：小鼠分为正常对照组和二至丸组,二至丸按1.8g.kg-1的剂量给予昆明种小鼠,并制备成含药饲料,自6月龄开始给药,至18月龄结束,测定其对血液流变学以及心肌组织Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、SDH、LDH活性的影响。结果：二至丸组会使红细胞聚集指数降低,但是与空白对照组比较没有统计学意义;二至丸组能提高SDH酶、LDH酶、Na＋K＋ATP酶、Ca2＋Mg2＋ATP酶的活性,与空白组比较具有显著的有统计学意义（P〈0.05）。结论：二至丸能够提高心肌有氧代谢能力,从而延缓机体衰老的进程。     

局部刺激对神经元细胞中Ca2＋螺旋波的影响

目的 研究局部刺激对神经元细胞中Ca2＋信号螺旋波的影响.方法 采用一个改进的Tang-Othmer Ca2＋模型并通过数值计算进行分析研究.结果 研究发现足够大的局部刺激可以使螺旋波波头的轨迹从一个花瓣形逐步变为一个严格的圆形轨迹.结论 通过改变局部刺激的大小可以控制神经元细胞中Ca2＋信号螺旋波的运动轨迹.     

腊梅花中槲皮素的含量测定

目的:建立测定腊梅花中槲皮素含量的HPLC分析方法。方法:色谱柱:HypersilODSC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(65∶35);流速1.0ml.min-1,检测波长:λ=254nm;柱温为25℃;进样量为10μl。结果:槲皮素在0.2-2μg(R2=0.9985)与峰面积线性关系良好。平均回收率为98.11%,RSD=2.08%。结论:HPLC分析方法操作简便、快速、准确,可用于腊梅花中槲皮素的含量测定。     

EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响

目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2（CHP2）的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1（NHE1）共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2＋的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2（NHE1/CHP2-EF3m/4m）对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2＋减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2＋;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸（EDTA）剥夺CHP2携带的Ca2＋之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2＋的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2＋的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2＋,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2＋能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2＋的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。     

HPLC法测定沙棘不同部位槲皮素和异鼠李素的含量

目的：建立沙棘茎中槲皮素、异鼠李素含量测定方法,并测定沙棘不同部位中两种苷元的含量。方法：以甲醇-0.4%磷酸（58：42）为流动相,370nm为检测波长,对甲醇提取酸水解后的样品进行含量测定。结果：沙棘茎、叶、果实中槲皮素的含量分别为：0.276、2.11、0.574mg/g,异鼠李素的含量为：0.463、1.60、0.729mg/g。结论：该方法简便、快速、结果可靠。