红花黄素对豚鼠单个心室肌细胞动作电位和钙电流的影响

目的　观察红花黄素对豚鼠单个心室肌细胞动作电位和钙电流的影响。方法　采用膜片钳全细胞式记录技术。结果　红花黄素（３３ μｇ· Ｌ－ １） 能延长单个心室肌细胞动作电位时程,由（３５９３３ ±２７１８） ｍｓ 延长至（４１３３３ ±６１８８）ｍｓ（ Ｐ＜ ００５ ,ｎ ＝ ６） 。同时增加内向 Ｌ 型钙电流的峰值,由（ － １０２１ ±７４） ｐ Ａ 至（ － １４３６ ±２１２） ｐ Ａ（ Ｐ＜ ００５ ,ｎ ＝ ７） 。结论　由于红花黄素具有上述电生理作用,可用于心力衰竭和快速性心律失常的治疗     

丹参酮Ⅱ-A对豚鼠单个心室肌细胞L-型钙电流的阻断作用

本实验采用全细胞膜片钳技术，观察了丹参酮Ⅱ－Ａ对分离的豚鼠单个心室肌细胞Ｌ－型钙电流及跨膜电位的影响. 使用#FSLangendorff装置和蛋白酶循环消化 (0.2 g·L^-1) 的方法, 获取了70%～80%的横纹清晰, 呈杆状的耐钙心肌细胞. 并使用pCLAMP 5.51微机程序和ELP-7膜片钳放大器记录心肌细胞膜电流和跨膜电位的变化. 丹参酮采用累积加药法, 所有的观察指标均在同一细胞完成. 数据分析采用配对t检验. 当使心肌细胞的保持电压为－40 mV，除极到0 mV，刺激电压的时程为250 ms，频率为0.5 Hz时，10, 20和40 μmol·L^-1的丹参酮Ⅱ－Ａ可使维拉帕米敏感的钙内向电流分别减少35.2％, 57.7％和74.7％ (P<0.05)，并能使动作电位时程亦呈剂量依赖性缩短, 冲洗后两指标均部分恢复. 该药的三种不同浓度，对不同电压最大激活的钙电流的电压依赖曲线均无影响. 结果表明，丹参酮#FSⅡ－Ａ具有类似维拉帕米样Ｌ－型钙通道阻断剂作用，其阻断作用呈非电压依赖性.     

藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响

目的　研究藻酸双酯钠 (PSS)对豚鼠心室肌细胞动作电位和L 型钙电流的影响。方法　采用全细胞膜片钳记录技术。结果　PSS明显缩短动作电位时程 (APD) ,5 0、10 0和 2 0 0mg·L-1浓度 ,分别使APD90 缩短 2 4 9% (P <0 0 5 ,n=6 )、37 7%和 4 7 7% (P <0 0 1,n =6 ) ,使APD50 缩短2 1 1% (P <0 0 5 ,n =6 )、4 5 0 %和 6 3 2 % (P <0 0 1,n =6 ) ,呈明显的剂量依赖关系。PSS浓度依赖性减小L 型钙电流 (Ica L) ,5 0、10 0和 2 0 0mg·L-1浓度 ,分别使其峰值降低34 3% (P <0 0 5 ,n =6 )、5 8 4 %和 74 9% (P <0 0 1,n =6 )。随着PSS浓度的增加 ,L 型钙电流的I U曲线逐渐上移 ,但其最大激活电压保持为 0mV不变。结论　PSS明显缩短APD ,抑制Ica L,且呈浓度依赖关系     

壬基苯酚对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响

目的：观察环境内分泌干扰物质——壬基苯酚（Nonylphenol,NP）对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响。方法：应用酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞,用全细胞膜片钳方法记录不同浓度NP作用下单个心室肌细胞L-型钙电流（如。）和动作电位（AP）的变化。结果：1）NP（10^-5、10^-7、10^-6、10^-5mol．L^-1）使ICa-l峰值电流密度分别从-3．72&#177;1．5pA／pF减少到-2．44&#177;0．4pA／pF（P〈0．05）,-2．34&#177;0．6pA／pF（P〈0．05）,-1．79&#177;0．8pA／pF（P〈0．01）,以及-1．66&#177;0．7pA／pF（P〈0．01）;2）NP使ICa-l的I—V曲线上移,但其形状和峰值电压无明显变化;3）NP对ICa-l稳态激活曲线无明显影响;4）NP可缩短动作电位复极50％和90％的时程（APD50,APD50）,但对静息电位（RP）和动作电位幅值（APA）无明显影响。结论：NP能剂量依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞ICa-l,并能够缩短动作电位时程。     

绞股蓝总皂甙对单个豚鼠心室肌细胞的钙、钠、钾电流及动作电位的影响

目的研究绞股蓝总皂甙（ＧＰ）对成年豚鼠单个心室肌细胞的动作电位（ＡＰ）、Ｌ－型钙通道电流（ＩＣａ）、快钠通道电流（ＩＮａ）以及内向整流钾通道电流（ＩＫ１）的影响。方法膜片钳全细胞记录。结果５０ｍｇＬ－１ＧＰ能使动作电位时程（ＡＰＤ９０）由给药前的（７０８±２４）ｍｓ缩短到给药后的（３９６±１６）ｍｓ（Ｐ＜０．０１），抑制率５８．１％，动作电位幅值（ＡＰＡ）由给药前的（１２１±７．２）ｍＶ降到给药后的（８６±８．６）ｍＶ（Ｐ＜０．０１），抑制率２４．１％，静息膜电位无明显影响；５～５０ｍｇＬ－１的ＧＰ能浓度依赖性阻滞ＩＣａ和ＩＮａ，但对ＩＫ１无明显影响。结论ＧＰ对缺血心肌的保护作用在于减少“钙超载”和抑制异常兴奋性的产生。     

银杏叶提取物对豚鼠心室肌细胞动作电位及L型钙离子通道的影响

目的 :观察银杏叶提取物 (EGB)对豚鼠心室肌细胞动作电位和L 型钙通道的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术的电流钳记录动作电位和电压钳记录L 型钙离子通道电流 (ICa L)。结果 :银杏叶提取物 (原液含银杏黄酮甙 0 .80 4g·L-1,银杏内酯0 .0 6g·L-1)明显缩短心室肌细胞动作电位时程(APD) ,1 80 0稀释液致APD90 缩短 13% (P <0 .0 5 ) ,1 2 0 0稀释液致APD90 缩短 2 3% (P <0 .0 5 ) ;银杏叶提取物对心肌细胞L 型钙离子通道的开放有抑制作用 ,在 1 80 0时ICa L 峰值降低 15 % (P <0 .0 5 ) ,1 2 0 0时ICa L峰值降低 4 2 % (P <0 .0 5 ) ,均呈浓度依赖性 ,随着药物浓度的增加 ,I V关系曲线逐渐上移 ,但出现电流峰值的电压不变。结论 :银杏叶提取物能明显缩短APD ,抑制心肌细胞钙离子通道的开放 ,具有明显的浓度依赖关系 ,可能是其抗心律失常的分子基础。     

17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的抑制作用

目的观察17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响及其与雌激素受体(estrogen receptor,ER)的关系。方法酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;膜片钳全细胞模式观察17β-雌二醇对单个心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响,并通过加入雌激素受体阻断剂tamoxifen(TAM)研究该作用与雌激素受体的关系。结果 17β-雌二醇(10-9～10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)pA.pF-1分别减少至(-2.4±0.3)pA.pF-1、(-1.9±0.3)pA.pF-1和(-1.1±0.3)pA.pF-1(与对照组比较,均为P<0.01,n=5)。TAM(10-7 mol.L-1)预处理后,17β-雌二醇(10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)pA.pF-1减少到(-1.0±0.2)pA.pF-1(与对照组比较,P<0.01,n=5),与未应用TAM(10-7 mol.L-1)预处理时比较,ICa-L峰电流密度值无变化(P>0.05,n=5)。结论 17β-雌二醇抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L的作用呈浓度依赖性,雌激素受体阻断剂TAM不能阻断17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞ICa-L的抑制作用,提示17β-雌二醇对ICa-L的抑制作用可能与ER作用无关。     

大黄素对豚鼠胆囊平滑肌L型钙电流的调节

目的研究大黄素对豚鼠胆囊肌条收缩及L型钙电流的调节。方法取成年豚鼠,分离胆囊肌条,使用张力传感器记录胆囊肌条的收缩活动。采用酶消化法急性分离豚鼠胆囊平滑肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录L型钙电流。结果预先加入硝苯地平,大黄素对胆囊肌条的收缩效应明显减弱。大黄素增加胆囊平滑肌细胞L型钙电流,呈浓度依赖性。与正常对照组相比,10μmol·L-1大黄素明显增强+10mV时L型钙电流幅度的(45.2±2.26)%(P<0.05)。预先加入PKC抑制剂十字孢碱,大黄素对钙电流的调节基本被抑制。结论大黄素可通过PKC途径增强胆囊平滑肌L型钙电流,从而促进胆囊平滑肌收缩。     

昆明小鼠心室肌细胞分离方法及动作电位、L型钙通道电流记录

目的 探讨耐钙昆明小鼠心室肌细胞的急性分离方法及AP、L型钙通道电流的记录。方法 采用三步灌流法灌流,首先灌流无钙台氏液,再换成含Ⅱ型胶原酶0.1 mg.ml_-1、胰蛋白酶0.01 mg.ml_-1、牛血清白蛋白0.2mg.ml_-1的无钙台氏液灌流,消化液灌流期间,每隔5min加入20μl 的20mM CaCl₂,以观察流出液是否有单个心肌细胞来判断消化终点,最后灌流含1 mg.ml_-1牛血清白蛋白的KB液,采用全细胞膜片钳记录方式记录到动作电位及L型钙通道电流。结果 可获得80～90%杆状心肌细胞,复钙后,仍有60%细胞保持静止,细胞表面干净整洁,折光性强,边缘和横纹清晰,立体感强获得60%左右的耐钙心室肌细胞,并记录到典型的AP、L型钙通道电流。结论 该分离方法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性。     

甲基黄酮醇胺对豚鼠单个心室肌细胞膜钙通道电流的影响

用蛋白酶Ｅ急性分离豚鼠心室肌细胞，采用先进的膜片钳技术，观察甲基黄酮醇胺对心室肌细胞膜钙离子通道的影响，结果发现：甲基黄酮醇胺１μｍ、５０μｍ及１００μｍ剂量依赖性地抑制心室肌细胞膜钙离子电流，进而从细胞膜通道水平直接证实了甲基黄酮醇胺的钙拮抗作用。     

氨氯吡咪及其衍生物DMA对豚鼠心肌细胞跨膜动作电位时程的影响

目的 :研究氨氯吡咪 (AM)及其衍生物二甲基氨氯吡咪 (DMA)对心室肌细胞跨膜动作电位时程(APD)的影响。方法 :利用全细胞膜片钳技术 ,观察 AM及其衍生物 DMA对豚鼠心肌细胞跨膜 APD的作用。结果 :Am可使 APD复极化 3 0 %、5 0 %和 90 %的时程 (APD3 0 ,APD50 ,APD90 )延长 3 0 %、5 2 %和 3 4%。 DMA可使APD复极化 APD3 0 、APD50 、APD90 的时程缩短 4 0 %、2 9%和 2 4 %。结论 :AM可使心肌细胞跨膜 APD延长 ,而DMA可使心肌细胞跨膜 APD缩短     

Blocking effect of tanshinone Ⅱ－Aon L－type Ca~（2＋） curent of single ventricular myocyte from guinea pig

本实验采用全细胞膜片钳技术，观察了丹参酮Ⅱ－Ａ对分离的豚鼠单个心室肌细胞Ｌ－型钙电流及跨膜电位的影响．使用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ装置和蛋白酶循环消化（０．２ｇ·Ｌ－１）的方法，获取了７０％～８０％的横纹清晰，呈杆状的耐钙心肌细胞．并使用ｐＣＬＡＭＰ５．５１微机程序和ＥＬＰ－７膜片钳放大器记录心肌细胞膜电流和跨膜电位的变化．丹参酮采用累积加药法，所有的观察指标均在同一细胞完成．数据分析采用配对ｔ检验．当使心肌细胞的保持电压为－４０ｍＶ，除极到０ｍＶ，刺激电压的时程为２５０ｍｓ，频率为０．５Ｈｚ时，１０，２０和４０μｍｏｌ·Ｌ－１的丹参酮Ⅱ－Ａ可使维拉帕米敏感的钙内向电流分别减少３５．２％，５７．７％和７４．７％（Ｐ＜０．０５），并能使动作电位时程亦呈剂量依赖性缩短，冲洗后两指标均部分恢复．该药的三种不同浓度，对不同电压最大激活的钙电流的电压依赖曲线均无影响．结果表明，丹参酮Ⅱ－Ａ具有类似维拉帕米样Ｌ－型钙通道阻断剂作用，其阻断作用呈非电压依赖性．     

氢化可的松琥珀酸钠对人和豚鼠心肌细胞钠电流的影响氢化可的松琥珀酸钠对人和豚鼠心肌细胞钠电流的影响

目的研究氢化可的松琥珀酸钠对人心房肌细胞和豚鼠心室肌细胞钠电流的影响。方法应用酶解法分离单个心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录氢化可的松琥珀酸钠对钠电流的作用。结果氢化可的松琥珀酸钠(1,3,10 μmol·L^-1)浓度依赖性地抑制人心房肌细胞和豚鼠心室肌细胞钠电流,IC₅₀分别为6.97和8.74 μmol·L^-1。氢化可的松琥珀酸钠不改变i_Na的最大激活电压。氢化可的松琥珀酸钠对钠电流的抑制作用起效快,见于用药后1～3 min。结论氢化可的松琥珀酸钠浓度依赖性地抑制钠电流,此作用出现快,提示可能与非基因组效应有关。     

阿米洛利对豚鼠心肌细胞钾电流及钙电流的作用

目的研究阿米洛利（amiloride）对豚鼠心肌细胞钾电流及钙电流的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录豚鼠心室肌细胞钾通道及钙通道电流。结果阿米洛利在10~100 μmol·L^-1抑制L型及T型钙电流,不改变钙电流I-V曲线的形状，仅抑制这两型电流的幅度。当累积浓度达100 μmol·L^-1时，阿米洛利轻微抑制快激活延迟整流钾电流(I_Kr)，对慢激活延迟整流钾电流(I_Ks)无影响。阿米洛利在1~100 μmol·L^-1浓度依赖性地抑制内向整流钾电流(I_K1)。结论阿米洛利抑制电压依赖性的钾、钙电流，为其抗心律失常作用提供了离子基础。     

甘草次酸对大鼠心室肌细胞L型钙离子电流的影响

目的观察甘草次酸（glycyrrhetic acid ，Gta）对大鼠单一心室肌细胞L型钙离子电流（ICa L）的影响。方法以Langendoff匀速灌流体外大鼠心脏，Ⅰ型胶原酶酶解分离单一大鼠心室肌细胞， 将心室肌细胞悬液放入容积为0.2～0.3 mL的浴槽内，间隔相同时间分别向浴槽内加入0.1，1.0，10.0 μmol·L^-1 Gta，应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度Gta对单一大鼠心室肌细胞ICa-L的影响；保持电位为－30 mV、指令电位为－40～＋60 mV、步阶脉冲为10 mV、时程为300 ms、刺激频率为0.5 Hz的条件下，引出钙离子电流，取指令电位与相对应的钙离子通道电流作用结果制作不同浓度Gta下L型钙离子通道的电流-电压(I-V)关系曲线。结果Gta浓度分别为0.1，1.0， 10.0 μmo1·L^-1 时可剂量依赖性地降低ICa-L，分别使ICa-L从加入Gta前的（2.30±0.29） nA降至(1.96±0.34) ，(1.37±0.24) ，（0.66±0.20） nA（与加入Gta前比较，均P＜0.01）；Gta 0.1，1.0， 10.0 μmo1·L^-1 也可抑制L型钙离子I-V曲线，使I V曲线上移，但峰值电流不变。结论Gta通过阻滞L型钙通道抑制L型钙离子内流，这种机制可能与Gta抗心律失常作用有关。     

维司力农结构改造物FPA对豚鼠心肌细胞钙电流的影响

目的用膜片钳全细胞记录法观察FPA对分离的单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica-L)的影响。方法采用急性酶分离法(胶原酶 白蛋白)分离单个豚鼠心室肌细胞,在生物倒置显微镜下对豚鼠心室肌细胞进行膜片钳全细胞记录。实验采用空白试验组,加药组(FPA组),二甲亚砜组进行对造,在实验中FPA以三种浓度给药(0.75,1.0和1.25 mmol.L-1)。实验中保持电位为-40 mV,刺激频率为0.1 Hz,刺激时间200 ms,以10 mV为一阶跃逐级去极化到 60 mV,通道电流经膜片钳负反馈放大器放大,再用pClamp 7.0软件的数据采集系统采样和最后分析。结果FPA增加Ica-L。0.75 mmol.L-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.1181±1.404)pA/pF增至(4.907±1.208)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为19.16%;1.0 mmol.L-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.519±1.106)pA/pF增至(7.483±2.154)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为65.58%;1.25 mmol.L-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(3.288±1.038)pA/pF增至(8.345±0.172)pA/pF(n=4,P均<0.05),增加率为153.80%。FPA使Ica-L的电流-电压曲线下移,但不改变其激活、峰值和反转电位,亦不改变细胞的静息电位。结论FPA对Ica-L的促进作用为其强心效应的离子基础之一。     

赛庚啶对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

应用全细胞记录式膜片钳技术研究了赛庚啶(Cyp)对豚鼠心室肌细胞慢钙电流(I_(Ca))的影响,Cyp 3和8μmol·L~1对I_(Ca)的电流-电压关系曲线(I-V曲线)之各电流均有降低作用,使I-V曲线上抬;在指令电位0 mV时,I_(Ca)为次最大值,Cyp 0.3～10μmol·L~1使该I_(Ca)呈浓度依赖性降低,IC_(50)值为1.98μmol·L~1,还观察到Cyp 1μmol·L~1明显增加外向电流(I_(out)),且四乙基铵(TEA)1 mmol·L~1对其有显著的拮抗作用,但对控制电位从80 mV跃升至-40 mV时所出现的瞬时快内向电流,无明显影响.以上结果直接证明了Cyp对心室肌细胞钙跨膜转运有明显降低作用,还可能增加钾外流。     

维司力农结构改造物FPA对豚鼠心肌细胞钙电流的影响

目的用膜片钳全细胞记录法观察FPA对分离的单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica-L)的影响。方法采用急性酶分离法(胶原酶+白蛋白)分离单个豚鼠心室肌细胞,在生物倒置显微镜下对豚鼠心室肌细胞进行膜片钳全细胞记录。实验采用空白试验组,加药组(FPA组),二甲亚砜组进行对造,在实验中FPA以三种浓度给药(0.75,1.0和1.25 mmol·L^-1)。实验中保持电位为-40 mV,刺激频率为0.1 Hz,刺激时间200 ms,以10 mV为一阶跃逐级去极化到+60 mV,通道电流经膜片钳负反馈放大器放大,再用pClamp 7.0软件的数据采集系统采样和最后分析。结果FPA增加Ica-L。0.75 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.1181±1.404)pA/pF增至(4.907±1.208)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为19.16%;1.0 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(4.519±1.106)pA/pF增至(7.483±2.154)pA/pF(n=6,P均<0.05),增加率为65.58%;1.25 mmol·L^-1FPA使Ica-L最大峰值电流从(3.288±1.038)pA/pF增至(8.345±0.172)pA/pF(n=4,P均<0.05),增加率为153.80%。FPA使Ica-L的电流-电压曲线下移,但不改变其激活、峰值和反转电位,亦不改变细胞的静息电位。结论FPA对Ica-L的促进作用为其强心效应的离子基础之一。     

甲基莲心碱对心肌细胞I_(Na)、I_(Ca-L)及稳态外向K~+电流的影响

目的　为证明甲基莲心碱（ Ｎｅｆｅｒｉｎｅ, Ｎｅｆ） 对单个心肌细胞离子通道电流的影响及抗心律失常作用的离子通道机制。方法　采用全细胞记录膜片钳技术,记录了 Ｎｅｆ 对培养大鼠心室肌细胞钠电流（ Ｉ Ｎａ） 及豚鼠心室肌细胞动作电位、 Ｉ Ｎａ 、 Ｌ 型钙电流（ Ｉ Ｃａ Ｌ） 及稳态外向 Ｋ＋ 电流的影响。结果　 Ｎｅｆ ３０ ,１００ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 明显抑制培养大鼠心室肌细胞 Ｉ Ｎａ ,分别从对照水平的（３４ ±０７） ｎ Ａ 降至（２１ ±０５） 和（０４ ±０２） ｎ Ａ。 Ｎｅｆ １０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 可降低豚鼠心室肌细胞动作电位振幅、静息电位,延长动作电位时程。 Ｎｅｆ １０ ,３０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 分别使豚鼠心室肌细胞 Ｉ Ｎａ 及 Ｉ Ｃａ Ｌ从给药前的（７９ ±２１） ｎ Ａ 和（６８９ ±２４３） ｐ Ａ 降至（４０ ±１４） 、（１３ ±０６） ｎ Ａ和（３７４ ±１７２） 、（１０９ ±６７） ｐ Ａ。 Ｎｅｆ １０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 还抑制 Ｉ Ｎａ 、稳态外向 Ｋ＋ 电流和 Ｉ Ｃａ Ｌ的 Ｉ Ｖ 曲线并使后者的峰值电流电位略右移。结论　 Ｎｅｆ 有钠、 Ｌ 型钙通道阻滞作用并抑制稳态外向 Ｋ＋ 电流,这些可解释