中国人群MEF2A基因突变与冠心病易感性的关系

目的 研究冠心病相关基因MEF2A在中国人群的突变和多态性位点.方法 利用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序技术检测210例冠心病(CAD)患者及190名健康人MEF2A基因第11外显子.结果 冠心病患者SSCP电泳条带异常样本测序分析发现突变:①密码子451G/T(147191位点G→T)杂合或纯合同义突变;②147108～147131位点之间分别发生1个氨基酸(Q)、2个氨基酸(QQ)、3个氨基酸(QQP)、6个氨基酸(425QQQQQQ430)、7个氨基酸(424QQQQQQQ430)缺失;③密码子435G/A(147143位点)杂合突变.密码子451G/T杂合或纯合同义突变以及氨基酸的缺失是基因多态性,密码子435G/A考虑为新的突变.结论 中国人群在MEF2A基因第11外显子也存在多种基因多态性,其中6或7个氨基酸的缺失和1个147143位点突变可能与冠心病易感性有关.     

哈萨克族苯丙酮尿症F161S/EX6-96A→G双重突变基因杂合子鉴定

目的鉴定新疆哈萨克族苯丙酮尿症（PKU）F161S和EX6-96A→G双重突变基因杂合子。方法应用PCR及单链构象多态性（SSCP）分析技术结合基因序列测定方法确定突变类型。结果对患者PAH基因第3、5、6、7、11、12外显子分别进行SSCP实验筛检，在外显子5和外显子6中，均发现患者的SSCP电泳条带位置与正常对照不同，遂对患者的这两个外显子基因区域分别测序，结果显示：在外显子5中cDNA第482位发生了T→C突变，是F161S型基因突变，而外显子6则在cDNA第611位发生了A→G突变。是EX6-96A→G型基因突变，即患者为F161S／EX6-96A→G型双重突变基因杂合子。结论在新疆哈萨克族中检出的PKU F161S／EX6-96A→G型双重突变基因杂合子，为本民族首次报道。     

乳腺癌患者BRCA1基因外显子11突变研究

目的:检测乳腺癌患者(breast and ovarian cancer susceptibility gene 1,BRCA1)基因exon11突变情况及突变位置,探讨BRCA1突变与乳腺癌的关系.方法:采取105例乳腺癌标本为实验组,30例非癌乳腺组织为对照组.应用PCR-SSCP技术和DNA直接测序法检测所有标本BRCA1基因外显子11全部序列的突变情况.结果:30例非癌乳腺组织BRCA1基因外显子11未检出突变,105例乳腺癌中有10例发生基因突变,占总例数的9.5%.10例中2例为同义突变:2430T→C,2630T→G;8例为错义突变:2532T→G,2685T→C(2例),3191C→G,3232A→G,3667A→G(2例),3876C→A .结论:BRCA1基因外显子11突变与乳腺癌的发生关系密切,对其进行检测可能对乳腺癌的患病风险评估及早期诊断具有重要意义.     

小型猪胰淀素基因的多态性分析

目的 探讨我国3个特有的小型猪品系,巴马小型猪,五指山小型猪,中国农大小型猪胰淀素(IAP P)基因多态性分布,为我国小型猪在2型糖尿病及代谢性疾病研究中的应用提供基础资料. 方法提取3个品系小型猪血液基因组DNA,针对IAPP基因外显子3～内含子 3的部分序列进行PCR扩增,产物鉴定、测序,统计分析基因多态.结果 在所扩增的片段中共检测出2个SNPs位点,SNPs1:43G→A,位于外显子上,未引起的氨基酸的改变,突变发生在五指山猪(G/A杂合突变为16.7%,A纯合突变为83.3%)和中国农大猪 (G/A杂合突变 60%,A纯合突变为20%两个品系中. SNPs2:214C→T,位于内含子上,发生在五指山猪(T/C杂合突变为16.7%,T纯合突变为83.3%)和中国农大猪(T/C杂合突变为20%,T纯合突变为60%)两个品系中.结论 在IAPP基因外显子3～内含子3的部分扩增序列中发现了2个SNPs位点,在3个品系小型猪中的分布不同.     

糖原累积病za型分子遗传学家系研究

目的研究1例糖原累积病Ⅰa型患者发病的分子遗传学机制.方法从全血中抽提患者及其父母、姐姐和正常人基因组DNA,通过多聚酶链反应扩增葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因的5个外显子,用DNA直接测序法确定其突变位点;测定患者父母亲及其姐姐的相应序列,确定突变的遗传来源.结果患者G6Pase基因外显子5发生单个碱基纯合突变,突变碱基位于序列第727位,由G转变为T,造成剪切位点突变.患者父母亲和姐姐的G6Pase基因外显子5均发生727G→T杂合突变.结论糖原累积病Ⅰa型可直接进行DNA分析以明确诊断, 葡萄糖-6-磷酸酶外显子5的727G→T突变的发生在中国人中的发生率有待进一步研究.     

Bx亚型1例的分子生物学鉴定

采用标准分析方法分析1例Bx亚型的血清学特征,再采用PCR-SSP技术做ABO初步基因分型,并对ABO基因第6外显子和第7外显子进行测序.该标本血清学检测结果:与抗B反应为无或1+,与抗AB反应为1+或2+,自身不凝集.PCR-SSP结果为Bx02/O2.ABO基因测序结果显示:B基因外显子6出现261G缺失,297为GG纯合子,表明该标本为B型与O2杂合;外显子7直接测序出现297A ＞G,526C＞G,657C＞T,703G＞A,796C＞A,803G＞C,905A＞G,930A＞G,表明该标本为Bx02与O2的杂合;外显子7克隆测序出现803G＞C,905A ＞G,表明该标本为Bx/O2.该标本血清学表型为B型,测序结果与Genbank网站比对鉴定为ABO* Bx.02.1.1与ABO* O21.01.1.1的杂合.     

新发角膜炎、鱼鳞病、耳聋综合征1例报告并文献复习

目的通过检测1例散发型角膜炎、鱼鳞病、耳聋综合征患儿的基因突变情况,明确其诊断。方法总结患儿临床资料,提取外周血DNA,采用PCR扩增GJB2基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序。并以50例健康者作为对照。结果该患者GJB2基因外显子中的第148位碱基发生G→A杂合突变(C.148G>A),导致其编码的第50位氨基酸发生错义突变(p.D50N),患者父母均未发现该突变。患者诊断为角膜炎、鱼鳞病、耳聋综合征。结论对从临床表现上诊断困难的病例,在完善全面检查的基础上寻找基因的诊断依据是有效的诊断方法。     

中国人腓骨肌萎缩症线粒体融合蛋白2基因突变分析

目的 分析线粒体融合蛋白2(MFN2)基因在中国人腓骨肌萎缩症的突变情况,建立快速、有效和经济的基因诊断方法 .方法 应用变性高效液相色谱(DHPLC)结合DNA直接测序的方法 ,对9个常染色体显性遗传的CMT2先证者和26个散发CMT2病例共35例患者进行MFN2基因编码区17个外显子及其侧翼区的突变检测.结果 在35例腓骨肌萎缩症患者中共检测到3种MFN2基因序列变异:c.281G→A,c.395G→A和c.408A→T,其中c.395G→A(C132T)为首次报道的致病突变,c.281G→A(R94Q)为已知致病热点突变,c.408A→T(V136V)为单核苷酸多态.DHPLC突变检测的敏感性和特异性为100%.结论 首次在国内应用DHPLC结合DNA直接测序对MFN2基因进行突变检测,发现2个致病突变和1个单核苷酸多态.DHPLC结合DNA直接测序法可准确有效地用于大规模MFN2基因突变筛查.     

45例国人Wilson病基因第8外显子突变热区检测和序列分析

目的 检测中国人群Wilson病基因(ATP7B)第8外显子突变频率并进行序列分析。方法 采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)银染技术初步研究了30例患者和15例正常人ATP7B基因第8外显子突变频率，然后对突变个体直接测序，进而与临床表型作相关分析。结果 SSCP发现有6例患者出现第8外显子泳动异常(20％，6／30)，且均为杂合子；4例患者既存在2273G→T，又同时伴有2250C→G及2280G→T；前者是错义突变(即Arg778Leu)，累及Tm4区，后者由于氨基酸组成均为Leu仅是一种保守改变，对Tm4区无影响；1例患者同时存在2099A→G、2273C→T、2250C→G及2280G→T4个位点突变，前两者分别影响Tm3、Tm4区，后两者认为是保守改变；1例患者2245G insertion是一种新的突变类型，影响Tm4区。结论 提示中国人ATP7B基因第8外显子可能为一突变热区，2273G→T(Arg778Leu)是一种常见的突变类型，Tm4是常见受累功能区之一。     

乳腺癌患者BRCAl基因外显子11突变研究

目的：检测乳腺癌患者（breast and ovarian cancer susceptibility gene1，BRCAl）基因exonll突变情况及突变位置，探讨BRCAl突变与乳腺癌的关系。方法：采取105例乳腺癌标本为实验组，30例非癌乳腺组织为对照组。应用PCR—SSCP技术和DNA直接测序法检测所有标本BRCAl基因外显子11全部序列的突变情况。结果：30例非癌乳腺组织BRCAl基因外显子11未检出突变，105例乳腺癌中有10例发生基因突变，占总例数的9．5％。10例中2例为同义突变：2430T→ C，2630T→G；8例为错义突变：2532T→G，2685T→C（2例），3191C→G，3232A→G，3667A→G（2例），3876C→A。结论：BRCAl基因外显子11突变与乳腺癌的发生关系密切，对其进行检测可能对乳腺癌的患病风险评估及早期诊断具有重要意义。     

常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征6型PINK1基因的突变分析

目的探讨常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征6型(PARK6)。PINK1基因的突变及临床特征。方法应用聚合酶链反应(PCR)、DNA直接测序和限制性内切酶酶切等技术对11个常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征家系先证者进行PINKl基因的突变分析。结果在两个家系中检测出PINK1基因两个新的点突变：位于第4外显子938位的C→T,导致所编码的313位氨基酸由苏氨酸变为蛋氨酸(1313M);位于第7外显子1474位的C→T,导致第492位提前出现终止密码子,截短了后面90个氨基酸。在另一个家系中检测出一个同义突变(Y454Y)。具有PINK1基因突变的患者临床特征包括发病年龄早,病情进展慢,腱反射活跃,症状波动明显,睡眠后症状减轻,对小剂量多巴制剂反应良好,未见到由左旋多巴诱导的运动障碍。结论。PINK1基因突变是常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征的常见病因;我国大陆存在PARK6家系;PARK6具有临床异质性。     

Identification of CFTR Gene Mutations in Chinese Patients with Congenital Obstructive Azoospermia

Objective To analyze the frequency and hot spot of CFTR gene mutations in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia Materials & Methods Mutations in CFTR exon 2,3,4,5,6a,8,10,11,12,13,15A 17b, 19A,20,21and 23 were detected. PCR-single strand conformation poly-morphism (SSCP) and direct sequencing were performed on 32 patients with congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD), 17 patients with congenital unilateral absence of the vas deferens (CUAVD) and 50 normal Chinese.Results No CFTR gene mutations were detected in 50 normal Chinese. One CBAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 10 of the CFTR gene and subsequent DNA sequencing showed a 3 bp deletion at position 1 653～ 1 655, which caused the deletion of a single amino acid, phenyalanine, in codon 508, i. e. , △F 508. A shift mutation was detected in another CBAVD patient in exon 2, a 1 bp deletion at position 225, 225 delC. One CUAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 17 b of CFTR gene. Subsequent DNA sequencing showed a C-to-A transversion at position 3 295, which led to a predicted change of Leusine (codon 1 055,CUU) to Isoleucine (codon AUU), L1055I.Conclusion CFTR mutation could be detected in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia. But no hot spots of mutations are discovered. 225 delC and L1055I are identified as two novel mutations, which are found only in Chinese.     

结核分枝杆菌链霉素耐药基因突变特征分析

目的 了解广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌rpsL、rrs基因突变特征。方法 对137株链霉素耐药、166株链霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增rpsL、rrs基因片段,并进行测序、分析比对。结果 137株链霉素耐药菌株中, 118株存在rrs或者rpsL基因突变,突变率86.13%;其中92株存在rpsL基因突变（突变率为67.15%）,主要分布在43位氨基酸（70株）与88位氨基酸（20株）,其中43位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,49.64%）和K→T（AAG→ACG,1.46%）,88位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,13.14%）、K→T（AAG→ACG,0.73%）和K→Q（AAG→CAG,0.73%）,并有2株存在39、43位氨基酸的联合突变,即T→T（ACC→ACT）联合K→T（AAG→ACG）突变（1.46%）; 47株存在rrs基因突变（突变率为34.31%）,包括8种核苷酸突变,主要分布在1401位A→G（13.14%）、514位A→C（8.76%）、517位C→T（6.57%）,2株存在514、1401位核苷酸A→C;A→G的联合突变;15株存在rpsL与rrs基因的同时突变;166株链霉素敏感菌株中,7株存在rpsL基因突变,13株存在rrs基因突变。结论 广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌株的rpsL、rrs基因突变具有其自身特点,存在地域差异。     

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病四个家系的NOTCH3基因突变研究

目的 报告4个伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)家系的NOTCH3基因突变特点。方法 对4个经临床和病理检查证实的CADASIL家系中的先证者作NOTCH3基因编码区外显子1～12的聚合酶链反应(PCR)和DNA测序,对家系2和4中的部分亲属也作了同样的检查。结果 4个家系中的先证者均发现有NOTCH3基因的杂合性错义突变,先证者1为外显子3的268C→T突变,先证者2为外显子3的322C→T突变,先证者3为外显子3的328C→T突变,先证者4为外显子11的1819C→T突变,分别造成Notch3蛋白质R90C、C108R、R110C和R607C4个位点氨基酸的替换。其中先证者2的C108R突变尚未见文献报道。在家系2和家系4中,部分成员也携带与先证者同样的突变。结论 这4个家系的CADASIL病均由NOTCH3基因的突变引起,不同位点的基因突变导致相似的临床表现。     

胃肠道间质瘤分子靶向治疗继发性耐药基因突变的研究

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者酪氨酸激酶受体(KIT)和血小板源性生长受体(PDGFRA)基因突变的特点,以及伊马替尼的继发耐药机制。方法对98例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对伊马替尼继发耐药的65例患者进行2次检测。结果 98例患者中,KIT突变79例(80.6%),其中外显子11突变61例(62.2%),外显子9突变18例(18.4%);PDGFRA突变3例(3.1%)。不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变比较差异无统计学意义(P>0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P<0.05)。65例继发耐药病例中,4例患者发生二次突变,表现为KIT基因第17外显子密码子第2467位点的T为G所替换(T2467G),导致823密码子编码氨基酸由酪氨酸转变为天冬氨酸。结论 KIT基因突变在GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义。伊马替尼继发耐药可能与KIT基因第17外显子密码子第2467位点T为G所替换(T2467G)相关。     

全外显子组测序发现FUT6基因在1例糖尿病肾病中的终止突变

目的:检测与糖尿病肾病相关的致病基因。方法: 应用外显子捕获技术和高通量测序技术对1例临床病理确诊的DN患者的全基因组外显子进行测序,将测序数据筛选出的可能对基因功能有影响的非同义突变和剪切位点突变,与公共数据库YH、dbSNP129、8HapMapexome和dbSNP thousands genome进行对比过滤,然后对筛选出的候选基因进行免疫组化染色研究其表达量的变化。结果:通过数据的对比过滤,共发现509个突变位点,其中包括497个错义突变和12个无义突变。发生无义突变并且在肾脏高表达的基因有ANKRD35、ACSM2A、 FUT6和HAAO。其中FUT6基因的315TAC>TAA,氨基酸残基由酪氨酸突变为终止密码子,免疫组化证实FUT6在该患者的肾活检组织中表达量减少。结论: 糖尿病肾病患者中发现FUT6基因终止突变及其表达的显著降低,提示FUT6可能与DN的发病有关。     

20例中国Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区突变分析

目的检测Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区序列,进一步明确STK11基因可能存在新的突变位点。方法收集空军总医院2009年1月~2010年10月期间收治的20例Peutz-Jeghers综合征患者的血液样本,采用PCR扩增技术及DNA测序方法检测STK11基因编码区序列,与STK11基因的正常序列比对分析。结果 20例Peutz-Jeghers综合征患者中有14例患者检测到STK11基因的编码区发生突变,1例患者携带2个突变位点,13例患者携带单一突变位点。测序发现1例患者在3号外显子第460位发现一错义突变(460C→G),在第154密码子处形成另一种新的氨基酸,为一新的突变位点。2个家系中4例患者在同一位点发生突变;同一家系患者的突变位点一致。其余6例患者STK11基因编码区未见突变位点。结论 STK11基因突变是Peutz-Jeghers综合征发生的主要病因,3号外显子第460位错义突变,即460C→G,是导致Peutz-Jeghers综合征发生新的突变位点。     

人工耳蜗植入者连接蛋白26基因(GJB2)突变分析

目的研究重点探讨在接受人工耳蜗植入的患者中,连接蛋白26基因（GJB2）突变发生的几率、突变形式。方法取115例中国人接受人工耳蜗植入的患者及健康对照109例。取外周血提取基因组DNA,经聚合酶链反应-单链构象多态（PCR-SSCP）及直接测序分析。结果36．5％（42／115）的人工耳蜗植入患者发现GJB2基因突变,其中41％（41／100）的非综合征型耳聋患者发现GJB2基因突变,内耳畸形组仅1例（1／15）。研究中共发现突变形式有11种,其中235delC是最常见的突变类型,等位基因频率占全部人工耳蜗植入患者的18．3％（42／230）,占非综合征型耳聋组的21．0％（42／200）。187G〉T和230G〉A突变是首次发现的新突变。结论GJB2基因突变是中国人工耳蜗植入患者主要的致聋基因突变,235delC是其最常见的突变类型。     

Mutation analysis and prenatal diagnosis of EXT1 gene mutations in Chinese patients with multiple osteochondromas

Background  Multiple osteochondromas (MO), an inherited autosomal dominant disorder, is characterized by the presence of multiple exostoses on the long bones. MO is caused by mutations in the EXT1 or EXT2 genes which encode glycosyltransferases implicated in heparin sulfate biosynthesis.

Methods  In this study, efforts were made to identify the underlying disease-causing mutations in patients from two MO families in China.

Results  Two novel EXT1 gene mutations were identified and no mutation was found in EXT2 gene. The mutation c.497T>A in exon 1 of the EXT1 gene was cosegregated with the disease phenotype in family 1 and formed a stop codon at amino acid site 166. The fetus of the proband was diagnosed negative. In family 2, the mutation c.1430-1431delCC in exon 6 of the EXT1 gene would cause frameshift and introduce a premature stop codon after the reading frame being open for 42 amino acids. The fetus of this family inherited this mutation from the father.

Conclusions  Mutation analysis of two MO families in this study demonstrates its further application in MO genetic counseling and prenatal diagnosis.

     

新生儿非综合征型听力损失GJB2基因的突变分析

目的探讨新生儿听力筛查确诊的听力损失与GJB2基因突变的关系。方法应用耳声发射及听觉诱发电位等方法确诊先天性双耳重度极重度非综合征型听力损失患儿20例,采用聚合酶链反应和基因测序等技术检测GJB2基因的编码区序列。50名听力正常人群作对照组。结果3例患儿的基因型为235delC/235delC,占15%;1例为235delC/299300delAT;1例为235delC/605ins46,605ins46是首次在中国人群中发现的新突变;1例为235delC等位基因携带者。即在所分析的患儿中,5例与GJB2基因突变有关,占25%。235delC等位基因频率对照组为1%,患儿组为22.5%(P<0.01)。此外,在耳聋患者和正常人群中尚存在V27I,V37I、E114G、T123N等多态性改变。结论GJB2基因突变是引起听力损失发生的重要因素;235delC是GJB2基因的主要致病突变位点,同时存在特殊类型的新突变以及较多形式的多态性。