聚合酶链反应在性病诊断中的应用

聚合酶链反应在性病诊断中的应用叶顺章聚合酶链反应(PCR)是一种近几年才建立起来的体外DNA扩增试验.它的基本原理是一种酶促合成反应,即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下,在DNA聚合酶的作用下,使DNA链扩增延伸.     

聚合酶链反应在梅毒诊断中的应用

聚合酶链反应具有高度的敏感性和特异性，已被用于检测各期梅毒病人的血清、脑脊液、羊水、全血、分泌物和组织中的螺旋体。本文扼要地综述了聚合酶链反应技术在梅毒诊断方面的作用。     

儿童浅部真菌病研究进展

浅部真菌病 ,尤其是头癣 ,甲真菌病是儿童常见的皮肤感染性疾病 ,其发病目前在世界范围内仍然较高 ,且在很多方面具有不同于成人的特点。综述了近年来关于儿童浅部真菌感染在病原菌、发病率、临床表现、真菌学检查及诊疗方面的研究进展     

聚合酶链反应用于深部真菌病早期诊断及分子流行病学研究进展

近些年来 ,免疫缺损患者的大量增加 ,使条件性真菌感染的发病率迅速上升。由于系统性真菌病治疗困难 ,预后不良 ,及早确立诊断和判明感染来源显得十分重要。现就聚合酶链反应用于深部真菌感染的早期诊断以及非白念珠菌感染的分子流行病学研究的一些近期进展及应用前景作一综述。     

多重PCR快速诊断甲真菌病

目的探讨多重PCR技术从临床标本中检测甲真菌病病原真菌的方法。方法采用蛋白酶K消化法和煮沸法处理临床标本，从中提取致病菌DNA，然后用真菌通用引物NS，皮肤癣菌特异性引物CHS1和酵母特异性引物ACT1同时进行PCR扩增检测，并与直接镜检和培养法作对比。结果共收集104例临床标本，PCR检测、直接镜检和培养的敏感度分别为93．3％、100％和64．4％，特异度分别为100％、86．4％和100％，阳性预测值分别为100％、84．9％和100％，阴性预测值分别为95．2％、100％和78．7％。PCR方法在24小时内即可完成从标本处理至结果判读的全过程。结论多重PCR检测具有较好的特异性和准确性，可初步将甲真菌病的三大类病原菌区分开，且比培养缩短了近2周的时间，为临床快速诊断和及时、合理地治疗甲真菌病提供参考。     

聚合酶链反应用于深部真菌病早期诊断及分子流行病学研究进展

近些年来,免疫缺损患者的大量增加,使条件性真菌感染的发病率迅速上升。由于系统性真菌病治疗困难,预后不良,及早确立诊断和判明感染来源显得十分重要现就聚合酶链反应用于深部真菌感染的早期诊断以及非白念珠菌感染的分子流行病学研究的一些近期进展及应用前景作一综述。     

浅部真菌病致病菌种分析

我们对2年来皮肤科门诊镜检阳性的皮肤浅部真菌病患者进行了菌种分析,培养出365株病原性真菌,现将情况报道如下。一、病例和方法所有病例经门诊拟诊、并经直接镜检真菌阳性者共1281例。其中体癣379例,股癣138例,手癣265例,足癣403例,头癣76例,甲癣20例。     

治疗浅部真菌病的新抗真菌药物

近十年来,一些可系统性应用又可外用治疗皮肤和甲真菌病的新抗真菌药物已问世。特康唑是有效的治疗阴道念珠菌病药物。阿莫罗芬具广谱抗真菌作用,萘替芬和特比萘芬属丙烯胺类,局部应用治疗浅部皮肤真菌病有效。伊曲康唑由于对真菌的细胞色素P450 14-α脱甲基酶具更大特异性,比酮康唑抗菌谱更广,且更安全。氟康唑的作用机理与其他唑类相似,已着手研究以治疗深部真菌病和粘膜念珠菌病。     

应用聚合酶链反应诊断疣皮肤结核1例报告

报告１例４５岁女性疣状皮肤结核患者，病期１３年，于右臂部至右大腿后上方、右耳廓及右胸部呈现肉芽肿性皮损，组织病理疑为结核，抗酸染色（一）。遂将石蜡切块作聚合酶链反应检查，扩增出结核杆菌特异ＤＮＡ片段。经抗痨治疗皮损治愈。     

应用聚合酶链反应检测某些机会致病真菌的初步探讨

目的 探讨快速检测某些机会致病性直菌的方法。方法 以源于医学机会致病性真菌１８ｓｒＲＮＡ保守区的一对寡核苷酸序列为引物,利用聚合酶链反应对医学上重要机会致病性真菌ＤＮＡ进行扩增。结果 ３属７种２９株重要机会致病性直菌,经扩增均出现一条１９７ｂｐ的ＤＮＡ片段,而对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、人白细胞则不扩增。以溴化乙啶染色,该ＰＣＲ方法对白念珠菌ＤＮＡ的最低检出限为１ｐｇ。３０份临床标     

聚合酶链反应检测解脲支原体

我们根据已知的解脲支原体尿素酶基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物，该组引物对解脲支原体１４个血清型均能扩增出２８６ｂｐ片段，但对实验所用的其它支原体或细菌不能扩增出任何片段，该２８３ｂｐ片段能被限制性内切酶ＨｉｎｃⅡ降解为１５１，１３２ｂｐ两条片段，使用３５个ＰＣＲ循环，可检测出１０＾－１４ｇ的模板ＮＤＡ，约相当于２０个解脲支原体。通过梯度稀释试验证明４０个ＰＣＲ循环时，ＰＣＲ的敏感性与培养法的     

聚合酶链反应和直接免疫荧光法检测沙眼衣原体感染的方法比较

沙眼衣原体所致泌尿生殖道感染是最常见的性传播疾病之一。对１１０例患者进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）与直接免疫荧光法（ＤＦＡ）检测，比较二者在临床检测中的优缺点。ＰＣＲ引物为主要外膜蛋白基因片段，阳性６５例（５９１％），阴性４５例（４０９％）。ＤＦＡ阳性４３例（３９１％），阴性６７例（６０９％），ＰＣＲ和ＤＦＡ阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１），病程长短对ＰＣＲ阳性率无明显影响（Ｐ＞００５），病程长短对ＤＦＡ阳性率有显著影响（Ｐ＜００１），病程长者ＤＦＡ阳性率低。ＰＣＲ特别适用于临床中病程长且ＤＦＡ阴性患者。     

聚合酶链反应检测生殖支原体的研究

具有致病性的生殖支原体（Ｍｇ）生长缓慢，不易培养，而血清学诊断与肺炎支原体又有交叉反应，这给Ｍｇ的临床诊断带来困难。为了进一步解决Ｍｇ的临床检测问题，本研究采用Ｍｇ粘附因子基因序列合成一对引物ＭｇＰａ１和ＭｇＰａ３，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测Ｍｇ。结果表明，对Ｍｇ能产生特异性扩增，片段大小为２８１ｂｐ，而对肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体及淋球菌等则不能扩增出任何片段。作者认为，ＰＣＲ为一种高度特异和敏感性的方法，它为Ｍｇ的临床检测提供了重要的手段。我们还对引物浓度、退火温度及模板量对ＰＣＲ扩增结果的影响进行了初步探讨。     

鸟分支杆菌聚合酶链反应检测的研究

目的 建立敏感性高、特异性强的快速检测鸟分支杆菌的方法.方法 用特异性引物对连续稀释的鸟分支杆菌菌悬液DNA进行PCR扩增,验证其敏感性;并用该引物对除鸟分支杆菌外的其他17株分支杆菌DNA进行扩增,验证其特异性;将正常皮肤组织与鸟分支杆菌的菌悬液混合以模拟临床皮肤感染标本,初步探讨适宜的临床标本前处理的方法,以提高PCR方法在检测临床皮肤组织感染中的敏感性.结果 PCR方法可扩增427bp的鸟分支杆菌DNA片段,敏感性达1×10²个菌细胞/mL,对其他分支杆菌进行扩增,结果均为阴性.对模拟临床皮肤感染标本进行PCR检测,敏感性降低为1×10⁴个菌细胞/mL;将组织匀浆连续倍比稀释后,再加入细菌悬液,结果当组织匀浆稀释度≥1:4时,PCR的敏感性提高到1×10²个菌细胞/mL.结论 PCR方法能敏感、特异地快速检测鸟分支杆菌.     

多重PCR诊断甲真菌病的实验研究

目的初步建立多重PCR诊断甲真菌病的方法。方法选择3对引物(真菌通用引物、皮肤癣菌特异性引物和酵母特异性引物)建立三重PCR体系,采用红色毛癣菌、白念珠菌和短帚霉摸索反应条件和验证体系的适用性;并用红色毛癣菌来测定反应的灵敏度。结果筛选得到的真菌通用引物NS、皮肤癣菌特异性引物CHS1和酵母特异性引物ACT1有较好的通用性和特异性;在适宜的反应条件下,无论对单模板,还是多模板,该反应体系均能扩增出目的片段,未见明显非特异片段的干扰;该反应体系的检测灵敏度为102cfu/ml。结论多重PCR技术是一种快速、敏感和特异诊断甲真菌病的方法。     

细胞培养与尿液聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体感染

目的 为了建立以尿液为标本的检测沙眼衣原体的聚合酶链反应（ＰＣＲ）－微孔板杂交法。方法 以１００例性病门诊就诊者的尿液和尿道（男性）或宫颈（女性）标本,分别作沙眼衣原体ＰＣＲ－微孔板杂交法和细胞培养。两者结果不一致时用第二种不同引物作ＰＣＲ。结果 与“扩大金标准”比较,尿液ＰＣＲ－微孔板杂交法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为８０．０％、９７．３％、９０．９％和９３．６％;细胞培养的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为８４．０％、１００．０％、１００．０％和９４．９％。结论 尿液ＰＣＲ－微孔板杂交法检测沙眼衣原体感染的技术性能与细胞培养相当,但有取材方便、快速的特点、将其用于性病门诊就诊者的诊断是可行的。     

应用AP-PCR鉴定浅部真菌病病原菌菌种

目的研究应用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)对浅部真菌病病原菌进行分子生物学鉴定的意义。方法应用OPAA11(5′-ACCCGACCTG-3′),OPAA17(5′-GAGCCCGACT-3′),OPD18(5′-GAGAGC-CAAC-3′)和OPU15(5′-ACGGGCCAGT-3′)四种随机引物,随机扩增从浅部真菌病患者的皮屑或甲屑标本中提取的真菌DNA。结果从各标本提取所得的红色毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌及石膏样小孢子菌DNA经OPAA11,OPAA17,OPD18或OPU15扩增后,产生的电泳带型在不同菌种间存在明显差异。结论 AP-PCR对于浅部真菌病病原菌的鉴定具有诊断价值。     

竞争性聚合酶链反应定量检测沙眼衣原体

为了便于研究沙眼衣原体(CT)感染的致病机理,我们建立了一种竞争性聚合酶链反应(PCR)定量检测CT的方法。合成、克隆并定量了一与CT主要外膜蛋白基因(ompl)靶序列具有相同引物位点的内参标(IS),通过共同扩增已知数量克隆的CTompl野生型模板和IS,构建竞争性PCR标准曲线。恒定拷贝数(1000个分子)的IS与每一待测模板共同扩增,用靶序列与IS的PCR产物的密度比值定量标本中的CT.对11份培养阳性的泌尿生殖道标本进行了CT的定量检测。结果发现,一个培养包涵体形成单位大约相当于75个DNA分子。研究表明:竞争性PCR提供了一种可靠且敏感、可定量临床标本中CT的方法。     

细胞培养、连接酶链反应和六种聚合酶链反应试剂盒检测沙眼衣原体的比较研究

目的 与细胞培养和连接酶链反应（LCR）比较考察6种国产聚合酶链反应（PCR）试剂盒在检测性传播疾病门诊患者标本沙眼衣原体的诊断价值。方法 在北京、上海、南京、天津5家临床医院性病门诊收集到673份尿道／宫颈拭子标本,分别进行沙眼衣原体培养和PCR检测,对结果不相符合的标本采用LCR复检,将各种PCR检测结果分别与培养、LCR以及综合结果进行比较分析。结果 合格病例616例,培养法检测阳性率6．3％,PCR检测阳性率分别为23．5％－28．7％。与培养结果比较,各种PCR检测的敏感性均在90％以上,其中PCR1、PCR2和PCR5均达到100％。LCR复核标本200份,与之相比,PCR检测的敏感性为83．9％－98．6％,特异性66．7％－94．7％,YI指数0．523－0．881。其中PCR2结果符合性最好,其它依次为PCR4、PCR1、PCR5、PCR3及PCR6。综合分析证明国产PCR检测沙眼衣原体的敏感性增在85％以上,特异性均在95％以上。YI指数由高到低分别为PCR2、PCR1、PCR3、PCR5、PCR4、PCR6。结论 国产PCR检测尿道／宫颈拭子沙眼衣原体具有较高的敏感性与特异性,可以用于临床检验,实验室质控与监督是本方法得以正确应用的关键。