同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

阴沟肠杆菌产超广谱β—内酰胺酶情况及耐药性监测

超广谱β-内酰胺酶是一类对包括第三代头孢菌素及氨曲南在内的β-内酰胺类抗生素具有水解作用的酶，由质粒介导的大多数肠杆菌科细菌均可产生ESBLs，常见于大肠埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌，亦可见于阴沟肠杆菌，弗劳地枸橼酸杆菌，大多源于TEM-1，TEM-2和SHV-1的突变。为了解我院阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药状     

阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的了解阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶的产生情况，研究β-内酰胺酶的基因型别，并分析产酶特性和耐药表型的相关性。方法用酶提取三维试验检测ESBLs和AmpC酶，聚合酶链反应（PCR）扩增β-内酰胺酶的基因；VITEK全自动药敏分析系统和KB法检测细菌耐药性。结果101株阴沟肠杆菌中，检出ESBLs阳性株39株，高产AmpC酶阳性株53株，其中16株ESBLs和AmpC酶均阳性，非产酶菌25株；12株AmpC酶阳性菌中，7株扩增出blaDHA。基因，8株扩增出6laMIR基因，其中5株同时携带blaDBA．和blaMIR基因，1株同时携带blaMIR和blaFOX基因，4株三维试验阴性菌株blaMIR基因阳性；16株ESBLs阳性菌中，8株扩增出blaTEM基因，2株ESBLs三维试验阴性菌株blaTEM基因阳性，未检出blaSHV基因。阴沟肠杆菌对多种抗生素高度耐药，产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株。结论阴沟肠杆菌中ESBLs和AmpC酶检出率均很高，AmpC酶以blaDHA、blaMIR基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因。     

产"超-超广谱"β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药表型及基因分析

目的 首次分析本地区产超-超广谱β-内酰胺酶(super-spectrum β-lactamase,SSBLs)菌株的耐药性及分子流行病学现状.方法 收集自2008年1月～2009年6月本院从临床分离的对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌105株,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,通过药敏试验鉴定其耐药表型,运用PCR扩增检测其ESBLs基因型与AmpC酶基因型.结果 筛选出的2株产SSBLs菌株(1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌)均表现为多重耐药,仅对亚胺培南敏感.阴沟肠杆菌质粒编码的ESBLs基因型为TEM、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT;大肠埃希菌质粒编码的ESBLs基因型为SHV、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT.结论 本院存在产SSBLs革兰阴性杆菌引起的感染,但此类菌株尚未在本院传播流行,ACT型是SSBLs菌株质粒AmpC酶主要基因型.     

耐头孢他啶阴沟肠杆菌TEM-28V β-内酰胺酶的特性研究

目的 研究耐头孢他啶阴沟肠杆菌TEM-28Vβ-内酰胺酶的特性。方法用KB纸片扩散法和等电聚焦(IEF)对细菌β-内酰胺酶类型进行初步判断；碱裂解法提取质粒并进行PCR扩增测序；饱和硫酸铵反抽提，并经Sephadex G-75凝胶过滤和DE-52阴离子交换层析法纯化β-内酰胺酶；SDS-PAGE法测定分子量和紫外分光光度法测定酶动力学参数。结果6株临床分离菌均对头孢他啶耐药。IEF显示，每株菌产生一种或两种β-内酰胺酶，等电点(pI)分别为5．5、5．6和8．7。根据基因分析推测，pI为5．6的酶的氨基酸序列与TEM-2同源性为100％。pI为5．5的酶与TEM-28比较存在4个氨基酸突变，其分子量为28．77ku；酶动力学分析证实，TEM-28V能水解头孢他啶、头孢噻肟和氨曲南，不能水解亚胺培南，对舒巴坦和三唑巴坦的IC50分别为107和220nmol／L。结论TEM-28V可能为TEM-28变异型超广谱β-内酰胺酶。     

3株含qnr基因肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的了解临床分离含qnr基因,(质粒介导的喹酮类耐药基因)肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性,NCCLS表型确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定、采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组、OXA-1组、OXA-2组、OXA-10组、PER-1、VEB-1β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-13组、OXA-1组全编码基因引物、I类整合酶基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行PFGE检测。结果3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,其中2株细菌同时产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶、1株同时产生TEM-1和OXA-30型广谱β-内酰胺酶,I类整合酶基因均为阳性;这些菌株对青霉素类、一代、二代、三代头孢菌素(头孢噻肟)以及多种喹诺酮类均显示耐药。3株菌株中有2株的PFGE谱型相同。结论临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌可同时产生CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶,引起多重耐药,并存在克隆传播,临床应加强检测。     

临床分离产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的研究我院临床分离阴沟肠杆菌的产AmpC酶耐药情况及ampC基因型。方法收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株；检测产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的菌株；测定MIC值；PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果15株菌中8株菌（53．3％）产AmpC酶，3株菌（20．0％）产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外。对其它抗菌药不同程度耐药。ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产AmpC酶是阴沟肠杆菌对阻内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药，亚胺堵南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。     

铜绿假单胞菌产TEM-29型ESBL基因的克隆及原核表达

目的研究临床分离铜绿假单胞菌Pa3-104产生的超广谱β-内酰胺酶的基因型，并对其进行原核表达，了解它的相关特性。方法对该临床菌株进行接合试验；采用PCR扩增TEM型β-内酰胺酶编码基因的片段，克隆入pUCm-T载体，在E.coliJM109中表达，双脱氧链终止法测定核苷酸序列，确定基因型；并将TEM型β-内酰胺酶全编码基因克隆入原核表达载体pBK-CMV中进行原核表达；用三维试验检测重组菌产β-内酰胺酶的表型，等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点（pI）。结果该临床菌株质粒接合试验为阳性；PCR扩增测序结果显示为TEM型，其基因片段含861个核苷酸，该TEM型β-内酰胺酶的编码基因与GenBank中大肠埃希菌产生的TEM-29的编码基因（Y17584）一致，等电聚焦电泳结果显示该酶的pI为5．4，三维试验证实为ESBL。结论在国内首次从临床分离铜绿假单胞菌中发现TEM-29型ESBL。     

天津地区呼吸道感染肠杆菌科细菌质粒介导ESBLs基因型分析

目的:研究天津地区呼吸道分离肠杆菌科细菌中产质粒介导超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株基因分布情况.方法:收集天津市胸科医院2004年临床分离产ESBLs肠杆菌科细菌,选取携带质粒菌株,提取其质粒DNA作为模板.采用聚合酶链反应(PCR)和序列分析确定ESBLs的基因型.结果:40株接合试验阳性产ESBLs菌株中TEM型、SHV型、CTX-M型阳性率分别为50.0%、20.0%和67.5%,PCR阳性菌株中同时产2种以上酶者高达61.3%.随机抽取5株ESBLs的PCR产物进行序列分析,其中2株TEM型的序列均属TEM-1型,1株SHV型的序列属于SHV-12型,2株CTX-M型的序列分属CTX-M3、CTX-M14型.结论:天津地区呼吸道肠杆菌科细菌ESBLs基因分型以CTX-M型为主,同时产2种以上酶的菌株居多数.     

医院获得性下呼吸道感染阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的了解医院获得性下呼吸道感染阴沟肠杆菌临床分离株耐药性与超广谱β-内酰胺酶的发生率。方法分析2001年3月～2003年5月126例医院获得性阴沟肠杆菌下呼吸道感染患者的分离菌，采用纸片扩散表型试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）。结果阴沟肠杆菌产ESBLs率为29．4％，呼吸内科、胸外科、神经科等重症监护室（ICU）分离的阴沟肠杆菌产ESBLs率为44％，明显高于普通病房分离的阴沟肠杆菌的产ESBLs率（7．8%，P〈0．005）。产ESBLs阴沟肠杆菌对氨苄青霉素、环丙沙星及头孢他啶等头孢菌素的耐药率分别为100％、92．1％和100％。除哌拉西林和亚胺培南外，产ESBLs阴沟肠杆菌对常用12种抗菌药物的耐药性明显高于不产ESBLs菌。亚胺培南对产ESBLs与不产ESBLs的阴沟肠杆菌的抗菌活性均较高。结论阴沟肠杆菌ESBLs的检出率为29．4％，各科ICU阴沟肠杆菌ESBLs检出率更高。临床可选亚胺培南进行治疗。     

TEM-105编码基因的功能研究

目的　获得浙江地区临床分离的 4株肺炎克雷伯菌所产的TEM型β 内酰胺酶编码基因的序列,鉴定其基因型,并了解其相关特性。方法　PCR扩增TEM型β 内酰胺酶编码基因片段,克隆入pGEM Teasy载体,表达于感受态细胞大肠埃希菌DH5α中,双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定基因型;其基因与原核表达载体 (pET 28c)连接,并在感受态细胞大肠埃希菌DH5α中进行原核表达,提取质粒,用PCR进行表达鉴定,用等电聚焦电泳测定原核表达菌株中酶的等电点(pIs),用ESBLs表型确认试验鉴定表达菌株的表型,另外对这些临床菌株进行接合试验。结果　PCR扩增结果显示这 4株细菌产生的TEM型β 内酰胺酶编码基因片段含1 009个核苷酸,其表达酶的性质均为非ESBLs,pIs均为5 4,临床菌株的质粒接合试验均为阳性。这 4株临床菌株所产生的TEM型β 内酰胺酶的编码基因已被GenBank命名为TEM 105(GenBank注册号:AF516720)。结论　浙江地区这 4株细菌所产TEM型β 内酰胺酶均为TEM 105,在世界上我们首次从临床分离株中发现TEM 105。     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。     

广州地区泌尿系统感染产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特征和基因分型

目的：了解本地区泌尿系统感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌耐药特征及其基因型分布。方法：收集广州地区13家医院2001年7月～2003年8月间临床分离的尿培养阳性肺炎克雷伯菌130株,采用NCCLs规定的ESBLs初筛和确证试验方法检测ESBLs,用K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,并应用聚合酶链反应（PCR）方法对所分离的产ESBLs菌株进行SHV、CTX-M基因型检测。结果：产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为41．5％（54株）,其中66．7％（36株）携带CTX-M基因,53．7％（29株）携带SHV型基因,并有20．4％（11株）同时携带CTX-M基因和SHV型基因。产酶株的耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类耐药率较高（高达75．9～99．7％1,加酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦后耐药率有明显下降。结论：广州地区泌尿系统感染的产ESBLs肺炎克雷伯菌具有多重耐药的特点。其中CTX-M型是流行的基因型。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

产生ESBLs和AmpC酶的肠杆菌科细菌检测及耐药性分析

目的了解我院产ESBLs和AmpC酶细菌的耐药性。方法对产ESBLs菌和产生AmpC酶菌进行表型的筛选和确证,测定21种药物的耐药性。结果 268株菌中检出ESBLs菌136株,检出率50.75%,AmpC酶菌116株,检出率43.28%。单产AmpC酶菌,单产ESBLs菌及产AmpC和ESBLs的菌对青霉素、第二、三代头孢菌素类药物的耐药率明显高于非产酶菌的耐药率,两者相比有显著性差异(P<0.05),多重耐药及泛耐药常见。结论 ESBLs与Amp酶已成为我院肠杆菌科细菌耐药的主要原因。碳青霉烯类、第四代头孢菌素、哌拉西林/三唑巴坦成为我院治疗院内感染的首选药。     

超广谱β-内酰胺酶CTX-M-3和SHV-12在临床分离阴沟肠杆菌中的流行

目的：了解临床分离的阴沟肠杆菌中产ESBLs菌株的发生率，流行特征以及ESBLs的表型和基因型。方法：1999年2月至2001年3月期间解放军总医院临床临床分离到106株阴沟肠杆菌，研究对象为其中对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性减低的42株阴沟肠杆菌，通过等电聚焦电泳和接合试验分析ESBLs的表型特征；PCR扩增TEM型、SHV型和CTX－M型β－内酰胺酶的编码基因并对其进行DNA测序，以确定ESBLs的基因型，有杉ERIC－PCR分型方法分析我院产ESBLs阴沟肠杆菌的流行特征。结果：在42株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌中，有25株产生ESBLs，占我院同期临床分离的全部阴沟肠杆菌的23．6％（25／106）。其中18株产CTX－M－3，7株产SHV－12，分别占同期我院临床分离的全部阴沟肠杆菌的17．0％（18／106）和6．6％（7／106），这是国内首次报道CTX－M－3和SHV－12在阴沟肠杆菌中广泛流行，产CTX－M－3或SVH－12的阴沟肠杆菌均呈多克隆构成模式，仅个别病区内发生过产CTX－M－3阴沟肠杆菌引起的小型克隆传播。结论：在临床分离的阴沟肠杆菌中，由ESBLs介导的耐药已经成为严重总是。ESBLs的基因型主要为CTX－M－3，而SHV－12也不少见。CTX－M－3和SHV－12在我院的流行主要由其编码基因在不同克隆株之间水平传播引起，克隆传播居次要地位。     

Carriage of genes for various extended-spectrum β-lactamases: a novel resistance strategy of Klebsiella pneumoniae in Poland

Among 110 randomly sampled strains from a collection of 247 extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing clinical isolates of Klebsiella pneumoniae collected from hospitalised children in three paediatric hospitals in Poland, 64 strains (58.2%) with multiple ESBLs were found, including five non-clonal strains (4.5%) harbouring bla genes for ESBLs of three families (CTX-M, SHV and TEM). This is the first report of the emergence of triple ESBL-producing K. pneumoniae in Poland. In addition, K. pneumoniae strains harbouring bla genes for TEM-130 and TEM-132 ESBLs were detected in Poland for the first time. Epidemiological analysis of the multiple ESBL-producing K. pneumoniae isolates by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) revealed a relatively high genetic diversity between isolates producing the same combination of enzymes. Clonally related strains were uncommon.     

某院产超广谱β-内酰胺酶临床分离革兰阴性杆菌的耐药性及基因型分析

目的:调查某院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率、ESBLs基因型及耐药性。方法:对临床分离的57株耐哌拉西林革兰阴性(G-)杆菌进行ESBLs表型鉴定;琼脂二倍稀释法测定抗菌药最低抑菌浓度(MIC);测定ESBLs的活性;聚合酶链反应(PCR)扩增检测blaSHV、blaTEM、blaCTX-MESBLs基因。结果:24株G-杆菌(42.1%)产ESBLs。产ESBLs菌对亚胺培南耐药率最低(4.2%)。携带blaSHV、blaTEM、blaCTX-M基因的菌株分别为3株(12.5%)、6株(25%)、9株(37.5%)。结论:产ESBLs是G-杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一;CTX-M型ESBLs在我院有较高的流行;亚胺培南是治疗产ESBLsG-杆菌所致感染的有效药物。     

Antimicrobial susceptibility of clinical isolates of Enterobacteriaceae producing complex beta-lactamase patterns including extended-spectrum enzymes

The antimicrobial susceptibility of 103 clinical isolates of Enterobacteriaceae to 11 antibiotics, was investigated, using a conventional inoculum size (5 x 10(5) CFU) and a higher inoculum size (5 x 10(8) CFU). All the isolates produced complex beta-lactamase patterns, including an extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) of the TEM- or SHV-type plus other enzymes (a TEM-type or an SHV-type non-ESBL and/or a class C enzyme). The following repertoire of ESBLs was produced by the isolates: TEM-15, TEM-19, TEM-26, TEM-52, TEM-72, TEM-87, TEM-92, SHV-2a, SHV-5 and SHV-12, as assessed by sequencing. Production of the other enzymes was showed by analytical isoelectric focusing. Overall, meropenem was the most active agent and less influenced by inoculum size, while other beta-lactams showed a lower activity and a significant inoculum size effect. In conclusion, from its in vitro performance, meropenem could be considered as the last resource drug against strains producing complex beta-lactamase patterns including an ESBL.