玉郎伞多糖抑制HepG 2.2.15细胞HBV的复制和表达的研究

目的 研究玉郎伞多糖(YuLangSan Polysaccharide)的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 采用HepG 2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度玉郎伞多糖,以拉米夫定(Lamivudine)作阳性药对照,作用72 h,144 h后,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Rea...     

HepG2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定抗乙型肝炎病毒复制作用的比较

目的：对HepG2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用进行比较。方法：构建HBV siRNA的表达载体并转染入HepG2.2.15细胞。分别于48、72、96h收获细胞,与拉米夫定治疗组比较抗HBV作用。用ELISA方法检测HBsAg浓度;HBV DNA水平用实时定量PCR测定;用逆转录PCR检测HBV mRNA水平。结果：拉米夫定能明显降低HBV DNA水平,对HBsAg和mRNA抑制率较低;siRNA能全面降低HBsAg、HBV DNA和mRNA水平（P〈0.05）。结论：HepG2.2.15细胞中,siRNA与拉米夫定的抗病毒作用完全不同,siRNA抗HBV作用明显优于拉米夫定。     

以HepG2.2.15细胞为对象的RNAi实验研究

目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)X区设计的siRNA表达载体pGenesil-HBVX对HepG2.2.15细胞相应蛋白表达的影响。方法筛选出最佳转染效率的剂量配比,将阳离子脂质体METAFECTENE与pGen-esil-HBVX的复合物转染HepG2.2.15细胞,于转染后24、48、72h采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)。结果具有最佳转染效率而且不显著影响细胞活性的剂量配比为8μl∶2.5μg。pGenesil-HBVX转染HepG2.2.15细胞后24h,细胞上清液中HBsAg、HBeAg含量尚无显著变化(P>0.05);48h后HBsAg、HBeAg表达均有明显下降(P<0.01),并且持续至72h。结论pGenesil-HBVX可以在获得一定转染效率的基础上有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV的表达。     

复方六月雪对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的：观察复方六月雪（CLYX）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测CLYX对HepG2．2．15细胞的半数毒性浓度（TC50）和最大无毒浓度（TG0）；在TG0基础上观察不同浓度药物作用于HepG2．2．15N胞，分别在第72h和144h收集细胞培养上清液，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果：TG50为3．070g·L^-1，TG，为0．945g·L^-1，复方六月雪对HepG2．2．15N胞毒性较低。无毒浓度的复方六月雪在HepG2．2．15N胞培养中可有效地抑制细胞HBsAg（乙型肝炎表面抗原）和HBeAg（乙型肝炎E抗原）的分泌；且治疗指数（TI）均大于2，为高效低毒的抗HBV药物。结论：CLYX在体外有显著的抗HBV的作用，且毒性较低。     

荔枝核提取物对HepG 2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响

目的:研究荔枝核对乙型肝炎病毒的抑制作用及其有效部位.方法:应用HepG 2.2.15细胞系培养系统检测荔枝核提取物A、B、C、D、E、F对HBsAg与HbeAg表达的影响.结果:荔枝核提取物A、B、C、D、E、F(200,100mg·L-1)对HBsAg 和HbeAg表达均有抑制作用,其中E成分作用最强,在200 mg·L-1的浓度下,于实验第3天对HBsAg的抑制率为50%,对HBeAg的抑制率为20%,于实验第9天对HBsAg的抑制率为90.9%,对HBeAg的抑制率为84.3%(与对照组比较P＜0.01).结论:荔枝核提取物体外有较强的抗乙肝病毒作用.     

短发夹RNA介导的RNA干扰技术在HepG2.2.15细胞中的应用研究

目的探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对HepG2.2.15肝癌细胞中乙型肝炎病毒(HBV)复制及甲胎蛋白(AFP)表达的特异性抑制作用。方法采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)含量;采用微粒子化学发光免疫分析法(MLFA)检测甲胎蛋白含量。采用免疫细胞化学技术检测细胞中HBsAg及甲胎蛋白的表达。结果 pGenesil-shHBV X对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的特异性抑制作用随时间而递增(P<0.05),pGenesil-shAFP对HepG2.2.15细胞甲胎蛋白的特异性抑制作用同样随时间而递增(P<0.05),且二者之间无交叉抑制作用。结论 shRNA真核表达质粒pGene-sil-shHBV X介导的RNA干扰作用可特异性抑制HepG2.2.15细胞HBV的复制表达,pGenesil-shAFP可特异性抑制HepG2.2.15细胞甲胎蛋白的表达,为RNA干扰技术抗病毒及抑制肿瘤的进一步研究奠定基础。     

六月青皂苷抗鸭乙型肝炎病毒及保护肝细胞的研究

目的:观察六月青皂苷(the saponins of Liuyueqing,TLYQ)抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis Bvirus,DHBV)与保护肝细胞的作用。方法:将DHBV-DNA阳性麻鸭随机分为TLYQ高、中、低剂量治疗组、拉米夫定组和模型组,分别给予相应药物进行干预。用药前、后7 d,14 d及停药后7 d,取静脉血,检测DH-BV-DNA拷贝量和ALT/AST变化情况。结果:TLYQ大剂量组给药后d 7,d 14即能明显抑制DHBV-DNA,停药后仍有一定的抑制作用。中、低剂量组与模型组比较,有一定的病毒抑制作用。在用药后d 14,停药后d 7,ALT/AST较模型组明显下降,有显著性差异。结论:TLYQ具有有效抑制DHBV-DNA和保护肝细胞的作用。     

水芹总酚酸对2.2.15细胞HBV DNA、cccDNA的抑制作用

目的 观察水芹总酚酸对2.2.15细胞HBV-DNA、cccDNA的抑制作用.方法 药物稀释成500、250、125 mg·L-1加入2.2.15细胞进行培养,每4 d换含同浓度药物培养液;分别收集d 4、8以及停药后4 d的细胞,试剂盒提取HBV-DNA、cccDNA,荧光定量PCR(FQ-PCR)测定其含量,观察水芹总酚酸对其抑制作用.结果 水芹总酚酸对HBV-DNA和cccDNA都具有很好的抑制作用,在细胞培养的d 8其高、中剂量(500、250 mg·L-1)的抑制作用达到最大: HBV-DNA为62.3%和47.7%,cccDNA为62.7%和61.3%,且在停药后3 d仍保持较高的抑制率(P<0.05).结论 水芹总酚酸可以有效的抑制2.2.15细胞HBV-DNA、cccDNA的表达,抗病毒作用明显,且无明显的停药反跳现象.     

甘草甜素联合单磷酸阿糖腺苷对HepG 2.2.15细胞及其HBsAg表达的影响

目的探讨甘草甜素联合单磷酸阿糖腺苷对HepG2.2.15细胞株存活率及其HB-sAg表达的影响,评价甘草甜素(GL)与单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)合用体外抗HBV效果。方法利用乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞检测细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg),作为这两种药物联合在体外抗HBV效果的观察指标(以抑制率来表示)。用MTT法检测HepG2.2.15细胞的存活率。结果(1)各药对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率呈药物浓度和时间依赖性;联合组与两个单药组分别比较,抑制HBsAg差异有显著意义(P<0.05或P<0.01)。(2)随着浓度的增加,各药对细胞的存活率均显示抑制作用,尤其联合组高于其它两个单药组。结论GL联合Ara-AMP在体外HepG2.2.15细胞中具有协同抗HBV的作用。     

山芝麻水提液对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的观察山芝麻水提液（water extracts from Helicteres angustifolia,WHA）的体外抗乙型肝炎病毒的作用。方法采用HepG2．2．15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度山芝麻,以拉米夫定作阳性对照,作用72h后检测上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,观察药物对HepG2．2．15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,同时以MTT法检测药物在体外对HepG2．2．15细胞的生长抑制作用,从而评价药物的抗HBV作用。结果山芝麻水提液对HepG2．2．15细胞的半数细胞毒浓度（TC50）为482．1mg·L-1;对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg的半数抑制浓度（IC50）为7．3mg。L-1,其治疗指数（TI）为66;对HBeAg,其Ic,n为14．6mg·L-1,TI为33。结论山芝麻水提液在体外有显著的抗HBV的作用,且毒性较低。Tel：（0771）5358342E—mail：gxLx60@163．COll]     

SiRNA沉默 HBx对 HepG2.2.15细胞人端粒酶逆转录酶基因表达的影响

目的探讨应用RNA干扰技术沉默HBx对HepG2．2．15细胞中hTERT基因表达的影响。方法（1）将pSIHBV／X质粒转染HepG2．2．15细胞,RT-PCR法评估沉默效率。（2）MTT法检测转染24h、48h、72h后细胞增殖情况。（3）Real-timePCR和Westernblot检测hTERT表达情况。结果测序结果显示pSIHBV／X质粒构建正确;RT-PCR检测HBVX基因的沉默效率为53．6％;MTT检测结果显示转染24h、48h、72h后H印G2．2．15细胞的增殖受抑制,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;Real-timePCR和Western blot检测结果均显示,转染pSIHBV／X质粒后HepG2．2．15细胞中hTERT基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论siRNA沉默HBx基因可抑制HepG2．2．15细胞中癌症标志基因hTERT的表达。     

空心莲子草总皂苷对HepG2.2.15细胞系HBsAg和HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响

目的：研究空心莲子草总皂苷对乙肝病毒的抑制作用。方法：应用光密度测定法和细胞培养技术,研究空心莲子草总皂苷对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响。结果：96孔板试验：实验第3、6日,空心莲子草总皂苷对HBsAg和HBeAg表达均有明显的抑制作用（与对照组比较P<0.01）;同时采用定量PCR方法检测,空心莲子草总皂苷（200 mg·L-1）可使培养基中HBV-DNA转阴。结论：空心莲子草总皂苷有较强的体外抗乙肝病毒作用。     

琐琐葡萄多糖体外抗乙型肝炎病毒作用的实验研究

<正>琐琐葡萄(Vitis viniferal L)为葡萄科小无核红葡萄,药用果实,主产于我国新疆吐鲁番、和田、鄯善等地[1],具有健脾胃、理肺、生津、养血等功效;在维吾尔医临床主要应用于脾胃不和、神志不安以及小儿麻疹和肝炎等病症的治疗[2],     

岩黄连提取物体内抗乙型肝炎病毒作用研究

目的观察岩黄连提取物的体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）作用。方法采用1日龄广西麻鸭感染DHBV,7d后用聚合酶链反应（PCR）法筛选出DHBV强阳性鸭,随机分成岩黄连高、中、低剂量组[剂量分别为8,4,2mg／（kg·d）],模型对照组（生理盐水）和阿昔洛韦阳性对照组[0．1mg／（kg·d）]5组,每组10只,各组雏鸭均灌胃给药14d。于用药前（T0）、用药第7天（T4）、用药第14天（T14）及停药后第3天（P3）分别采血,以荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测血清DHBV-DNA的含量,以改良赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶（AIJT）和天门冬酸氨基转移酶（AST）活性,取肝组织作常规HE染色观察病理改变。结果岩黄连各剂量组用药后血清DHBV-DNA水平显著降低（P〈0．05）,P3时中、低剂量组血清有明显回升现象,而高剂量组回升现象不明显;用药前后血清A1月和AST变化与DHBV-DNA水平改变相似;鸭肝脏病理学检查显示岩黄连提取物对DHBV所致肝损伤有显著的保护作用。结论岩黄连提取物在体内有显著的抗DHBV作用。     

The potential anti-HBV effect of amantadine in combination with ursodeoxycholic acid and biphenyl dimethyl dicarboxylate in HepG2 2.2.15 cells

Experimental studies have demonstrated that the triple combination of amantadine (A)/ ursodeoxycholic acid (UDCA, U)/ biphenyl dimethyl dicarboxylate (DDB, D) might have a preferential antiviral effect compared with that observed in interferon-induced antiviral signal pathways, such as those of STAT1alpha and the 6-16 genes. To confirm the result, this study examined whether the signal transduction for the antiviral activity in HepG2 2.2.15 was induced dependently or independently of interferon. To accomplish this, the correlation between the STAT1alpha and 6-16 genes, and nitric oxide, for the mediation of the antiviral activity was assessed. The increase in nitric oxide in the UDCA groups suggests that the inhibition of viral gene replication was enhanced by the amantadine combinations (AU and AUD), and might be more effective if incubated for longer periods. It was found that STAT1alpha was activated by the amantadine combination, although to a lesser extent than that of interferon-alpha, and the primary endpoints examined for the inhibition of gene expression (HBsAg and HBcAg) were remarkably well regulated. This suggests that the amantadine triple, or at least the double, combination had better clinical benefits than those of IFN-alpha and the nucleoside analogue single treatment. This demonstrates that the amantadine combination might be a substitute for the existing HBV therapy if the results of in vivo and in vitro studies concur.     

蜕皮甾酮对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

目的探讨蜕皮甾酮体外降糖的作用特点或机制,即能否通过刺激胰岛素分泌而产生降糖作用。方法检测HepG2细胞24 h培养液中葡萄糖的消耗量;另外测定βTC3细胞胰岛素的释放量。结果蜕皮甾酮在1×10-6~10-4mol.L-1浓度范围内可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加(44%~77%);蜕皮甾酮的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低;胰岛素对蜕皮甾酮的降糖作用没有明显的影响。蜕皮甾酮没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用。结论蜕皮甾酮可通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用,但不能刺激胰岛素的分泌。     

锌α2糖蛋白对肝癌HepG2细胞增殖与侵袭能力的影响

目的：锌α2糖蛋白（ZAG）是一种具有复杂功能的蛋白。本研究探讨ZAG对肝脏肿瘤HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响及其作用机理。方法：构建ZAG干扰质粒,并转染入HepG2肝癌细胞株,采用Western blot方法检测转染前后ZAG表达的变化;利用MTT和平板克隆实验检测ZAG对细胞增殖的影响,利用Transwell小室实验检测转染前后HepG2细胞侵袭能力的变化,同时检测转染前后细胞ATP含量的变化,以了解ZAG对细胞代谢的影响。结果与结论：ZAG干扰质粒成功转染入HepG2细胞并筛选出ZAG下调的稳定细胞株;转染后的HepG2细胞增殖能力、侵袭能力均有显著提高,同时ATP水平上调,肿瘤细胞恶性更强。