合欢皮中抑制血管内皮细胞增殖活性组分的分析

目的 研究合欢皮中抑制血管生成的活性组分.方法 在抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖实验的跟踪下,采用大孔树脂吸附、硅胶常压、反相C18色谱柱层析分离纯化合欢皮的醇提物.结果 分离得到白色混合物,其抑制HMEC的IC50为2.81 μg·mL-1.结论 合欢皮中抑制血管内皮细胞增殖的活性组分群为皂苷类化合物.     

板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用

目的 研究板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用机制.方法 用不同浓度的板蓝根注射液与人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)共同培养后,采用MTY法及形态学方法观察板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用.结果 不同浓度的板蓝根注射液对细胞生长具有抑制作用.结论 板蓝根注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖不但具有抑制作用,且与浓度呈正相关.     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

促微管蛋白解聚剂NPI-2358作为肿瘤血管抑制剂的体外实验依据

实体瘤依赖于血管系统而生长，一部分快速增殖的肿瘤血管内皮细胞因缺少完好的肌丝结构而更依赖于微管来保持结构的完整。增殖的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）便是如此，故常被用作肿瘤血管内皮细胞的体外模型。NPI-2358是一种合成二酮哌嗪衍生物，其先导物为来自真菌曲霉的化合物phenylahistin，体外实验研究发现其作用位点为微管蛋白的秋水仙碱位点。     

阿魏酸钠对同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞功能障碍的影响及机制

目的：采用人脐静脉内皮细胞建立了同型半胱氨酸血管内皮细胞损伤模型,研究阿魏酸钠对胞外同型半胱氨酸损伤的内皮细胞功能障碍的保护作用。方法：采用CCK8法检测不同浓度阿魏酸钠对人脐静脉内皮细胞活性的影响;人脐静脉内皮细胞与不同浓度阿魏酸钠和同型半胱氨酸共同孵育后,直接观察同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞形态的影响,检测一氧化氮、一氧化氮合成酶、内皮素、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶含量变化及相应阿魏酸钠的保护作用。结果：阿魏酸钠能够减少同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的损伤,降低同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞产生的氧化压力,减轻同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞分泌功能异常。结论：阿魏酸钠能够缓解同型半胱氨酸导致的人脐静脉内皮细胞功能障碍。     

不同型号大孔吸附树脂对何首乌二苯乙烯苷的吸附性考察

目的优选适合纯化何首乌水提液的大孔吸附树脂。方法以二苯乙烯苷保留率为评价指标,采用高效液相色谱法测定何首乌提取液和洗脱液中二苯乙烯苷的含量,通过吸附率、洗脱率和纯化效率优选出适合分离纯化何首乌水提液二苯乙烯苷的最佳树脂类型,并考察该树脂的吸附平衡时间。结果不同型号树脂对何首乌水提液中二苯乙烯苷的吸附效果有差异,D101型树脂对二苯乙烯苷的吸附性能较好,且易洗脱,纯化效率最高。二苯乙烯苷在D101树脂上的吸附平衡时间为7 h。结论D101型树脂适合分离纯化何首乌水提液。     

补骨脂素对肿瘤血管内皮细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨补骨脂素对人血管内皮细胞生长增殖的抑制作用及对细胞内钙离子浓度的影响。方法:采用噻唑兰还原实验检测不同药物浓度对血管内皮细胞增殖活性的影响,激光共聚焦显微镜测定人脐静脉内皮细胞株加补骨脂素含药血清后不同时间段和不同剂量对人血管内皮细胞内钙离子浓度影响。结果:补骨脂素作用人血管内皮细胞24小时后对内皮细胞增殖抑制率21.43～83.33%。结论:补骨脂素均可明显抑制人内皮细胞的分裂与增殖,且影响人血管内皮细胞的钙离子浓度,呈明显时效和量效关系。     

益母草化学成分的分离与鉴定Ⅱ

目的 分离和鉴定益母草Leonurus japonicus Houtt.的水提物和醇提物化学成分。方法 利用大孔树脂、硅胶柱色谱和HPLC进行分离纯化，根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果 得到4个化合物，分别鉴定为丁香酸(syringic acid,1)、megastigrnane(2)、tiliroside(3)、益母草碱(1eonurine，4)。结论 化合物1和2为首次从该属植物中分离得到。     

海仙人掌Cavernularia sp.的化学成分研究

采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及高效液相色谱等分离技术,从采自青岛海域的腔肠动物海仙人掌醇提物中分离得到了4个单体化合物;用1H NMR1、3C NMR和ESIMS等光谱分析,分别鉴定为胆甾醇、胆甾醇乙酸酯、24-表油菜甾醇和苯丙氨酸。     

硅胶柱层析法分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯

目的 优化表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的分离纯化条件。方法 采用硅胶柱层析法，用氯仿和乙酸乙酯对儿茶素富集物进行萃取富集，考察洗脱条件（洗脱剂的类型、体积分数、pH、流速）及上样量对EGCG分离纯化效果的影响，收集高纯度的EGCG馏分，采用高效液相色谱（HPLC）法对儿茶素单体进行检测。结果 最佳洗脱条件为，儿茶素富集物上样量为0.4 g，以80%乙醇为洗脱剂，在pH 4.0、流速3 mL/min条件下进行洗脱。在此条件下，EGCG得率为81.79%，纯度为91.14%。结论 硅胶柱层析法具有方便、快速、纯化分离效果好等优点，可经济、有效地分离出高纯度EGCG。     

芪参益气滴丸促血管新生的实验观察

目的：观察芪参益气滴丸对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响,测定其对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,探讨该药促进血管生成的可能机制。方法实验分组：生理盐水组、空白血清组、bFGF 组、芪参益气滴丸组;建立鸡胚尿囊膜（CAM）模型,计数各组 CAM 上血管数;体外培养人脐静脉内皮细胞,应用血管内皮细胞增殖实验（MTT）法测定各组 A 值。结果与生理盐水组及空白血清组比较,芪参益气滴丸组具有明显的促 CAM 血管生成作用（P ＜0．05）,并促进人脐静脉内皮细胞增殖（P ＜0．05）。结论芪参益气滴丸具有促血管生成作用,其机制可能与该药促进内皮细胞增殖有关。     

马齿苋化学成分的分离与鉴定

目的：对马齿苋的化学成分进行分离与鉴定。方法：采用大孔吸附树脂柱、硅胶柱及制备高效液相色谱等色谱方法分离化合物,并通过核磁共振波谱和电喷雾质谱、无畸变极化转移增强谱、1H-1H-COSY谱、异核多量子关系谱、多键碳氢关系谱等谱学技术确定分离出的化合物结构。结果：从马齿苋提取物中分离得到5个化合物,分别为丁香苷（1）、十三烷酸（2）、9,12-十八碳二烯酸（3）、11,14,17-二十碳三烯酸（4）、二十六烷酸（5）,均为首次从该植物中分离得到。结论：本试验结果可为马齿苋的进一步开发利用提供依据。     

血管内皮生长因子受体-3在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子受体-3（VEGFR-3）在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达。方法分离人脐带中的脐静脉和脐动脉,冰冻切片后以免疫荧光法检测VEGFR-3的表达。结果VEGFR-3荧光信号表达于脐静脉内皮细胞和平滑肌细胞,以及脐动脉内皮细胞、平滑肌细胞和外周细胞。结论血管内皮细胞和平滑肌细胞均表达VEGFR-3。     

蒙药复方协日嘎四味汤散的化学成分研究

目的:研究蒙药复方协日嘎四味汤散的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱法和柱色谱法分离纯化复方协日嘎四味汤散的提取物,根据其理化性质并运用波谱技术鉴定化合物结构。结果:从复方协日嘎四味汤散中分离得到11个化合物,经鉴定为黄柏酮(1)、黄柏内酯(2)、十六烷酸(3)、去甲氧基姜黄素(4)、姜黄素(5)、小檗碱(6)、双去甲氧基姜黄素(7)、姜黄醇(8)、香草酸(9)、汉黄芩素(10)、京尼平苷龙胆二糖苷(11)。结论:鉴定的11个化合物均为首次从该复方中分离得到。本试验结果可为复方协日嘎四味汤散的药效物质基础研究提供依据。     

Three previously undescribed steroidal glycoalkaloids from Solanum lyratum and their anti-tumor activities

In the present study, three previously undescribed steroidal glycoalkaloids (compounds 1–3) were isolated from Solanum lyratum. Their structures were elucidated based on comprehensive spectroscopic data. Their anti-angiogenesis and anti-metastatic activities were evaluated by MTT and wound-healing assays, respectively. Tumor-derived vascular endothelial cells (TdECs), obtained by co-culture of A549 and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), were treated with compounds 1–3. Results showed that compounds 1–3 significantly inhibited the migration of TdECs at 25 μM despite the weak cytotoxic activities, which indicated that the compounds exerted anti-tumor activities by inhibiting metastasis, rather than directly inhibiting the proliferation of TdECs.     

心血管相关基因芯片的制备及其在知母皂苷作用机理研究中的应用心血管相关基因芯片的制备及其在知母皂苷作用机理研究中的应用

目的研究知母皂苷活血化瘀作用的分子机制。方法制备了包含87个心血管疾病相关基因探针的寡核苷酸芯片。将80 mg·L^-1 知母皂苷作用8 h及未作用的培养人血管内皮细胞提取总RNA，通过逆转录分别标记Cy 5和Cy 3荧光染料，然后与芯片杂交，检测知母皂苷对血管内皮细胞中心血管疾病相关基因表达的影响。结果知母皂苷作用于血管内皮细胞后，血管紧张素酶原（AGT）基因、肾上腺素α2A受体（ADRA2R）基因和内皮素转换酶-1（ECE-1）基因的表达均有不同程度的下调。结论知母皂苷有调控血管内皮细胞功能的作用，可能是其治疗心血管疾病的机制之一。     

人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立

目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Caveolin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用.方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链.通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PollII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体.用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率.结果:测序结果显示pENTRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确.LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统.转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%.结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应.人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础.     

Icariside II from Epimedium koreanum inhibits hypoxia-inducible factor-1alpha in human osteosarcoma cells

Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) is an important tumor-selective therapeutic target for solid tumors. Icariside II was isolated from Epimedium koreanum through successive fractionation with ethyl acetate, n-butanol, chloroform and hexane, followed by gel column chromatography. Icariside II attenuated the protein level of HIF-1alpha induced by hypoxia in human osteosarcoma (HOS) cells in a concentration-dependent manner, probably by enhancing the interaction rate between von Hippel-Lindau (VHL) and HIF-1alpha. Furthermore, Icariside II down-regulated the levels of HIF-inducible genes involved in angiogenesis, metastasis, and glucose metabolism, such as vascular endothelial growth factor (VEGF), urokinase plasminogen activator receptor (uPAR), adrenomedullin (ADM), matrix metalloproteinase 2 (MMP2), aldolase A, and enolase 1 in HOS cells. Icariside II also inhibited the migration rate in HOS cells and tube formation rate in human umbilical vein endothelium cells (HUVECs). Overall, these results suggest the potential use of Icariside II as a therapeutic candidate against various diseases that involve overexpression of HIF-1alpha.     

Vasodilatory and anti-inflammatory effects of the 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-beta-D-glucose (PGG) via a nitric oxide-cGMP pathway

Vasorelaxant and anti-inflammatory effects of a 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-beta-d-glucose (PGG) isolated from the root barks of Paeonia suffruticosa and possible mechanisms responsible were investigated. PGG induced a concentration-dependent relaxation of the phenylephrine-precontracted rat aorta. This effect disappeared with the removal of functional endothelium. Pretreatment of the aortic tissues with either N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) or 1H-[1,2,4]-oxadiazole-[4,3-alpha]-quinoxalin-1-one (ODQ) inhibited the relaxation induced by PGG. Incubation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) or carotid arteries isolated from rats with PGG increased the production of cGMP in a dose-dependent manner, but this effect was blocked by pretreatment with L-NAME and ODQ, respectively. PGG treatment attenuated tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha)-induced nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) p65 translocation in human umbilical vein endothelial cells. In addition, PGG suppressed the expression levels of adhesion molecules including intracellular cell adhesion molecule-1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) induced by TNF-alpha. TNF-alpha-induced monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) expression was also attenuated by addition of PGG. PGG treatment inhibited cellular adhesion of U937 cells onto human umbilical vein endothelial cells induced by TNF-alpha. Taken together, the present study suggests that PGG dilates vascular smooth muscle and suppresses the vascular inflammatory process via endothelium-dependent nitric oxide (NO)/cGMP signaling.     

飞龙掌血石油醚部位的化学成分研究

目的:研究飞龙掌血石油醚部位的化学成分。方法:采用薄层色谱、硅胶与凝胶柱色谱法对飞龙掌血石油醚部位进行分离纯化,通过理化方法和波谱数据进行结构鉴定。结果:从飞龙掌血的石油醚部位中分离得到6个化合物,通过波谱数据及理化性质分别鉴定为十八酸(1)、油酸(2)、亚油酸(3)、β-谷甾醇(4)、茴芹内酯(5)和去甲白屈菜红碱(6)。其中化合物1～3为首次从该植物中分离得到。结论:本试验结果可为飞龙掌血的进一步研究提供依据。