三氧化二砷对肝癌细胞内活性氧水平的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞增殖及细胞内活性氧（ROS）水平的影响。方法用As2O3作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞株，分别用MTT法和流式细胞仪观察SMMC-7721细胞增殖情况并检测ROS。结果MTT结果显示As2O3能明显抑制SMMC-7721细胞的增殖．并呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪分析显示As2O3作用后的人肝癌SMMC-7721细胞内ROS水平明显增高（P〈0．01）．并也呈时间和浓度依赖性。结论As2O3可通过抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用，这可能也是As2O3抗肝癌的主要途径之一。     

光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制

目的研究光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制作用。方法以四唑盐比色试验(MTT)法检测二萜类化合物对SMMC-7721细胞生长的抑制率,用相差倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率及多药耐药基因1(MDR1)的表达水平。结果5～25／2M的二萜类化合物对SMMC-7721细胞有较强的抑制作用,与浓度呈线性相关,并呈时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为19．41／2M,20／2M的药物作用于SMMC-7721细胞48h,流式细胞术检测细胞周期阻滞于G0～G1期,细胞凋亡率为24．95％;在相差倒置显微镜下观察到细胞凋亡的特征形态改变,MDR1表达明显下调,且随药物浓度的增加MDR1表达水平逐渐下降。结论光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721有显著的抑制作用,可诱导癌细胞凋亡,明显下调MDR1的表达,具有逆转多药耐药性的作用。     

秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的 制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。方法 采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测。采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%。MTT结果显示,IC50为2.24 mmol·L-1,并呈现时间-剂量依赖关系。流式细胞仪(FCM)检测表明, G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论 秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡。     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

多西他赛体外抗肝癌作用及对细胞内氧化还原状态的影响

目的：研究多西他赛（docetaxel）体外抗肝癌作用及其与氧化还原状态的关系。方法：用不同浓度的多西他赛处理肝癌细胞株（SMMC-7721细胞），用集落形成试验检测多西他赛对SMMC-7721细胞生长抑制作用，通过流式细胞术测定多西他赛对SMMC-7721细胞株细胞周期及凋亡的影响。用DCF／DA作为活性氧（reactive oxygen species，ROS）捕获剂检测用药后细胞内ROS产生。用试剂盒测定细胞谷胱甘肽（glutathione。GSH）水平。结果：多西他赛能抑制SMMC-7721细胞增殖，并呈浓度依赖性；诱导SMMC-7721细胞凋亡和G2／M期阻滞；导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低。结论：多西他赛能通过诱导细胞凋亡和G2／M期阻滞而抑制SMMC-7721细胞增殖，用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低可能在多西他赛体外抑制SMMC-7721细胞增殖和促进细胞凋亡中起重要作用。     

秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。方法采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测。采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响。结果高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%。MTT结果显示,IC50为2.24mmol·L^-1,并呈现时间-剂量依赖关系。流式细胞仪（FCM）检测表明,G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著（P〈0.05）。结论秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡。     

蜗牛多糖对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的 探讨蜗牛多糖对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用. 方法将不同浓度的蜗牛多糖分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,48,72 h后,采用噻唑蓝法测定吸光度值(A),评定蜗牛多糖对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞周期的影响. 结果 不同浓度的蜗牛多糖作用SMMC-7721细胞24,48和72 h后,各组与细胞对照组比较,A值差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并显示出对时间和剂量的依赖性,蜗牛多糖对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度分别为0.293,0.032和0.011 mg.mL^-1. 流式细胞术结果 表明,蜗牛多糖能将肝癌细胞株SMMC-7721阻滞在细胞的G2/M期. 结论 蜗牛多糖对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖有一定的抑制作用.     

参麦注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的作用

目的 观察参麦注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的作用.方法 采用MTT法检测参麦注射液对于人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的体外增殖抑制率,流式细胞仪检测参麦注射液作用后的SMMC-7721肿瘤细胞的细胞周期、凋亡率的变化.结果 参麦注射液0～250μl/ml作用48 h,人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞增殖的抑制率为9.0%～83.1%.随着浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐上升.参麦注射液终浓度200 μl/ml作用后的人肝癌SMMC-7721细胞G0～G1期明显增高,S期和G2～M期的细胞比例明显减少,凋亡率明显高于对照组(70.91%vs.7.57%).结论 参麦注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用.     

肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人肝癌细胞株SMMC-7721体外侵袭能力的影响及其相关机制. 方法不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变,采用划痕标记荧光传输试验显示缝隙连接细胞通讯功能的变化,采用Western blot法检测连接蛋白32(Cx32)在细胞膜的表达. 结果 不同浓度TNF-α作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,Transwell试验显示细胞侵袭能力较对照组提高,且随TNF-α浓度增加而升高. 同时,缝隙连接细胞通讯功能减弱,细胞膜上Cx32的表达减少. 结论 TNF-α可能通过影响Cx32在细胞膜的表达及细胞通讯促进人肝癌细胞株SMMC-7721的侵袭能力.     

人剪切修复基因XPD对人肝癌SMMC-7721细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用

目的:观察野生型人剪切修复基因XPD转染入人肝癌细胞SMMC-7721后,细胞内Ets-1和Cdk6基因的表达变化及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响。方法:将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine 2000TM转染SMMC-7721细胞。设重组质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD)组、空载质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2(N2)组、脂质体组、无转染空白对照组。分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因mRNA和蛋白质的表达量,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活力。结果:XPD组中的XPD的mRNA和蛋白质表达较其他3组明显增高(P<0.001),而Ets-1、Cdk6 mRNA和蛋白质表达较其他3组明显减少(P<0.001)。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞停滞在G1期,难于进入S期。转染了野生型XPD的SMMC-7721细胞增殖能力减弱。结论:XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达影响肝癌细胞的生长。     

聚乙二醇化多聚β肽抗肝癌转移的体内外实验研究

目的：观察多聚β肽及其聚乙二醇（PEG）修饰物对肝癌细胞株侵袭黏附能力和对裸鼠移植人肝癌早期切除术后转移复发的影响。方法：以MTT法测量多聚β肽和其PEG修饰物对肝癌细胞与纤连蛋白（FN）黏附的影响。以细胞侵袭实验观察多聚β肽及其PEG修饰物对肝癌细胞侵袭能力的影响。以LCI-D20裸鼠人肝癌转移模型为材料，观察多聚β肽及其PEG修饰物对早期肝癌切除术后转移复发的影响。结果：β2、β2-PEG、β3和β3-PEG对SMMC-7721细胞与FN黏附抑制率分别为31．3％、39．2％、45．7％和57．1％，侵袭抑制率分别为33．6％、35．9％、38．3％和41．2％；对HCCLM6细胞与FN的黏附抑制率分别为48．7％、60．9％、63．4％和79．3％，侵袭抑制率分别为36．8％、46．6％、45．6％和50．8％。多聚β肽及其PEG修饰物组切缘复发肿瘤重量和肺转移灶个数显著低于对照组（P％0．05）。结论：多聚β肽及其PEG修饰物能抑制肿瘤细胞的黏附和侵袭能力，亦能防治裸鼠移植人肝癌早期切除术后的转移和复发。     

短发夹RNA沉默YAP表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的本实验通过短发夹RNA(shRNA)抑制Yes相关蛋白(YAP)基因的表达,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、凋亡和周期影响。方法以人YAP mRNA编码区中的4条序列作为RNA干扰靶点,分别构建4个真核表达载体质粒YAP-shRNA-1、YAP-shRNA-2、YAP-shRNA-3、YAP-shRNA-4,用阳离子聚合物转染法瞬时转染,筛选出2个干扰效果较好的质粒,将它们瞬时转染肝癌细胞SMMC-7721,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测SMMC-7721细胞中YAP在mRNA和蛋白水平表达的变化。噻唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果转染后293T细胞中shRNA-YAP-2组与shRNA-YAP-4组YAP mRNA表达明显降低,在SMMC-7721中shRNA-YAP-2组与shRNAYAP-4组的YAP mRNA及蛋白表达水平分别为(0.871±0.081,0.106±0.013)和(1.010±0.097,0.192±0.013),与未转染组(2.399±0.148,0.372±0.007)比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT显示,shRNA-YAP-2、shRNA-YAP-4组细胞生长明显抑制,但未出现阻滞;流式细胞仪分析显示,shRNA-YAP-2组和shRNA-YAP-4组细胞凋亡率分别为(12.0±0.81)%和(5.03±1.01)%,明显高于空质粒组的(2.89±0.08)%(P<0.01)。细胞被阻滞在G2期,G0/G1期出现DNA亚二倍体峰。结论运用shRNA干扰技术,可以有效地干扰肝癌SMMC-7721细胞YAP的表达并能降低YAP的生成,抑制SMMC-7721细胞的增殖和促进细胞的凋亡。     

维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用细胞计数试剂盒检测不同浓度维A酸注射液对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,计算半数抑菌浓度(IC50)。建立裸鼠SMMC-7721移植瘤模型,分为阴性对照组(n=12)、阳性对照(顺铂1mg.kg-1)组和维A酸低、中、高剂量(7.5、15、30mg.kg-1)组,后4组各6只。腹腔给予相应药物,每周连续给药5d后停药2d,共给药4周,每周检测各组裸小鼠体重、肿瘤体积(TV)、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C),及末次给药2d后移植瘤组织中凋亡细胞阳性率和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:维A酸注射液对SMMC-7721细胞的IC50为(15.14±0.46)μg.mL-1。小鼠给药19d(治疗疗效最佳时间)时,与阴性对照组比较,其余各组TV、RTV均明显下降(P<0.05或P<0.01),体重无明显变化,T/C均小于60%;末次给药2d后,与阴性对照组比较,维A酸3个剂量组凋亡细胞阳性率和Caspase-3表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:维A酸注射液能抑制SMMC-7721细胞的增殖及其裸小鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡和Caspase-3表达有关。     

The cytotoxicity induced by brucine from the seed of Strychnos nux-vomica proceeds via apoptosis and is mediated by cyclooxygenase 2 and caspase 3 in SMMC 7221 cells.

To study the cytotoxicity of four alkaloids: brucine, strychnine, brucine N-oxide and isostrychnine from nux vomica on SMMC 7721 cells and their possible mechanisms, MET assay was used to examine the growth inhibitory effects of these alkaloids. Brucine revealed the strongest growth inhibitory effect on SMMC-7721 cells. Furthermore, as directly observed under an inverted microscope, fluorescent microscope and transmission electronic microscope, brucine caused SMMC-7721 cell shrinkage, membrane blobbing, formation of apoptotic body as well as nucleus condensation, all of which are typical characteristics of apoptotic programmed cell death. In addition, brucine dose-dependently caused SMMC-7721 cells apoptosis via formation of subdipolid DNA and phosphatidylserine externalization, as evidenced by flow cytometry analysis. The brucine-induced apoptosis was partially attributed to the activation of caspase 3 as well as cyclooxygenase 2 inhibition, since neither caspase 3 specific inhibitor, z-DEVD-fmk nor was exogenous addition of prostaglandin E(2) able to completely abrogate the brucine-induced SMMC 7721 cell apoptosis. In sum, this paper indicate that the major alkaloids present in the seed of Strychnos nux-vomica are effective against SMMC-7721 cells proliferation, among which brucine proceeds SMMC-7721 cells death via apoptosis, probably through the participation of caspase 3 and cyclooxygenase 2.     

安体康注射液体外抑瘤作用及对放化疗增效作用的研究

目的评价安体康注射液体外抑瘤作用及对荷瘤小鼠放化疗的增效作用。方法采用结晶紫比色法测定药物对人肺癌G6细胞、人胃腺癌MKN28细胞、人肝癌SMMC7721细胞的抑制作用,用IC50评测其效果。3个剂量给药组(0.45、0.90、1.80 g·kg-1)分别与环磷酰胺、顺氯氨铂、阿霉素合用,2个剂量给药组(0.90、1.80 g·kg-1)分别与60Co照射合用,与单用放化疗药物组比较瘤质量、抑瘤率、增效率。结果安体康注射液对G6、MKN28、SMMC7721细胞的IC50分别为0.381、0.365、0.371 mg·mL-1。合用药各组与相对应的放化疗药物单用组比较,平均瘤质量均小于单用药组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论安体康注射液对G6、MKN28、SMMC7721细胞的生长有较强的抑制作用,对荷瘤小鼠环磷酰胺、顺氯氨铂、阿霉素化疗和60Co放疗有增效效应。     

三聚β肽聚乙二醇化后抗肿瘤转移生物活性研究

目的:比较聚乙二醇(PEG)修饰对三聚β肽(β3)抗肿瘤转移活性的影响。方法:采用黏附试验观察β3及其PEG修饰物(β3-PEG)对肝癌细胞株与纤连蛋白(FN)黏附能力的影响;采用人工基底膜胶观察β3和β3-PEG对肿瘤细胞侵袭重组基底膜能力的影响。结果:β3和β3-PEG对肿瘤细胞SMMC-7721和HCCLM6与FN黏附能力均有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量及时间正相关;PEG修饰可增强β3对2种肿瘤细胞的黏附抑制作用(P<0.05)。β3和β3-PEG对2种肿瘤细胞迁移和侵袭均有显著的抑制作用(P<0.05)。结论:PEG修饰可增强β3抗黏附作用,但对细胞迁移和侵袭的抑制作用无明显影响。     

Mucin-4在百里醌抑制肝癌生长中的作用

目的 探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测Mucin-4 mRNA在SMMC-7721细胞中的表达;Western blot-ting检测肝癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立裸鼠肝癌皮下移植模型,完全随机法分为对照组和低（10 μmol/L）、中（20 μmol/L）、高剂量（40 μmol/L）百里醌组,观察不同剂量百里醌对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结果 不同浓度（10、20、40 μmol/L）百里醌作用人肝癌SMMC-7721 24 h后,细胞存活率分别为（80.14±9.84）％、（71.68±6.51）％和（64.58±5.24）％;百里醌作用后,SMMC-7721细胞出现典型凋亡形态学改变;百里醌干预后SMMC-7721细胞中Mucin-4蛋白和mRNA的表达均明显下调,呈浓度依赖性;实验结束后,对照组和低、中、高剂量百里醌组肿瘤体积分别为（1056.3±236.3）、（672.3±178.8）、（529.4±165.7）、（473.1±141.5） mm2,各百里醌组肿瘤体积明显低于对照组（P＜0.05）,低、中、高剂量百里醌组抑瘤率分别为36.5％ 、49.9％和30.3％;百里醌可明显降低肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制体内外肝癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4的表达而实现.     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,进一步探讨透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制的分子机制。方法MTr法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,免疫组化方法检测SMMC-7721细胞β-catenin和cyclinD1蛋白的表达。结果6．25—100μg／ml透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加（P〈0．05）,而且随透骨草浓度的增加,抑制率逐渐增加。透骨草提取物对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度（IC50）为40．91ug/ml。40．91μg／m1透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞β—catenin和cyclinD1的表达明显低于对照组（P〈0．05）。结论透骨草提取物对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与下调β-catenin和cyclinD1的蛋白表达有关。     

桂皮酸体外诱导人肝癌细胞分化

目的 观察桂皮酸（CINN）对SMMC－7721细胞的诱导分化作用。方法 体外培养人肝癌细胞SMMC－7721,加入不同浓度的CINN,通过对其形态学、细胞增殖动力学、细胞生物化学行为及细胞周期分布的观察,探讨CINN对肿瘤细胞的诱导分化能力。结果 经CINN处理后,SMMC－7721细胞形态趋向良性分化,生长减速慢,集落形成率显著降低,甲胎蛋白分泌减少,FCM检测显示G0／G1期细胞增加而G2＋M期细胞减少。结论 CINN对SMMC－7721细胞有较好的诱导分化作用。