洛克米兰醇对肝癌HepG2细胞的抗增殖作用及其机制研究

目的研究传统中药米仔兰Aglaiaodorata中洛克米兰醇对肝癌细胞HepG2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 MTT、细胞克隆形成、EdU染色和CFDA染色方法考察洛克米兰醇对HepG2细胞的抗增殖效果;流式细胞仪检测洛克米兰醇对HepG2细胞细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blotting检测洛克米兰醇对细胞周期调控蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响。结果洛克米兰醇可以时间和浓度依赖性抑制HepG2细胞增殖。同等浓度下洛克米兰醇抗HepG2细胞增殖的效果好于阿霉素,而对正常肝细胞(L02)的毒性弱于阿霉素。流式细胞技术检测发现洛克米兰醇给药48 h能够诱导HepG2细胞G_2/M期细胞周期阻滞,但不诱导细胞凋亡。Western blotting研究发现该化合物抑制调控G_2/M周期相关蛋白cdc25C、cdc2和cyclin B1的表达并且激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)。对其机制深入研究发现,ERK抑制剂(U0126)可以部分逆转洛克米兰醇对HepG2的抗增殖和G_2/M周期阻滞及其抑制蛋白cdc25C和cdc2表达的效果。结论洛克米兰醇在抑制肝癌细胞增殖的效果和对正常肝细胞的选择性方面优于阿霉素。洛克米兰醇能够通过过度活化ERK,从而引起HepG2细胞G_2/M周期阻滞而达到抗增殖效果。     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

槲皮素对SMMC-7721肝癌细胞PI3K/AKT信号通路影响的探讨

目的:观察槲皮素( quercetin)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞凋亡的影响,探讨其对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用MTT法检测槲皮素对SMMC-7721细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测槲皮素对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:槲皮素抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性.顺铂和槲皮素40,80,160,320 μmol·L-148 h抑制率分别为62.19％,25.47％,27.18％,36.96％,51.28％.流式细胞术结果提示,槲皮素80,160,320μmol ·L -可使SMMC-7721肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期.Western blot凋亡相关蛋白表达检测表明,药物组AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:槲皮素能诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡,其机制可能是使肝癌细胞SMMC-7721周期阻滞于G0/G1期,PTEN的过表达抑制AKT活化,激活Caspase-9从而促进细胞凋亡.     

α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响

目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响.方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合.流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋...     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡及其凋亡通路的影响

目的:研究槲皮素体外对人肝癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测细胞上清液中Caspase-3、Caspase-9及Survivin的含量。结果:槲皮素(10-320μmol.L-1)体外可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并具有浓度和时间依耐性;在40-160μmol.L-1浓度下,槲皮素可诱导SMMC-7721细胞凋亡;将细胞阻滞在G2-M期;使Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量显著增加,而Survivin蛋白表达显著减少。结论:槲皮素抑制人肝癌SMMC-7721细胞的作用机制与诱导细胞凋亡和将细胞周期阻滞在G2-M期有关,其凋亡通路涉及Caspase途径。     

枸杞多糖对人肝癌细胞HepG2生长的影响及其分子机制

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarumpolysaccharides,LBP)对人肝癌细胞HepG2生长的影响及可能机制。方法人肝癌HepG2细胞用100~1 000 mg/L LBP处理1~5 d,分别用MTT方法、流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。用Western blotting分析周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)表达的变化。结果 LBP以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡;其分子机制为引起cyclin Dc、yclin E和CDK2蛋白表达下降。结论 LBP抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨雷氏大疣蛛Macrothele raveni毒素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的抑制作用，进一步探讨其作用的分子机制。方法 采用MTT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMMC一7721细胞增殖作用的影响；采用[^3H]TdR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMMC7721细胞DNA合成的变化；采用流式细胞术（FCM）探讨雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响；采用Western Blot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-myc蛋白表达的影响。结果 MTT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞增殖有较强的抑制作用（P〈0．05），时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMMC-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMMC-7721细胞凋亡率增加，细胞周期阻滞在G2／M期。Western Blot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMMC7721细胞72h后，c-myc蛋白表达减弱。结论 雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和DNA的合成，其机制可能是诱导细胞凋亡，使细胞周期相关c-myc蛋白表达减弱，导致细胞周期的变化。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

雷公藤红素对胆管细胞的毒性作用及机制研究

目的研究雷公藤红素对人肝内胆管上皮细胞(human biliary epithelial cells,HIBEC)的毒性作用及机制。方法通过CCK-8实验及显微镜观察记录雷公藤红素对细胞形态和活力的影响;通过细胞划痕实验检测雷公藤红素对细胞迁移能力的影响;通过流式细胞术检测雷公藤红素对细胞周期的影响和对细胞凋亡的诱导作用;通过qRT-PCR和Western blotting检测雷公藤红素对凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达情况。结果雷公藤红素在400～2 000 nmol/L下,抑制细胞增殖,改变细胞形态;在200～800 nmol/L下,抑制细胞的迁移能力;在800～1 200 nmol/L下,出现G_0/G_1期阻滞作用;在400～1 200 nmol/L下,诱导细胞凋亡并增加相关基因的表达量。结论雷公藤红素可通过影响胆管细胞活力,改变其迁移能力,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡的方式产生胆管毒性。     

猫眼草中科罗索酸对肝癌SMMC-7721细胞作用的研究＊

目的 研究猫眼草活性单体的体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法 以人肝癌SMMC-7721细胞为研究对象，MTT法测定猫眼草的活性单体科罗索酸对细胞的增殖作用的影响并考察不同浓度药物作用下的细胞形态。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。流式细胞仪测定细胞凋亡和周期的情况。蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验检测凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示科罗索酸对人肝癌SMMC-7721细胞抑制作用强于巨大戟醇但弱于盐酸阿霉素。对细胞形态学和细胞划痕、细胞凋亡实验证实了科罗索酸有抑制该细胞生长的作用。细胞周期检测发现低剂量的科罗索酸使人肝癌SMMC-7721细胞周期阻滞在S期，而高剂量的科罗索酸会使人肝癌SMMC-7721细胞阻滞在G0/G1期。Western Blot结果显示上调抑癌蛋白Bax表达、下调Bcl-2基因。结论 猫眼草中的科罗索酸主要通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期两个机制发挥抗肿瘤作用，是通过调控Bax/Bcl-2的表达来抑制肿瘤细胞的生长，是一种线粒体膜损伤导致的内源性路径调节。     

The effects of oridonin on cell growth, cell cycle, cell migration and differentiation in melanoma cells

Oridonin, a diterpenoid isolated from Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara, is currently one of the most important traditional Chinese herbal medicines. We investigated the anti-proliferation effect of oridonin on the cultured murine melanoma cell line K1735M2. The growth inhibition activity of oridonin for K1735M2 cells occurred in a time- and dose-dependent manner (IC50 was 7.4+/-0.6 microM). Further studies showed that these inhibition effects were associated with dose-dependent G2/M phase arrest and differentiation induction. Detection of morphological observation showed that oridonin could induce K1735M2 cells to produce dendrite-like structures. The results of the migration indicated that oridonin affected motility of K1735M2 cells in a dose-dependent manner. These results suggested that oridonin is a potential candidate for melanoma cancer therapy.     

斑蝥素对HL—60细胞和QGY7703细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了斑蝥素对HL－60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响。结果表明,斑蝥素对HL－60细胞的IC50是15．34μmol/L,对QGY7703细胞的IC50是18．54μmol/L。按蝥素处理HL－60细胞和QGY7703细胞24h后,G2－M期细胞分布都有所增加,G0－G1期细胞分布都有所降低;斑蝥素处理HL－60细胞24h后,G0－G1期峰前有亚二倍体峰出现,说明斑蝥素在所用剂量下降够诱导HL－60细胞发生凋亡。     

血管内皮细胞-平滑肌细胞共培养体系研究进展

血管内皮细胞(endothelial cells,EC)和血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,VSMC)的相互作用、相互影响维持血管生理功能和多种疾病的发生发展,EC-SMC联合培养模型是目前研究这2种细胞间相互影响的最佳方式。作者对现有的EC-SMC共培养模型及共培养对这2种细胞结构和功能的影响进行综述,为在微观上深入研究二者的相互关系提供依据,也为建立更接近机体生理/病理状态的EC-SMC体外共培养体系提供参考。     

成人骨髓间质干细胞诱导分化为神经元样细胞及其与细胞分裂的关系

目的探讨成人骨髓间质干细胞(hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与细胞分裂的关系。方法从成人骨髓中分离骨髓间质干细胞(MSC),培养扩增。用参芪液诱导MSC分化为神经元样细胞,经免疫组化鉴定其神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。诱导后进行神经元样细胞计数,掺入Brdu测定,计算标记系数。采用双标记间接免疫荧光法检测神经元样细胞特异性表面标记(NSE、NF)与细胞分裂的标记Brdu的关系。抑制DNA合成,计算Brdu、NSE和NF阳性细胞数。结果MSC经参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF阳性,GFAP阴性。MSC诱导分化后的细胞总数增加,诱导分化后12h内细胞增殖较快。30%以上分化的神经元样细胞在表达NSE和NF的同时可见Brdu标记,而另一部分分化的神经元则无Brdu标记。抑制DNA合成,并不会阻止神经元的分化,仍有70%的分化神经元表达神经元特异性标记蛋白NSE。结论MSC诱导分化的部分神经元样细胞可进行细胞分裂,但抑制细胞分裂不影响神经元分化。     

九香虫三氯甲烷浸提物对两种癌细胞增殖和周期的影响

目的研究九香虫三氯甲烷浸提物对胃癌细胞SGC-7901和肝癌细胞HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法本研究采用冷浸法获得九香虫的三氯甲烷浸提物;MTT法分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞的细胞周期的影响。结果九香虫三氯甲烷浸提物能抑制SGC-7901细胞和HepG2细胞的体外增殖并呈明显的剂量依赖性,IC50分别为1 193.52和964.34μg/mL;流式细胞术分析表明,三氯甲烷浸提物作用后HepG2细胞的S期和G2/M期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例明显升高。结论九香虫三氯甲烷浸提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起。     

脐血干细胞和脐带间充质干细胞联合移植治疗自闭症

目的探讨干细胞移植治疗自闭症的可行性、疗效和安全性。方法将脐血干细胞和脐带间充质干细胞分别通过静脉输注和腰穿鞘内注射途径移植到自愿接受干细胞移植的2例自闭症患者体内。术后随访6个月定期观察患者临床症状及各项指标的变化,并采用儿童自闭症评定量表(CARS)和临床总体评定量表(CGIS)进行综合分析。结果治疗后患者临床症状较治疗前明显好转,并且随访半年症状持续缓解无复发。2例患者CARS较治疗前明显降低、CGIS较治疗前明显好转,移植过程中及治疗后未出现严重的并发症和明显的不良反应。结论脐血干细胞和脐带间充质干细胞联合移植治疗自闭症患者是一种值得借鉴的方法。     

熊果酸诱导SKOV3细胞凋亡与线粒体凋亡通路

目的:观察熊果酸(Ursolic acid,UA)是否通过激活卵巢癌SKOV3细胞的线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。方法:MTT法检测细胞增殖抑制,采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位,免疫印迹法检测细胞色素C的表达,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3的活性。结果:熊果酸可以抑制SKOV3细胞增殖,40μmol/L熊果酸,作用于SKOV3细胞48 h,增殖抑制率可以达到76.85±3.1%;UA可以诱导细胞发生凋亡;熊果酸可以降低SKOV3细胞的线粒体膜电位,促进细胞色素C的表达,增强Caspase-9、Caspase-3的活性。结论:熊果酸可以促进SKOV3细胞的凋亡,可能的作用机制之一是可以激活SKOV3细胞的线粒体凋亡通路。     

金雀异黄素对巨噬细胞RAW 264.7 增殖、形态和细胞周期的影响

目的研究金雀异黄素对巨噬细胞RAW264．7增殖、细胞形态及细胞周期的影响,以探讨其对免疫系统的作用。方法以鼠源巨噬细胞系RAW264．7为细胞模型,将金雀异黄素用二甲基亚砜（DMSO）溶解,再用培养液稀释成所需终浓度为12．5、25、50、100kcmol·L^-1的4组及溶剂对照组（DMSO体积含量比低于0．1％）。通过WST-1细胞增殖实验、倒置相差显微镜及流式细胞仪分别检测金雀异黄素对巨噬细胞的增殖、细胞形态及细胞周期的影响。结果金雀异黄素对巨噬细胞的影响呈时间和剂量依赖关系。50-100μmol·L^-1,浓度的金雀异黄素作用巨噬细胞24h和48h后均能抑制细胞增殖,细胞增殖率分别为77％～81％、58％-73％（P〈0．01）;并能影响细胞形态改变,表现为细胞体积增大,并形成较长伪足。流式细胞结果显示．该浓度金雀异黄素可将巨噬细胞阻滞在S-G2／M期。结论金雀异黄素能抑制巨噬细胞细胞增殖,影响巨噬细胞形态,可能与干扰细胞周期有关。     

In vitro effects of Sutherlandia frutescens water extracts on cell numbers,morphology, cell cycle progression and cell death in a tumorigenic and a non-tumorigenic epithelial breast cell line

Sutherlandia frutescens is a South African herb traditionally used for internal cancers, diabetes, a variety of inflammatory conditions and recently to improve the overall health in cancer and HIV/AIDS patients. The in vitro effects of S. frutescens extracts were evaluated on cell numbers, morphology, cell cycle progression and cell death. Dose-dependent studies (2–10 mg/ml) revealed a decrease in malignant cell numbers when compared to their controls. S. frutescens extracts (10 mg/ml) decreased cell growth in a statistically significantly manner to 26% and 49% (P < 0.001) in human breast adenocarcinoma (MCF-7) and human non-tumorigenic epithelial mammary gland cells (MCF-12A) respectively after 72 h of exposure. Cell density was significantly compromised and hypercondensed chromatin, cytoplasmic shrinking, membrane blebbing and apoptotic bodies were more pronounced in the MCF-7 cell line. Both S. frutescens-treated cell lines exhibited and increased tendency for acridine orange staining, suggesting increased lysosomal and/or autophagy activity. Flow cytometry showed an increase in the sub G₁ apoptotic fraction and an S phase arrest in both the 5 mg/ml and 10 mg/ml S. frutescens-treated cells. S. frutescens induced an increase in apoptosis in both cell lines as detected by Annexin V and propidium iodide flow cytometric measurement. At 10 mg/ml, late stages of apoptosis were more prominent in MCF-7 S. frutescens-treated cells when compared to the MCF-12A cells. Transmission electron microscopy revealed hallmarks of increased vacuolarization and hypercondensed chromatin, suggesting autophagic and apoptotic processes. The preliminary study demonstrates that S. frutescens water extracts exert a differential action mechanism in non-tumorigenic MCF-12A cells when compared to tumorigenic MCF-7 cells, warranting future studies on this multi-purpose medicinal plant in southern Africa.     

宝藿苷对人食管癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究香加皮中宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制.方法 采用MTT法分析不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ(12.5、25、50 μg/mL)分别作用24、48、72 h后,对Eca-109细胞增殖的影响;流式细胞术分析宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞周期的影响;RT-PCR技术检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1mRNA表达的影响;Western blotting方法检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1蛋白表达的影响.结果 25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为24.8μg/mL.25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,随宝藿苷-Ⅰ质量浓度的增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显提高,细胞的Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 香加皮宝藿苷-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用町能与下调细胞Cyclin B1表达有关.