载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E(Apo E)拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为Apo E拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。Apo E拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/(kg·d)背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0~35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。Apo E拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。Apo E拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义(P=0.72)。Apo E拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期(第35 d)均明显低于EAE组(均P0.05)。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;Apo E拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组(均P0.05)。Apo E拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组(均P0.05),其中Apo E拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异(均P0.05)。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组(均P0.05)。而Apo E拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 Apo E拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。     

趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠脊髓中的表达

目的:研究单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,用免疫组织化学方法观察EAE小鼠发病后第0天(初期)、第7天(高峰期)及第30天(恢复期)脊髓中MCP-1、MIP-1α的表达的变化,并通过免疫组化染色标记星形胶质细胞及小胶质细胞,判断MCP-1、MIP-1α的细胞来源。结果: MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠发病初期脊髓中有少量表达,发病高峰期表达增高,而恢复期无表达,MCP-1主要由星形胶质细胞产生,MIP-1α主要由小胶质细胞产生;对照组小鼠脊髓中则没有MCP-1、MIP-1α表达。结论:趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠CNS不同胶质细胞中表达,是EAE发病早期募集免疫反应细胞向CNS浸润的重要致炎性因子。     

骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的Iba1、IL-1β和IL-10影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的小胶质细胞Iba1、IL-1β和IL-10表达的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG 35-55)免疫诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE小鼠模型。将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:BMMSCs移植组、EAE组和正常组。采用免疫组化检测脑和脊髓的Iba1(离子钙结合衔接分子1)、IL-1β和IL-10的表达。结果 BMMSCs移植组神经功能缺损症状要轻于EAE组,BMMSCs移植组脑和脊髓的Iba1和IL-1β表达水平低于EAE组(P0.05),而BMMSCs移植组脑和脊髓的IL-10表达水平高于EAE组(P0.05)。结论 BMMSCs能改善EAE小鼠的症状,其作用机制之一可能是抑制了小胶质细胞的激活、抑制炎症因子IL-1β及促进抗炎因子IL-10的表达。     

载脂蛋白E拟肽对EAE小鼠的髓鞘和轴突损伤的影响

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统髓鞘脱失和轴突损伤的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)为抗原建立EAE模型。将40只雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组,即正常组、EAE组、正常治疗组和EAE治疗组,两个治疗组皮下注射ApoE拟肽。免疫组化法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)和神经丝轻链(NF-L)的表达。结果 EAE治疗组中脑和脊髓的MBP和NF-L的表达均高于EAE组(P<0.05)。结论 ApoE拟肽可能对EAE的髓鞘和轴突的损伤有保护作用。     

ApoE调节谷氨酸及其受体表达对视神经脊髓炎体外模型的作用研究

目的研究谷氨酸(Glu)及其受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)、载脂蛋白E(Apo E)在视神经脊髓炎(NMO)发病中的作用。方法取7～14 d大小的C57BL/6野生型(WT)小鼠及Apo E基因敲除(ApoE-/-)小鼠脊髓切片及视神经体外培养。用NMO-IgG及补体(HC)干预脊髓切片及视神经制成NMO体外模型实验组,设无干预的对照组。分别检测各组水通道蛋白4(AQP4)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达、培养液中谷氨酸浓度、各组NMDAR1、NMDAR2B蛋白表达。结果 (1)实验组脊髓和视神经组织的GFAP、AQP4表达显著少于对照组(P 0. 05),且Apo E-/-实验组比WT实验组GFAP、AQP4缺失更显著(P 0. 05);(2)实验组脊髓和视神经组织的NMDAR1、NMDAR2B表达水平明显高于对照组(P 0. 05),实验组间对比Apo E-/-组NMDAR2B表达显著高于WT组(P 0. 05);(3)各组间培养液谷氨酸浓度无显著差异性(P 0. 05)。结论 (1) NMDAR可能参与NMO致病,特别NMDAR2B可能通过诱导兴奋毒性作用参与NMO发病;(2) Apo E可能通过影响NMDAR活性间接对抗谷氨酸的神经毒性作用。     

载脂蛋白E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响

目的 探讨载脂蛋白(Apo)E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响.方法 40只C57BL/6J雌性小鼠随机分成EAE组、EAE治疗组、正常对照组、正常治疗组;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白制备的完全抗原诱导EAE模型小鼠.免疫诱导次日,EAE治疗组和正常治疗组小鼠每隔2d皮下注射ApoE拟肽,EAE组和正常对照组小鼠皮下注射等量的生理盐水.免疫诱导后各组每日进行神经功能缺损评分(NDS);35 d后用免疫组化检测各组小鼠脑脊髓CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达.结果 EAE治疗组NDS的峰值及终末评分显著低于EAE组(均P＜0.05).与正常对照组及正常治疗组比较,EAE组大脑、脑干和脊髓中CD4+T细胞数明显增高,大脑CD8+T细胞数明显增高(均P＜0.05).EAE治疗组小鼠大脑、脑干、脊髓组织CD4+T细胞表达显著低于EAE组(均P＜0.05);两组间CD8+T细胞表达水平的差异无统计学意义.结论 ApoE拟肽可抑制CD4+T细胞的表达,减轻免疫炎症反应,对EAE小鼠有神经保护作用;而对CD8+T细胞的表达无明显影响.     

他汀类药物对EAE小鼠RhoA表达的影响

目的探讨他汀类药物能否抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型RhoA蛋白表达及其对小鼠发病情况的影响。方法随机将雌性C57BL/6小鼠分为EAE组、他汀治疗组和佐剂组3组。EAE组和他汀治疗组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG_(35-55))免疫小鼠建立EAE模型,佐剂组以生理盐水替代MOG_(35-55)同样方法注射;他汀治疗组自免疫后第3天始按体质量10 nag/(kg·d)予阿托伐他汀灌胃。观察3组小鼠发病情况及病理变化并测定脑组织中RhoA蛋白表达。结果与佐剂组相比,EAE组小鼠脑组织中RhoA蛋白表达明显增多(P0.01)。他汀治疗组脑组织RhoA蛋白表达及临床神经功能评分均较EAE组下降(P0.01)。结论 EAE小鼠RhoA蛋白表达上调。他汀类药物可能通过抑制RhoA蛋白表达治疗EAE。     

2-BFI对EAE小鼠血脑屏障通透性和AQP4 mRNA表达的影响

目的观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠血脑屏障和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达的影响。方法 C57BL/6小鼠39只随机分为正常对照组、EAE组和2-BFI干预组。各组每日进行神经功能缺损评分;第20天进行病理学检查;伊文思蓝荧光定量方法检测血脑屏障通透性;电子显微镜观察血脑屏障的超微结构变化;Real-time PCR法测定AQP4 mRNA的表达水平。结果与EAE组比较,2-BFI干预组小鼠神经功能缺损及血脑屏障病理损伤减轻,AQP4 mRNA的表达水平明显降低,均差异有统计学意义。结论 2-BFI对EAE小鼠的神经保护作用与减少AQP4 mRNA的表达、减轻血脑屏障通透性有关。     

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨咪唑啉Ⅱ类受体(I2R)高选择性配体2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 C57BL/6小鼠30只,随机分成EAE组、2-BFI组和对照组,每组10只。EAE组及2-BFI组给予皮下注射抗原液诱导为EAE模型;2-BFI组同日起腹腔注射2-BFI共14 d。各组每日进行2次神经功能缺损评分;第19 d进行脊髓病理学检查,免疫组化法观察脊髓炎症细胞浸润、髓鞘脱失程度及GFAP表达。结果 2-BFI组神经功能缺损评分(4.17±3.65)明显低于EAE组(10.41±3.02)(P<0.01);脊髓病理评分(1.10±0.59)较EAE组(2.38±0.86)显著减少(P<0.01);GFAP阳性细胞数[(18.83±2.31)个/HP]明显多于EAE组[(12.25±2.66)个/HP](P<0.05)。结论 2-BFI能减缓小鼠EAE疾病发展,可能与促进中枢神经系统中GFAP的表达有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓中细胞色素C和凋亡诱导因子表达的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓中细胞色素C(CytC)和凋亡诱导因子(AIF)表达的变化。方法 C57BL/6小鼠12只随机分为EAE组和正常对照组。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白和完全弗氏佐剂混合抗原乳剂免疫C57BL/6小鼠制作EAE模型。每天2次记录各组小鼠体重和神经功能评分的变化。采用苏木精-伊红染色、髓鞘LFB染色、免疫组化染色,检测发病高峰期(免疫后第19天)小鼠脊髓的病理变化、髓鞘脱失程度、CytC和AIF的变化。结果与正常对照组比较,EAE组神经功能评分增加(P<0.01)、炎症细胞浸润增加(P<0.01)、脱髓鞘程度严重(P<0.01)、CytC和AIF表达均增加(P<0.01),而且与EAE的病情变化指标(最高症状评分、病理评分)均呈正相关关系。结论 EAE小鼠发病高峰期脊髓中CytC和AIF表达增加,提示EAE小鼠的病情变化与中枢神经系统的线粒体损伤有关。