不同来源引流熊胆粉的化学成分系统分析

熊胆粉中含有胆汁酸、胆红素、蛋白质、氨基酸、微量元素等多种成分,其中胆汁酸类是熊胆粉中含量最高且研究最多的活性成分,而非胆汁酸类成分目前却鲜有报道。因此,该研究对来源为四川、黑龙江、云南的熊胆粉中各化学成分进行系统的研究。通过采用微孔板分光光度计法测定胆红素、蛋白质,利用液相色谱质谱联用技术测定胆汁酸和氨基酸,利用电感耦合等离子体质谱仪测定微量元素。并采用相似度评价软件对不同来源的20批熊胆粉进行系统分析,表明不同来源熊胆粉中胆汁酸类成分相似度高(相似度系数为0.922~0.977),不存在明显差异。所测样本中牛磺熊去氧胆酸与牛磺鹅去氧胆酸是熊胆粉中含量最高的成分,为41%~59%,均符合现行卫生部质量标准。二者总含量在来源为黑龙江的熊胆粉中最高,对不同来源的熊胆粉有分类意义。此外,不同来源熊胆粉中胆红素、蛋白质、氨基酸、微量元素含量也存在着一定的差异。该研究发现不同来源熊胆粉主要化学成分较为相似,但胆汁酸、胆红素、蛋白质、氨基酸、微量元素对不同来源的样本有分类意义,该研究为市售熊胆粉的质量评价和控制提供了更加全面科学的依据。     

胆粉(汁)类药材的DNA指纹图谱鉴别方法研究

《中国药典》收载了猪胆粉、牛胆粉、蛇胆汁、羊胆、鹅胆粉、熊胆粉等药材。胆粉(汁)类药材在我国药用历史悠久,疗效明确。但其形态相似、多种药材缺乏专属性显微鉴别特征和化学特征,存在混伪风险,尤其是对正品中掺杂伪品的情况检出困难。控制胆粉类中药质量,保证临床疗效,解决胆粉类药材的真伪优劣鉴别问题是关键。STR分型技术是通过PCR扩增长度差异分型,比较鉴定生物个体的一种方法。该研究基于STR分型原理建立了一种简单快捷,可用于胆粉类药材及其掺杂样品的通用DNA指纹图谱鉴别方法,并收集猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、蛇、熊、鱼等原动物或胆粉样本,使用筛选获得的鉴别引物12S-L1091/12S-H1478和16S-L3428/16S-H3667扩增并进行STR分型获得DNA指纹图谱。结果各物种的STR指纹图谱不同,可进行物种鉴别,且DNA指纹图谱上能同时反映正品和伪品的信息,可鉴别正伪掺杂品。因此,通过2个引物的结合,完成了胆粉类药材及其正伪掺杂品的鉴别。此外,该研究建立的DNA指纹图谱鉴别方法也可用于其他动物药材的真伪鉴别和掺杂品检出。     

HPLC法测定猪胆粉中的牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸

目的建立HPLC-UV法同时测定猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸的含有量。方法猪胆粉甲醇提取液采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分析;流动相乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钠,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长200 nm。结果牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸分别在0.087 7~4.384 9μg(r=1.000 0)、0.257 8~8.594 6μg(r=1.000 0)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率在95.0%~105.0%之间,RSD均小于3.0%。结论该方法简单、可靠,适用于猪胆粉的质量控制。     

大麦苗粉营养成分分析及评价

目的对大麦苗粉的营养成分进行分析测定并评价其营养价值。方法成分分析采用化学分析法和色谱分析法进行测定。结果经测定:水分含量为9.8%、灰分含量为5.6%、蛋白质含量28.2%、脂肪含量为2.3%,每100g大麦苗粉含总黄酮、维生素B1、B2、B6、C、E、铁、钙、铜、镁、锌、钾的含量分别是36mg、52μg、244μg、175μg、14.9mg、6.94mg、42.1mg、469.4mg、3.5mg、38.4mg、22.7mg、986.9mg。表明大麦苗粉含有多种营养成分和微量元素,其中蛋白质、钙、钾、维生素C和维生素E的含量比较高。结论大麦苗营养成分丰富而且种类较为齐全,具有良好的开发价值,值得进一步开发。     

银杏花粉中核苷、氨基酸及无机元素的成分分析

目的 对银杏花粉中核苷类、氨基酸类及无机元素进行分析评价,为银杏花粉资源的综合利用提供科学依据。方法 采用UPLC-TQ/MS技术测定银杏花粉中核苷类和游离氨基酸类成分,采用ICP-AES测定银杏花粉中的无机元素的量。结果 测定了银杏花粉中甲硫氨酸、天冬氨酸等24种游离氨基酸,总量高达62.316 mg/g,游离的必需氨基酸苏氨酸、赖氨酸等共6.23 mg/g,其中天冬氨酸量高达17.11 mg/g,也检测到含有少量牛磺酸0.24 mg/g。核苷类成分分析表明,银杏花粉中含有16种核苷,其中以尿苷量最高为251.99μg/g,其他普遍较低。元素分析结果表明,银杏花粉中K的量最高26.301 mg/g,其次Ca、Fe、Mg量依次为7.076、2.545、5.361 mg/g。As、Cd等重金属元素未检测到。结论 基于核苷、氨基酸和矿物质元素的分析结果,银杏花粉可开发为氨基酸补充剂,为银杏花粉资源的开发利用提供科学依据。     

鸭,鹅,鸡内金化学成分比较研究

本文对鸭、鹅、鸡内金的淀粉酶和蛋白酶活力、游离氨基酸和水解氨基酸及微量元素含量进行测定。结果显示:鸭、鹅内金的淀粉酶活力高于鸡内金,鸭内金蛋白酶的活力高于鹅、鸡内金,三种内金的氨基酸和微量元素无明显差异。     

HPLC-ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量

目的 建立HPLC-ELSD法同时测定猪胆粉中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量测定方法.方法 应用Waters Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.2%甲酸溶液(80:20)为流动相,流速:1.0 mL·min-k柱温:40℃;检测器为ELSD,漂移管温度:85℃,载气为高纯氮气,流量:2.0 L·min-1.结果 猪去氧胆酸在0.5192μg～5.1920 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9994),平均加样回收率为97.5%,RSD=2.3%;鹅去氧胆酸在0.5012 μg～5.0120 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998),平均加样回收率为96.0%,RSD=1.6%.结论 该方法 简便准确,灵敏度高,可用于猪胆粉的质量控制.     

痰热清注射液中熊胆粉部分指纹图谱和成分测定

目的建立HPLC-UV法测定痰热清注射液中熊胆粉部分的指纹图谱并定量测定其中熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。方法 Waters Atlantis C18色谱柱(4.6mm×15cm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,测定波长为203nm。结果痰热清注射液中熊胆粉部分具4个共有峰,包括熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。13批样品的指纹图谱相似度较高。熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸分别在进样量6.532～685.6μg、2.605～208.4μg范围内线性关系良好(r均为0.999 9),平均回收率(n=9)分别为99.2%、100.4%,RSD分别为2.0%、2.5%。结论该方法可用于痰热清注射液中熊胆粉部分的质量控制。     

基于主成分分析和聚类分析的发酵虫草菌粉类产品氨基酸比较研究

目的分析不同发酵虫草菌粉类产品氨基酸的含量差异,结合聚类分析和主成分分析法评价发酵虫草菌粉类产品的质量。方法采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,色谱柱为LCA K06/Na离子柱,流动相为柠檬酸钠0.06 mol/L(pH 3.45)(A)-柠檬酸钠0.1 mol/L(pH 10.85)(B),梯度洗脱:0~3.5 min,100%A;3.5~11.0 min,85%A;11.0~17.0 min,80%A;17.0~23.5 min,67%A;23.5~28.0 min,20%A;28.0~45.0 min,100%B,体积流量为0.45 m L/min洗脱泵+0.25 m L/min衍生泵;检测波长440 nm(脯氨酸)+570 nm(其余氨基酸);温度为58~74℃梯度控温,进样50μL,外标法测定氨基酸含量。结果分别对3种发酵虫草菌粉类产品A、B、C中氨基酸进行含量测定,产品A总氨基酸质量分数为251.82~265.93 mg/g,产品B总氨基酸质量分数为279.67~333.40 mg/g,产品C总氨基酸质量分数为321.37~370.86 mg/g,样品各批次间一致性较好。产品A和产品B为同一原料药,氨基酸含量差异不明显,产品C中组氨酸和精氨酸含量与产品A和产品B存在较大差异。主成分分析筛选的前3个主成分的累积方差贡献率达到93.551%,包含了各样品中氨基酸含量的大部分信息。聚类分析将30批样品聚为2类,其中产品A和产品B聚为一类,产品C聚为一类,聚类分析结果与实际情况相符。变量聚类分析表明当氨基酸变量聚为5类时,随机选择其中的5个变量能够准确反映发酵虫草菌粉氨基酸的质量。结论通过氨基酸含量差异研究,能够有效区别不同发酵虫草菌粉类产品,结合主成分分析和聚类分析能够客观评价发酵虫草菌粉类产品的质量。     

基于1H-NMR结合LC-MS技术分析熊胆粉及常见胆类中药中的胆酸类成分

目的 建立基于核磁共振氢谱技术（¹H-NMR）结合液质联用技术（LC-MS）的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法 利用¹H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信号归属表征熊胆粉中胆酸类成分组成,以¹H-NMR图谱分段积分后峰面积为变量进行多元统计分析。利用LC-MS对熊胆粉及其他常见胆类中药中10个胆酸类成分（胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸）进行含量测定,并以含量为变量进行多元统计分析。结果 基于¹H-NMR图谱及多元统计分析发现胆酸类成分为胆类中药的主要成分,也是熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性成分。结合文献及对照品比对,从熊胆粉中初步鉴定出7个胆酸类成分。进一步结合LC-MS含量测定结果和多元统计分析验证熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性胆酸类成分为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸。结论 熊胆粉与其他常见胆类中药的胆酸类成分存在显著差异。与其他胆类中药相比,熊胆粉中熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸及其牛磺型结合胆酸含量较高。¹H-NMR技术具有对化学成分组全面、快速分析的优势,可与LC-MS检测相互补充,共同应用于中药复杂体系成分分析和代谢组学的深入研究。     

基于胆酸类成分的牛胆粉质量控制与掺伪检测研究

目的建立基于胆酸类成分的牛胆粉质量控制方法,对市售牛胆粉的质量进行评价,分析可能存在的摻伪情况。方法建立同时测定牛、羊、猪、鸡、鸭等动物胆粉中胆酸类成分含量的方法,对自制样品与企业收集样品分别进行研究,以自制样品为主要依据,考察牛胆粉与猪、羊等动物胆粉的差异及含量规律,评价企业收集样品的质量及可能存在的掺伪情况。结果建立了HPLC-ELSD法同时测定牛、羊、猪、鸡、鸭等动物胆粉中12种胆酸类成分含量的方法。分析23批自制动物胆粉的测定结果,明确了牛胆粉与其他动物胆粉中胆酸类成分的含量差异;分析23批企业收集牛胆粉样品的测定结果,发现了牛胆粉中可能掺杂羊胆粉、胆酸下脚料两种主要掺伪情况。23批企业收集样品中仅8批符合规定,合格率仅34.8%,品种质量亟须加强提升和监管。结论研究建立的方法可有效控制牛胆粉的质量,识别牛胆粉中可能存在的掺伪情况,为提高牛胆粉的质量标准及加强市场监管提供了参考和依据。     

猪胆粉及其中成药的特异性PCR鉴别方法

目的:建立一种适用于猪胆粉及其中成药的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,为复杂组分中动物源性成分的鉴定提供示范。方法:根据猪源性鉴别引物,建立PCR鉴别方法,优化反应体系,并对此方法进行考察和验证。利用建立的PCR鉴别方法,对20批自制猪胆粉药材,19批市售猪胆粉药材和22批含猪胆粉中成药的猪源性成分进行鉴别,将市售的猪胆粉药材和含猪胆粉中成药PCR扩增的阳性产物进行酶切验证和序列测定验证。结果:20批自制猪胆粉药材、猪胆粉对照药材均能扩出约212 bp的特异性鉴别条带,牛和羊参考品均无条带; 19批市售猪胆粉药材中仅5批扩出特异性鉴别条带; 22批含猪胆粉中成药中有10批检出猪源性成分;猪胆粉对照药材及市售猪胆粉药材PCR扩增的阳性产物经Mnl I酶切后均能产生约200 bp的条带;猪胆粉及其中成药中扩增产物序列与Gen Bank数据库中相似性最高的物种为Sus scrofa,一致性为99%,与猪的序列高度一致。结论:该文建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别猪胆粉及其中成药中的猪源性成分。     

复方鸡胆粉胶囊的研制及临床应用

目前在我国胆囊炎和胆石症发病率较高 ,且发病率有增高之势。胆道系统的感染与胆结石常互为因果。我们以鸡胆汁 (含鹅去氧胆酸较多 )与兔脑(主要含脑磷脂 ,卵磷脂等 )为原料研制成了复方鸡胆粉胶囊制剂。1　仪器与试药ＵＶ - 75 4可见紫外分光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) ,鹅去氧胆酸 (ＣＤＣＡ ,天津第三生化制药厂 ) ,硅胶Ｇ(青岛海洋化工厂 ) ,卵磷脂 (上海长城制药厂 ) ,利胆素 (山东医科大学药厂 ) ,复方鸡胆粉胶囊 (济南市中心医院 )。2　制备方法鸡胆粉 :取新鲜鸡胆汁过滤 ,浓缩 ,烘干 ,研细 ,过 6 0目筛。兔脑粉 :取新鲜兔脑制成…     

两种荔波产铁皮石斛多糖、氨基酸及微量元素含量分析

目的探索多糖、氨基酸、微量元素在荔波产两种铁皮石斛不同部位中的含量。方法应用硫酸-苯酚法测定多糖含量;酸水解-阳离子交换分离-茚三酮柱后衍生-外标法定性定量测定氨基酸种类及含量;原子吸收光谱法测定微量元素含量。结果两种铁皮石斛茎中的多糖含量在24.70%~28.99%之间,叶片多糖含量分别为12.94%和14.95%。氨基酸含量上茎分别为41.08mg/g和43.78 mg/g,下茎分别为23.33 mg/g和25.89 mg/g,叶片氨基酸含量最高,分别为92.32mg/g和96.96mg/g。两种铁皮石斛各部位均含有人体必需的7种微量元素K,Ca,Mg,Fe,Cu,Mn,Zn。结论荔波产两种铁皮石斛多糖含量茎中明显高于叶片,但在上下茎间差别不大;氨基酸在叶片中含量最高,下茎最低,但在相同部位差别不大;除Fe外,叶片中微量元素含量明显高于茎。     

FT-IR法定性鉴别熊胆粉等常见动物胆类药材

目的:建立熊胆粉与猪胆、牛胆、羊胆的快速定性鉴别方法。方法:采用FT-IR法测定熊胆粉、牛胆、猪胆和羊胆IR光谱,分析常见动物胆类药材的IR鉴别特征。结果:熊胆粉IR光谱特征为:1655cm-1和1545cm-1有酰胺基(-CO-NH-)双峰,1216cm-1和1048cm-1为-SO3H双强峰,且T1216cm-1/2930cm-1约为1.0;牛胆、猪胆和羊胆等动物胆类药材IR光谱不具备或同时具备以上3个特征。结论:FT-IR法定性鉴别熊胆粉与牛胆、猪胆和羊胆等其他动物胆类药材具有操作简单、分析时间短和鉴别特征明显等优点。     

天然熊胆,熊胆粉及其伪品的凝胶电泳鉴别研究

本文采用ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ两种电泳方法，分别对天然熊胆、熊胆粉及其伪品牛胆、猪胆进行了鉴别研究，结果表明它们在两种电泳图谱上均有明显差异，为熊胆及其伪品鉴别提供了新的方法。     

肉桂枝叶非挥发部分总多酚测定及其体外抗菌作用

目的测定肉桂枝叶非挥发部分总多酚的含有量及其体外抗菌作用。方法 95%乙醇索氏回流提取粗粉后,AB-8大孔树脂纯化富集总多酚,酒石酸亚铁比色法和福林酚比色法分别测定其含有量,二倍稀释法测定其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌的体外抗菌活性。结果两种方法所测得总多酚含有量分别为82.2 mg/g和90.5 mg/g,对4种实验菌都有较强的体外抑制作用,抗菌活性依次为大肠杆菌金黄色葡萄球菌肺炎链球菌≈绿脓杆菌。结论福林酚比色法更适合测定肉桂非挥发部分总多酚的含有量,而且该成分具有较强的体外抗菌作用。     

薄层扫描法测定藿胆片中鹅去氧胆酸的含量

目的:建立藿胆片中鹅去氧胆酸的含量测定方法.方法:采用氯仿提取,双波长薄层扫描法(λS=375 nm,λR=438nm)测定藿胆片中鹅去氧胆酸含量.结果:此法平均回收率为98.4%,RSD为2.5%;三批样品中鹅去氧胆酸的含量分别为每片7.637,7.837和7.565 mg.结论:此法稳定、可行,能较好的控制藿胆片质量.     

山药类中药的氨基酸和微量元素的分析

五种山药的水解氨基酸和微量元素测定结果表明,它们均含有较高量的精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、必需氨基酸及许多必需微量元素。其中河南怀山药含量高于其它山药。这为探索地道药材的内在质量提供一定的依据。     

发酵前后天龙粉水溶性活性物质含量对比研究

目的:比较中药天龙粉发酵前后水溶性活性物质的含量。方法:采用超声水提取法分别提取天龙粉发酵前后所含的水溶性活性成分,通过改良Lowry法测定其蛋白质含量、苯酚-硫酸法测定其多糖含量、定磷法测定其核酸含量。结果:天龙粉发酵前蛋白含量为68.5730mg/g,发酵后为130.6559mg/g;天龙粉发酵前多糖含量为6.5771mg/g,发酵后为13.4492mg/g;而天龙粉发酵前核酸含量为17.7146mg/g,发酵后为9.1373mg/g。结论:天龙粉发酵前的核酸含量较高,而发酵后的蛋白质和多糖含量较高。