酸性环境对慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的影响及其机制

目的探讨酸性环境对慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的影响及可能的作用机制。方法体内实验:将雄性SD大鼠随机分为对照组、肾功能衰竭组、血管钙化组和酸干预组,造模成功后采用von Kossa染色和邻甲酚酞络合酮比色法测定大鼠胸主动脉血管钙化情况。体外实验:分离培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),随机分为正常对照组、高磷组、酸干预组和抑制剂组(BMP信号通路抑制剂Noggin),采用茜素红染色和邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR和Western blot检测细胞BMP-2、Smad1、Runx2的表达情况。结果体内实验:成功制备了慢性肾功能衰竭大鼠血管钙化模型;与血管钙化组相比,酸干预组大鼠血管钙盐沉积明显减轻(P0.05)。体外实验:与正常对照组相比,高磷组细胞钙盐沉积明显增加(P0.05),ALP活性和Runx2表达均增高(P0.05);与高磷组相比,酸干预组细胞钙盐沉积减少(P0.05),ALP活性、Runx2、BMP-2和Smad1表达均降低(P0.05);与高磷组相比,抑制剂组细胞钙盐沉积和Runx2表达均降低(P0.05)。结论酸性环境可以抑制慢性肾功能衰竭大鼠血管中膜钙化的发生,其可能的机制之一是通过BMP-2信号通路抑制了VSMC成骨/成软骨样表型转化来实现的。     

吡格列酮通过Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用及其相关机制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸(β-GP)诱导大鼠VSMC钙化,建立钙化模型(即钙化组);同时以完全培养基培养大鼠VSMC为正常对照组,并分别以不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L)PIO干预,观察培养12d,用茜素红染色法检测细胞钙沉积并检测细胞外基质钙离子浓度来观察VSMC钙化程度。Western Blot检测大鼠VSMC的α平滑肌动蛋白(α-SMA)、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β)及核蛋白cyclin-D1的表达情况。选择合适的PIO浓度(20μmol/L)并以PPARγ拮抗剂GW9662(20μmol/L)干预,观察以上指标的变化。结果:(1)钙化组钙离子浓度较正常对照组明显增高(P0.05),而不同浓度PIO均可减轻VSMC细胞外基质的钙离子浓度(P0.05),同时钙化组茜素红染色较正常对照组明显,而20μmol/L PIO干预组茜素红染色较钙化组减轻最为明显;(2)钙化组大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2、cyclin-D1较正常对照组升高;20μmol/L PIO可显著下调钙化大鼠VSMC表达Runx2、β-catenin、p-GSK-3β、BMP2和cyclin-D1,并上调α-SMA的表达;(3)PPARγ拮抗剂GW9662可部分阻断PIO对钙化大鼠VSMC的干预作用。结论:PPARγ激动剂PIO可减轻β-GP诱导的大鼠VSMC的钙化,其作用机制与下调Wnt/β-catenin信号通路活性有关。     

γ干扰素对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究

目的探讨γ干扰素(IFNγ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响,为临床治疗血管钙化提供新的线索。方法大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、IFNγ干预组(在高磷培养基的基础上加入100 U/L重组大鼠IFNγ),刺激3 d后RT-PCR对各组细胞内核心结合因子α1(Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、Smad 1以及Smad 7的mRNA进行检测,刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色,钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与阴性对照组比较,高磷组及IFNγ干预组VSMCs均有钙盐沉积,ALP活性及Cbfα1的mRNA及蛋白表达均增高,BMP 2、Smad 1 mRNA表达也增高(均为P<0.05),与高磷组比较,IFNγ干预组VSMCs的钙盐沉积、ALP活性及Cbfα1 mRNA和蛋白表达均显著降低(均为P<0.05),BMP 2、Smad 1 mRNA表达也降低,而正常组和IFNγ干预组的VSMCs中Smad 7 mRNA表达均高于高磷组(均为P<0.05)。结论 IFNγ对高磷诱导的VSMCs钙化有抑制作用,其可能机制之一是通过抑制了VSMCs Cbfα1的表达,进而抑制了VSMCs的转分化来实现的。     

过氧化体增殖物激活型受体γ抑制转化生长因子β1诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用。方法体外培养大鼠主动脉VSMC,先分为正常对照组、不同浓度TGF-β1组(1、2、4、8μg/L),观察TGF-β1对VSMC的影响;再分为正常对照组、钙化组(TGF-β1 4μg/L)、罗格列酮(RSG,20μmol/L)组、钙化+罗格列酮(RSG,20μmol/L)组,观察PPARγ激动剂罗格列酮对VSMC钙化后的作用,对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红S染色检测钙化结节的形成情况,Western blot检测VSMC标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PPARγ、成骨样细胞标志物Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,TGF-β1处理后的VSMC钙盐沉积和ALP活性明显升高(P0.05),且TGF-β1浓度为4μg/L时作用最明显,成骨样细胞标志物Runx2表达明显升高(P0.05),同时平滑肌细胞标志物α-SMA表达减少(P0.05)。而加入罗格列酮后,VSMC的钙盐沉积和ALP活性明显降低(P0.05),α-SMA、PPARγ表达明显上升(P0.05),相反,Runx2的表达则明显受到抑制(P0.05)。结论 TGF-β1可以诱导VSMC向成骨样细胞分化和钙化,而PPARγ激动剂罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导下VSMC钙化的发生。     

细胞外酸碱环境对主动脉瓣膜间质细胞钙化的影响及相关机制研究

目的探究细胞外酸碱环境对主动脉瓣膜间质细胞钙化的影响及相关机制。方法主动脉瓣膜来源于2017年1—6月在第二军医大学附属长海医院心血管外科接受心移植手术的患者,采用二次胶原酶消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,采用细胞免疫荧光法和流式细胞术鉴定主动脉瓣膜间质细胞。将传代的主动脉瓣膜间质细胞随机分为A、B、C、D 4组,A组采用普通培养基培养,p H值为7.4,B、C、D组均采用普通培养基+钙化培养基培养,p H值分别为7.1、7.4、7.7。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx2)和碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达情况,采用Western Blot法检测4组细胞BMP-2、Runx2蛋白表达情况,采用比色法检测4组细胞ALP活性,采用茜素红染色观察4组细胞钙化结节情况。结果 (1)细胞免疫荧光法检测结果显示,波形蛋白(Vimentin)阳性率接近100%。流式细胞术检测结果显示,细胞CD31阳性率为1.17%。(2)将A组作为对照,C、D组细胞BMP-2、Runx2和ALP mRNA相对表达量高于B组,D组细胞BMP-2、Runx2和ALP mRNA相对表达量高于C组(P0.05)。(3)B、C、D组细胞BMP-2、Runx2蛋白相对表达量高于A组,C、D组细胞BMP-2、Runx2蛋白相对表达量高于B组,D组细胞BMP-2、Runx2蛋白相对表达量高于C组(P0.05)。(4)B、C、D组细胞ALP活性高于A组,C、D组细胞ALP活性高于B组,D组细胞ALP活性高于C组(P0.05)。(5)茜素红染色结果显示,A组细胞钙化结节较少,B、C、D组细胞钙化结节逐渐增多;与C组相比,B组钙化结节明显减少,D组钙化结节明显增多。结论细胞外酸性环境可抑制主动脉瓣膜间质细胞钙化,碱性环境则可促进主动脉瓣膜间质细胞钙化,其机制可能与细胞外酸碱环境影响BMP-2信号通路有关。     

姜黄素对维生素D3和尼古丁诱导血管钙化大鼠血管中组织蛋白酶D表达的影响

目的研究组织蛋白酶D(CTSD)在大鼠动脉钙化模型中的表达以及姜黄素对其表达的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分成3组,每组10只,即对照组、钙化组和干预组。对照组大鼠给予等量生理盐水处理,钙化组大鼠用维生素D3和尼古丁处理,干预组大鼠在钙化组处理的基础上加用姜黄素干预。用von Kossa染色检测血管钙化,试剂盒检测血管钙含量和碱性磷酸酶活性,Western blot检测骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Runx2和CTSD的蛋白表达,用免疫组织化学染色观察CTSD在血管中的表达及分布。结果维生素D3和尼古丁能够诱导经典大鼠钙化模型,von Kossa染色结果显示钙化组大鼠胸主动脉有大量黑色颗粒沉积,血管钙含量和碱性磷酸酶活性升高,Western blot检测结果显示BMP-2和Runx2表达显著上调;使用姜黄素干预后,与钙化组相比,大鼠胸主动脉钙化程度明显减轻,血管钙含量和碱性磷酸酶活性下降,BMP-2和Runx2表达下调。免疫组织化学染色结果显示钙化组CTSD表达上调且大量分布在细胞外基质中,姜黄素能够显著下调CTSD的表达并减少其在细胞外基质中的分布。结论姜黄素具有抑制血管钙化的作用,可能与其能够减少CTSD在细胞外基质中的表达有关。     

高磷对大鼠胸主动脉血管环中骨形成蛋白2表达的影响

目的:探讨骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2,BMP-2)在高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化中的作用。方法:选取8~10周龄健康雄性SD大鼠,体外培养大鼠胸主动脉血管环,血管环按随机数字表法随机分为2组:正常对照组和高磷组。血管环培养7d和14d后,采用von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测大鼠胸主动脉血管环钙化情况;免疫组织化学方法检测血管环BMP-2的表达。体外采用组织块贴壁法培养原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞,利用10mmol/Lβ-甘油磷酸制备血管平滑肌细胞钙化模型,细胞随机分为2组:正常对照组、高磷组(10mmol/Lβ-甘油磷酸)。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,RT-PCR和Western blot方法检测细胞培养7d和14d的BMP-2mRNA及蛋白表达,并观察短时间内不同时间点BMP-2蛋白表达情况。结果:体外血管环培养7d、14d后,与正常对照组相比,高磷组钙含量明显增加(P0.05);与7d高磷组血管环钙含量相比,14d高磷组血管环钙含量明显增加(P0.05)。免疫组织化学结果显示,与正常对照组相比,高磷组BMP-2表达增加(P0.05);与7d高磷组相比,14d高磷组血管环钙含量明显增加(P0.05)。细胞培养7d、14d后,与正常对照组相比,高磷组钙盐沉积及钙含量明显增高(P0.05);RTPCR和Western Blot显示,与正常对照组相比,高磷组BMP-2mRNA及蛋白表达增加。进一步动态观察BMP-2蛋白的表达变化,结果显示正常对照组及高磷组BMP-2蛋白表达随时间延长呈增强趋势(P0.05)。结论:BMP-2可能参与了高磷诱导的血管钙化的发生发展。     

自噬在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中的作用研究

目的:探讨自噬在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化过程中的作用。方法:采用磷酸盐(3.2 mmol/L Pi,即高磷状态)建立大鼠VSMC钙化模型。实验分为三组:对照组、钙化组(分为3个亚组:3.2 mmol/L Pi 4d组、3.2 mmol/L Pi 6d组、3.2 mmol/L Pi 8d组);钙化+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(3.2mmol/L Pi 8 d+5 mmol/L 3-MA)。分别通过茜素红S染色法和邻甲酚肽络合酮比色法检测各组细胞钙结节形成及钙含量;蛋白免疫印迹法检测各组细胞转录因子蛋白(Runx2)、α-肌动蛋白(α-SMA)和自噬相关蛋白—膜型微管蛋白1轻链3β(LC3Ⅱ)蛋白表达量。透射电子显微镜观察VSMC内自噬小体形成情况。免疫荧光显微镜下观察VSMC中LC3和Runx2定位表达。结果:与对照组相比,3.2 mmol/L Pi 8 d组钙结节、钙含量、Runx2和LC3Ⅱ蛋白表达量及自噬小体均显著增高,α-SMA蛋白表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与3.2 mmol/L Pi 8 d组相比,钙化+3-MA组细胞钙含量增多,LC3荧光分布量降低,Runx2阳性细胞数增多,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:自噬在磷酸盐诱导的VSMC钙化过程中具有保护作用。     

吡格列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的　探讨吡格列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制。方法　利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备钙化血管平滑肌细胞模型,予不同浓度（10、50、100　μmol/L）吡格咧酮干预。用Von　Kossa　染色、茜素红S染色测定钙含量以及碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞钙化程度。采用流式细胞术及Tunel法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR及Western　Blot检测各组细胞GRP78、Caspase-12和Runx2的mRNA及蛋白表达。结果　钙化组其钙含量、ALP活性较对照组细胞增多（P<0.05）,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地减轻钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量和ALP活性（P<0.05）;钙化组其细胞凋亡率较对照组明显升高,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地减轻钙化大鼠血管平滑肌细胞凋亡率（P<0.05）;钙化组GRP78、Caspase-12和Runx2　的mRNA及蛋白表达明显升高,而不同浓度吡格列酮呈剂量依赖性地下调钙化大鼠血管平滑肌细胞GRP78、Caspase-12和Runx2的mRNA及蛋白表达（P<0.05）。结论　吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径作用可减轻β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与GRP78、Caspase-12及Runx2表达下调有关。     

内质网应激介导了高糖引起的血管平滑肌细胞钙化

目的探讨内质网应激是否介导了高糖引起的血管平滑肌细胞(VSMC)钙化。方法体外高糖(35μmol/L D-葡萄糖)处理VSMC模拟糖尿病环境,观察高糖是否引起VSMC内质网应激反应和凋亡,探索高糖是否引起VSMC表型转化(收缩型转变为成骨样细胞),观察内质网应激诱导剂和抑制剂对VSMC钙化的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性、钙沉积和骨分化转录因子(Runx2和Osterix)通过比色法、O-cresolphthalein法和Western blot测定。结果应用35μmol/L D-葡萄糖分别处理VSMC不同时间,可以上调VSMC内质网应激标志蛋白表达、ALP活性、钙沉积和骨分化标志蛋白;然而,4-PBA预处理抑制VSMC内质网应激反应的同时,也能阻断高糖引起的VSMC钙化,表现为ALP活性、钙沉积和骨分化标志蛋白下降。结论高糖可以激活VSMC的内质网应激和凋亡,进而促VSMC钙化的发生,提示可能内质网应激介导了此激活过程。     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法

目的 对神经母细胞瘤(NB)进行体外培养，探讨神经母细胞瘤(NB)体外建系的方法。方法 NB患儿新鲜手术标本，采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系；用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化；从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定，证实所培养细胞是否为NB细胞。结果 两种细胞培养法均可培养出NB细胞，纯化后可得形态均一的细胞系。结论 可采用适当的细胞培养方法建立神经母细胞瘤的体外细胞系。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的探讨趋化因子配体16（CXCL16）对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响。方法取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加入50、1013、200ng／ml的重组人CXCL16（rhCXCL16）和抗CXCL16抗体处理4h,以不加rhCLCL16作为对照。采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果100ng／ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0．264±0．021、（91．4±8．6）％、1．246±0．216、1．361±0．276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的（20．6±3．2）％、0．259±0．013、0．199±0．008（P〈0．01）,对细胞的增殖不影响;2130ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到（92．1±6．3）％、1．511±0．174、1．600±0．208（P〈0．05）。结论CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的 探讨趋化因子配体16(CXCL16)对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响.方法 取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加人50、100、200 ng/ml的重组人CXCL16(rhCXCL16)和抗CXCL16 抗体处理4 h,以不加rhCLCL16作为对照.采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力.结果 100 ng/ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0.264±0.021、(91.4±8.6)%、1.246±0.216、1.361±0.276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的(20.6±3.2)%、0.259±0.013、0.199±0.1308(P<0.01),对细胞的增殖不影响;200ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到(92.1±6.3)%、1.511±0.174、1.600±0.20s(P<0.05).结论 CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性.     

膀胱癌细胞凋亡和细胞增殖的表达及意义

目的 观察膀胱癌细胞凋亡与细胞增殖的表达,探讨细胞凋亡指数和细胞增殖指数的比值(AI/PI)与膀胱癌病理分级、分期及预后的关系。方法 利用原位末端标记技术(TUNEL),增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,观察48例膀胱癌患者细胞凋亡与细胞增殖的表达。结果AI/PI随肿瘤病理分级和分期升高而增高,各分级和分期的AI/PI比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AI/PI>0.01者的生存时间比AI/PI<0.01者明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论AI/PI可作为判断肿瘤恶性程度及预后的重要指标。     

普罗布考对糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞功能的影响

目的探讨普罗布考对糖尿病鼠脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）功能的影响。方法体外分离培养ADSC,应用流式细胞术对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。将ADSC分为：①正常ADSC对照组;②正常ADSC+普罗布考组;③糖尿病ADSC对照组;④糖尿病ADSC+普罗布考组;⑤正常ADSC+高糖（30mmol/L）组;⑥正常ADSC+高糖+普罗布考组。应用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况。应用ELISA和实时定量PCR检测各组细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）蛋白和mRNA表达水平。应用二氯醋酸荧光素探针检测各组细胞活性氧（ROS）含量。结果ADSC表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;与正常ADSC对照组相比,糖尿病ADSC增殖能力和迁移能力下降,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平降低。与糖尿病ADSC对照组相比,糖尿病ADSC+普罗布考组增殖能力和迁移能力增加,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平上升。结论糖尿病能损伤ADSC的生物学特性。普罗布考对糖尿病鼠ADSC增殖、迁移和分泌能力具有保护作用。     

Determination of growth fraction and cell density to evaluate the potential growth of human oligodendroglial and astrocytic tumours

The object of this work was Purpose: to develop a methodology that enables net tumour growth, a balance between actual tumour growth and tumour cell loss, to be approximately evaluated. Methods: The methodology proposed relies on detecting the growth fraction immunohistochemically by means of MIB-1 antibody labelling combined with cell density determination, carried out on 5-μm-thick Feulgen-stained histological sections with computer-assisted microscopy. The series investigated included 25 oligodendrogliomas (OLG-II), 9 anaplastic oligodendrogliomas (OLG-III), 13 astrocytomas (AST), 14 anaplastic astrocytomas (ANA) and 8 mixed oligoastrocytomas (OLG-AST). Results: The results show that the biological characteristics of some cases were in total accordance with their histopathological diagnoses. This was the case for the “weakly proliferating weakly dense” OLG-II and AST-II tumours, and for the “highly proliferating highly dense” OLG-III and AST-III ones. In contrast, the biological characteristics of some cases seemed to contradict the histopathological case labels. This was the case for the “highly proliferating highly dense” OLG-II and AST-II tumours, the biological aggressiveness of which would be undervalued on the basis of the morphology-based grading system alone, and also for the “weakly proliferating weakly dense” OLG-III and AST-III tumours, the aggressiveness of which would be overvalued. Conclusions: Combining the determinations of the MIB-1 and the cell density variables appears to be satisfactory in terms of the cell kinetic characterization of glial tumours as a complement to the prognostic information given by a morphology-based grading system alone. Received: 6 January 1998 / Accepted: 3 April 1998     

槐耳清膏对结肠癌细胞生长和迁移的影响及其作用机制

目的中药槐耳清膏具有抗肿瘤效应,但其对结肠癌的作用及机制尚不清楚。本研究旨在探讨槐耳清膏对人结肠癌细胞生长和迁移的影响及作用机制。 方法体外培养人结肠癌细胞系HCT116,采用MTT法检测槐耳清膏对肿瘤细胞生长的抑制作用;采用Boyden趋化小室检测槐耳清膏对肿瘤细胞迁移能力的影响;采用荧光定量PCR法检测药物对MMP-9表达的影响;应用流式细胞技术检测药物对细胞凋亡和细胞周期的影响。 结果槐耳清膏对HCT116细胞生长有明显的抑制作用,该抑制作用具有药物剂量和时间依赖性。与细胞共培养96小时后,槐耳淸膏的抑制作用最强;与对照组相比,10 mg/mL、20 mg/mL和30 mg/mL槐耳淸膏对肿瘤细胞的抑制作用分别为25%(P＝0.025),42%(P＝0.032)和67%(P＝0.018)。槐耳清膏能明显抑制肿瘤细胞的迁移,11 mg/mL药物的抑制率为63%(P＝0.01);槐耳清膏(8mg/mL和11mg/mL)处理后的肿瘤细胞中MMP-9的表达量下降(2.73±0.32 vs 4.8±0.36,P＝0.02;1.46±0.25 vs 4.8±0.36,P＝0.004);槐耳清膏可阻滞细胞停留在S期,但对细胞凋亡无明显影响。 结论体外试验证实槐耳清膏对结肠癌细胞的生长及迁移能力具有抑制作用,其作用机制可能是阻滞细胞停留在S期和下调MMP-9的表达。     

改良的乳猪肝细胞微载体粘附培养方法

目的改进常用的肝细胞手工震荡微载体粘附培养技术,提高肝细胞粘附率.方法用磁力悬浮培养容器使肝细胞轻度聚集,然后加入微载体Cytodex-3培养,在控制低转速的情况下使肝细胞更易粘附在微载体上.结果磁力搅拌粘附培养的肝细胞粘附率高(90.3%±7.7%)且较稳定(变异系数8.6%),明显优于手工震荡粘附培养(粘附率69.5%±18.3%,变异系数26.4%,P＜0.005);前2周内的白蛋白合成功能亦强于手工震荡粘附培养(P＜0.05).结论磁力搅拌粘附培养肝细胞粘附率高、重复性强、稳定性好、操作方便,且减少了肝细胞受污染的机会.     

A comprehensive meta‐analysis of stem cell therapy for chronic angina

Background

A substantial proportion of patients with coronary artery disease do not achieve complete revascularization and continue to experience refractory angina despite optimal medical therapy. Recently, stem cell therapy has emerged as a potential therapeutic option for these patients. However, findings of individual trials have been scrutinized because of their small sample sizes and lack of statistical power. Therefore, we conducted an updated comprehensive meta‐analysis of available randomized controlled trials (RCTs) with the largest sample size ever reported on this subject.

Hypothesis

In patients with chronic angina stem cell therapy improves clinical outcomes.

Methods

Scientific databases and websites were searched for RCTs. Data were independently collected by 2 investigators, and disagreements were resolved by consensus. Data from 10 trials including 658 patients were analyzed.

Results

Stem cell therapy improved Canadian Cardiovascular Society angina class (risk ratio: 1.53, 95% CI: 1.09 to 2.15, P = 0.013), exercise capacity (standardized mean difference [SMD]: 0.56, 95% CI: 0.23 to 0.88, P = 0.001), and left ventricular ejection fraction (SMD: 0.63, 95% CI: 0.27 to 1.00, P = 0.001) compared with placebo. It also decreased anginal episodes (SMD: –1.21, 95% CI: –2.40 to ?0.02, P = 0.045) and myocardial perfusion defects (SMD: –0.70, 95% CI: –1.11 to ?0.29, P = 0.001). However, no improvements in all‐cause mortality were observed after a relatively short follow‐up.

Conclusions

In patients with chronic angina on optimal medical therapy, stem cell therapy improves symptoms, exercise capacity, and left ventricular ejection fraction. These findings warrant confirmation using larger trials.