补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及水通道蛋白表达的影响

目的观察补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及口腔唾液腺水通道蛋白5(AQP5)、结肠AQP4、肾脏AQP2基因表达的影响,分析阐明盐炙缓和补骨脂毒副作用的机制。方法采用sc氢化可的松的方法复制大鼠肾阳虚模型,以化学试剂法测定大鼠血清中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)的量,荧光定量PCR(q RT-PCR)法测定口腔唾液腺AQP5、结肠AQP4、肾脏AQP2 m RNA的表达。结果与模型组比较,补骨脂生品和盐炙品组大鼠血清中的ALT、AST量显著升高,Alb量显著降低(P0.05);补骨脂盐炙品组ALT、AST水平低于生品组;各给药组BUN及Scr水平显著高于模型组(P0.05)。q RT-PCR结果显示,与对照组比较,模型组大鼠AQP2、AQP4 m RNA表达明显降低(P0.05),AQP5的m RNA表达明显增加(P0.05);与模型组比较,补骨脂生品组大鼠AQP4 m RNA表达显著升高(P0.05),AQP5 m RNA表达显著降低(P0.05);与补骨脂生品组比较,补骨脂盐炙品组AQP2、AQP5 m RNA表达明显升高(P0.05),AQP4 m RNA表达明显降低(P0.05)。结论补骨脂盐炙后可缓解药物对肾阳虚大鼠肝肾功能的副作用;同时缓解生品的燥性,盐炙对药物燥性的缓解作用可能与其对体内AQP的基因表达调控有关。     

补骨脂盐炙对实验动物止泻作用影响的研究

目的：考察补骨脂盐炙前后止泻作用的差异,为临床治疗脾肾阳虚所致泄泻提供理论依据。方法：以补骨脂生品、水炙品、盐炙品醇水双提物分别灌胃给药,观察对番泻叶所致急性腹泻小鼠排便点数,大黄造成脾虚腹泻小鼠肠推进率和胃动素含量的影响。结果：补骨脂盐炙品10g/kg剂量能减少急性小鼠腹泻的稀便点数,15g/kg能抑制脾虚小鼠肠推进;水炙品和盐炙品均能促进胃动素的分泌。结论：补骨脂盐炙品对急性以及脾虚腹泻治疗作用优于生品及水炙品;盐炙后止泻作用增强可能与抑制胃肠运动、促进胃动素分泌有关。     

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的补骨脂盐炙前后化学成分变化研究

目的:探究补骨脂盐炙前后成分变化,从化学角度阐释补骨脂盐炙后缓和其“性本大燥毒”的机制。方法:采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)监测补骨脂炮制前后成分变化,结合Markerlynx软件分析。结果:补骨脂盐炙前后成分差异显著,盐炙品中补骨脂素(psoralen)、异补骨脂素(isopsoralen)、补骨脂二氢黄酮(bavachin)、补骨脂异黄酮(corylin)、异补骨脂查尔酮(isobavachalcone)、补骨脂查尔酮(bavachalcone)含量明显升高,补骨脂色酚酮(bavachromanol)、补骨脂酚(bakuchiol)含量明显下降。结论:补骨脂炮制前后成分变化是补骨脂盐炙后增效减毒和药性变化的物质基础。通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析盐炙前后指纹图谱的差异,得到潜在的化学标记物,鉴定为补骨脂二氢黄酮甲醚(bavachinin)、补骨脂查尔酮(bavachalcone)及补骨脂二氢黄酮(bavachin),可做为区分生品与炮制品的指标成分。本实验的研究成果对于研究补骨脂盐炙的炮制原理具有重要意义,同时也为补骨脂盐炙品药效物质基础的阐明提供了重要依据。     

补骨脂盐炙对肾阳虚、脾虚模型动物燥性影响研究

目的:探讨补骨脂盐炙对肾阳虚、脾虚模型动物燥性的影响。方法:以主要脏器指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K`+-ATP酶含量为评价指标,观察不同剂量补骨脂生品和盐炙品对氢化可的松所致肾阳虚模型大鼠及大黄所致脾虚腹泻模型大鼠燥性的影响。结果:不同剂量补骨脂生品和盐炙品对肝指数、肾指数、胸腺指数、血清cAMP/cGMP、TNF-α、Na~+-K~+-ATP酶均有显著性影响(P0.05);且补骨脂高剂量组盐炙前后功效比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:补骨脂盐炙后可缓和燥性,作用强度与剂量相关。     

基于功效评价探讨补骨脂丸组方及盐炙用药的合理性

目的 探讨盐补骨脂、盐小茴香组成的补骨脂丸和3种模拟补骨丸（盐补骨脂+生小茴香、生补骨脂+盐小茴香、生补骨脂+生小茴香）对脾肾阳虚泄泻大鼠的干预作用,从而确证药物盐炙组成补骨脂丸的合理性。方法 将SD大鼠随机分为9组,分别为对照组、模型组、阳性药参苓白术丸组、盐补骨脂组、生补骨脂组、补骨脂丸组及3种模拟补骨脂丸组。采用氢化可的松和番泻叶的复合造模法制备脾肾阳虚泄泻大鼠模型,于给药结束后测定各组大鼠的胸腺、脾脏、肾脏、肾上腺和睾丸脏器指数,观察相应脏器病理变化,并通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中胃动素和睾酮的水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠摄食量减少,体质量减轻;胸腺、脾脏、肾脏、肾上腺和睾丸脏器指数均出现不同程度的下降;镜下观察到上述脏器均出现明显病变;胃动素水平呈上升趋势变化,睾酮水平显著降低。给予盐补骨脂、生补骨脂、补骨脂丸和3种模拟补骨脂丸后,上述症状和指标均得到不同程度的改善,且补骨脂丸的作用效果整体上优于补骨脂单用以及3种模拟补骨脂丸。结论 补骨脂丸温肾助阳、暖脾止泻的作用优于补骨脂单用,且盐炙后配伍使用止泻作用更佳。     

补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的补骨脂提取物,检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量,并用MTT法检测细胞增殖。结果补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及其增殖,最佳浓度为2.0×10-3mg/mL。结论补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均可促进成骨细胞分化、增殖。     

基于雷公法结合盐炙法对补骨脂的炮制及肝毒性评价

目的 基于雷公法结合盐炙法对补骨脂进行炮制减毒并评价补骨脂炮制前后的肝毒性变化。方法 建立高效液相色谱法同时测定补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂乙素和补骨脂酚6个指标成分的含量;选取醇浓度、醇浸时间和蒸制时间为考察因素,以指标成分含量下降率的综合加权评分为指标,正交试验优化炮制工艺,并通过小鼠肝毒性实验评价补骨脂炮制前后的肝毒性。结果 补骨脂最佳炮制工艺,按《中国药典》2020年版盐炙法制备盐补骨脂,取盐补骨脂适量,加入5倍量80%乙醇浸泡24 h,倒出乙醇并用蒸馏水洗净,加入5倍量蒸馏水,浸泡12 h,倒出蒸馏水并洗净,置蒸锅内隔水蒸4 h,取出晾干;由该法炮制所得的补骨脂炮制品中毒性成分含量明显下降,小鼠肝毒性显著降低。结论 该炮制方法可明显降低补骨脂的肝毒性,为临床合理炮制补骨脂提供参考。     

高良姜的盐炙工艺及其盐炙前后HPLC指纹图谱对比研究

目的：优选盐炙高良姜的炮制工艺,并对比研究其盐炙前后的HPLC指纹图谱变化。方法：以外观性状、含水量、水溶性浸出物百分含量及高良姜素含量为评价指标,采用单因素试验,以切片厚度、炒制温度和炒制时间为指标,设计正交试验优选盐炙高良姜的炮制工艺。采用HPLC法测定盐炙前后高良姜样品的高良姜素含量和HPLC指纹图谱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A版）”进行相似度评价,并应用SIMCA＿P+12.0软件进行主成分分析。结果:优选的盐炙高良姜最佳炮制工艺为用5%食盐水浸润至药透汁尽,然后120℃炒制6 min;盐炙后的高良姜样品中高良姜素含量与生品比较,差异无统计学意义（P>0.05）;盐炙后的高良姜样品中水溶性浸出物百分含量均高于生品（P<0.01）;盐炙后的高良姜化学成分种类少于生品;虽然它们的指纹图谱相似度较高,但以其指纹图谱峰面积为变量进行OPLS-DA分析可以快速地将盐炙前后的高良姜样品区别开。结论：优选的盐炙高良姜炮制工艺稳定可行,可为生产盐炙高良姜饮片提供实验依据;盐炙前后的高良姜饮片内在化学成分发生了变化,这从化学成分的角度揭示了盐炙高良姜的炮制机理...     

基于盐炙前后成分煎出差异与止泻作用相关性探讨补骨脂丸增效机制

目的 探讨盐炙对补骨脂丸中代表性成分煎出的影响,以及成分与止泻药效的相关性。方法 采用HPLC-MS法测定补骨脂丸及3种补骨脂丸模拟品水煎液中13种代表性成分的含量差异,并结合不同给药组对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的胃肠激素和下丘脑-垂体-肾上腺轴相关指标的影响,采用灰色关联分析法,对代表性成分与止泻药效进行相关性分析,寻找药效贡献较大成分。结果 与3种模拟品（模拟I～III号）相比,补骨脂丸水煎液中黄酮类成分如芦丁、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、异补骨脂查耳酮及补骨脂二氢黄酮甲醚的含量较高,挥发油类成分如茴香醛、反式茴香脑及补骨脂酚的含量较低;与模拟II、III号相比,香豆素类成分如补骨脂素及异补骨脂素的含量较低。不同成分对止泻药效的贡献具有差异,黄酮类和挥发油类成分与止泻药效的关联度较高,香豆素类成分（如补骨脂素与异补骨脂素）与止泻药效的关联度较低。结论 补骨脂、小茴香盐炙后组成补骨脂丸,能促进黄酮类成分煎出,抑制挥发油类、香豆素类成分煎出,这可能是盐炙增强其止泻作用的关键环节之一。     

补骨脂的炮制研究：盐炙前后化学成分的比较

补骨脂传统应用均需盐炙。本文报道炮制前后补骨脂所含活性成分香豆精、黄酮化合物及挥发油等的变化。结果显示补骨脂所含成分在炮制前后无质的差别,而在量的方面略有差异;表明盐炙对补骨脂化学成分影响不大。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

清络通痹颗粒含药血清对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响

目的：观察清络通痹颗粒（QLTBG）含药血清对体外培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶（AKP）活性及破骨细胞增殖的影响。方法：（1）取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞，取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞。（2）MTT法检测成骨细胞、破骨细胞增殖，偶联重氮盐法测定成骨细胞AKP活性。结果：QLT以7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对成骨细胞的增殖能力有明显增强作用，能明显增加AKP活性；QLT以3．6，7．2，14．4g／kg给药的大鼠含药血清对破骨细胞均有明显的抑制作用。结论：清络通痹颗粒含药血清可促进成骨细胞增殖、增强成骨细胞的AKP活性，抑制破骨细胞增殖。     

不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响

目的：探讨复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响及其作用机制。方法：取2月龄SD雄性大鼠12只,随机分为2组,每组6只,分别给予20 g.kg-1复元活血汤生药灌胃（含药血清组）和同等量的生理盐水灌胃（空白血清组）,每天2次,14 d后腹主动脉采血。取新生SD大鼠2只,采用二次酶消化法消化幼鼠颅盖骨获取成骨细胞,采用血清药理学方法,分别采用含胎牛血清的培养液（胎牛血清组）、含复元活血汤生药灌胃大鼠血清的培养液（含药血清组）和含生理盐水灌胃大鼠血清的培养液（空白血清组）培养成骨细胞。分期测定体外培养的大鼠成骨细胞的增殖功能、分化功能、矿化功能及碱性磷酸酶含量。结果：①成骨细胞增殖功能。时间效应F=381.260,P=0.000;组别效应F=1 071.170,P=0.000;时间与组别交互效应F=22.500,P=0.000。②成骨细胞分化功能。时间效应F=159.950,P=0.000;组别效应F=62.120,P=0.000;时间与组别交互效应F=2.400,P=0.029。③成骨细胞矿化功能。时间效应F=115.500,P=0.000;组别效应F=4.370,P=0.082;时间与组别交互效应F=56.300,P=0.000。④成骨细胞碱性磷酸酶含量。时间效应F=2 175.670,P=0.000;组别效应F=1 201.370,P=0.000;时间与组别交互效应F=428.870,P=0.000。结论：复元活血汤能明显地促成骨细胞的增殖和分化功能,其作用可能与成骨细胞合成和分泌碱性磷酸酶有关。     

含淫羊藿总黄酮大鼠血清对成骨细胞发育的影响

目的:研究含淫羊藿总黄酮大鼠血清对体外培养成骨细胞(ROB)增殖和分化的影响。方法:将淫羊藿总黄酮(TFE)以0.1,1,10,100μg.mL^-14种质量浓度、含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%3种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖和分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析,细胞分化是于培养第4,8,12,20天分别检测碱性磷酸酶活性(比色法)、骨钙素分泌量(放射免疫法)、钙盐沉积量(比色法)和矿化结节(组织化学法)等。结果:TFE 4种质量浓度均对ROB细胞增殖和分化无明显影响,2.5%和5%SRAT则表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、矿化结节数和钙盐沉积量。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有抗骨质疏松的活性。     

液质联用技术联合化学计量法分析比较续断盐制前后质量差异

目的 通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）鉴定续断DipsaciRadix盐制前后化学成分,并寻找其差异性成分。方法 液相采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5.0μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 m L/min,检测波长215 nm。质谱采用电喷雾离子源负离子模式采集样品数据,扫描范围为m/z100～2000。根据质谱信息,结合碎片裂解规律,与数据库、文献及对照品的比对对检测到的化学成分进行综合鉴定;通过主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）对比分析续断盐制前后的质量差异。结果 共鉴定和推测出生续断与盐续断中54种共有化学成分,主要包括皂苷类、环烯醚萜类和酚酸类化合物等。通过多元统计分析表明,生续断和盐续断在PCA模型中能清晰地分为2类,OPLS-DA模型筛...     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

补骨脂和肉豆蔻炮制对脾肾阳虚泄泻大鼠能量代谢的影响

目的从能量代谢角度比较二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠的调控效应。方法采用腺嘌呤灌胃,饮食失节,服冰番泻叶水浸剂方法复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型,给药二神丸进行治疗性实验,酶标仪法检测大鼠肝组织中Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase以及乳酸脱氢酶(LDH)活性变化;比色法检测肝组织中琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化。结果与正常对照组比较,模型组肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性显著降低(P0.01);LDH活性显著升高(P0.01)。与模型组相比较,二神丸Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性明显升高,LDH活性明显降低,均具有极显著性差异(P0.01);与二神丸Ⅰ组(补骨脂生品+肉豆蔻生品)相比较,二神丸Ⅳ组Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性均高于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P0.05);LDH低于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P0.05)。结论经盐炙补骨脂和麸煨肉豆蔻组方的二神丸改善脾肾阳虚泄泻模型大鼠能量代谢效果更加明显,提示其增效可能与促进能量代谢相关酶活性有关。