隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HepG2细胞,采用CCK-8检测细胞活力,并计算IC_(50);Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡;mRFP-GFP-LC3转染HepG2细胞,检测自噬流情况;Western blot分析检测自噬相关蛋白LC3,Beclin-1及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果隐丹参酮可显著抑制HepG2细胞活力,并诱导细胞凋亡;隐丹参酮显著增加HepG2细胞自噬小体及自噬溶酶体数量(P0.05);隐丹参酮显著升高HepG2细胞LC3-II/LC3-I比值及Beclin-1表达(P0.05),同时降低p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导HepG2细胞自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

N-乙酰半胱氨酸抑制亚砷酸钠诱导心肌细胞凋亡和自噬作用的研究

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制亚砷酸钠诱导H9C2细胞凋亡和自噬作用及机制。方法:用亚砷酸钠诱导H9C2细胞构建凋亡和自噬模型。采用CCK-8比色法检测细胞的存活率,Hoechst 33258核染色法观察凋亡细胞的形态和数量改变.双氯荧光素染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western Blot法测定蛋白P53、Bcl-2、Bax及LC3的表达水平,以及磷酸化ERK1/2蛋白及ERK1/2蛋白总量的表达水平。结果:与对照组相比,15μM亚砷酸钠处理的H9C2细胞存活率显著降低.细胞内ROS水平明显增加.凋亡细胞数量明显增多,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值明显增大(P0.01)。1 mM NAC预处理后显著减少H9C2细胞内ROS的生成和促凋亡蛋白P53和Bax的表达,诱导抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高,同时降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ的比值。亚砷酸钠处理诱导ERK1/2蛋白磷酸化(P0.01),而NAC和亚砷酸钠共处理抑制了ERK1/2蛋白的磷酸化。结论:亚砷酸钠降低H9C2细胞的存活率,增加细胞内ROS的生成,诱导细胞凋亡和自噬。NAC通过降低H9C2细胞内的ROS水平和抑制ERK1/2蛋白的磷酸化拮抗亚砷酸钠诱导的细胞凋亡和自噬。     

α-亚麻酸植物甾醇酯调节自噬改善油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性

目的 观察α-亚麻酸植物甾醇酯（PS - ALA）对油酸（OA）诱导的肝细胞脂肪变性的影响，并从调节自噬角度进一步探索其可能的分子机制。方法 将HepG2细胞分为:对照组（Control）、模型组（OA）、ALA组（OA + ALA）、PS组（OA + PS）和PS - ALA组（OA + PS - ALA）。CCK - 8检测细胞活力；尼罗红染色观察肝细胞脂滴积累；GPO - PAP法测定细胞中TG的含量；Western blot检测自噬相关蛋白LC3II和p62蛋白表达水平；免疫荧光检测自噬调控因子p - mTORC1、LC3II和p62表达水平。采用单因素方差分析进行多组实验结果间的比较；采用LSD法和Dunnett T3法进行两两比较。结果 PS - ALA显著降低OA诱导的HepG2细胞脂质沉积和TG水平，且效果优于α- 亚麻酸（ALA）或者植物甾醇（PS）单独干预（F = 35.198, P＜0.001）；PS - ALA显著降低HepG2细胞LC3II和p62的蛋白表达水平，促进细胞自噬（F = 10.614, P = 0.001; F = 20.222 , P＜0.001）；进一步的分子机制研究表明PS - ALA抑制OA引起的mTORC1磷酸化激活（F = 644.164 , P＜0.001），同时伴随LC3II和p62的表达水平降低（F = 393.234, P＜0.001; F = 668.414 , P＜0.001）。结论 PS - ALA显著改善OA诱导的HepG2细胞脂肪变性，其分子机制可能与抑制mTORC1磷酸化促进自噬有关。     

自由脂肪酸依赖CASPASE3诱导人肝肿瘤细胞株HepG2凋亡

目的利用体外脂肪变性的模型,探讨不同自由脂肪酸（FFA）的细胞毒性和诱导细胞凋亡的机制。方法分别采用DAPI棱染剂和借助半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）荧光分析试剂盒检测人肝肿瘤细胞株HepG2在不同脂肪酸在不同时间后（12h、24h、48h）TG和细胞凋亡率和Caspase3活性的变化,以及Z-VAD-FMK在不同时间对棕榈酸（PA）诱导的细胞凋亡和Caspase3的活性的抑制作用。结果亚油酸（LA）组、油酸（OA）组在各时间段的TG的积累高于PA组,但凋亡率和Caspase3活性均低于PA组,并呈时间依赖性。加入Z—VAD-FMK后PA导致的凋亡率和Caspase3活性均显著性降低。结论棕桐酸以Caspase3蛋白酶依赖的方式诱导脂凋亡。油酸和亚油酸通过形成甘油三酯。防止肝细胞脂凋亡。     

二氯乙腈诱导HepG2细胞凋亡及机制研究

目的 研究二氯乙腈(DCAN)对人肝肿瘤HepG2细胞凋亡的作用及其机制。 方法 用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理的HepG2细胞作为对照组, 50和800 μmol/L 的DCAN处理的HepG2细胞作为处理组,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;荧光测定法检测HepG2细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。 结果 DCAN处理浓度和处理时间存在交互效应(P<0.001),与对照组比较,DCAN可明显抑制HepG2增殖,呈现时间和剂量效应(P<0.05);与对照组比较,800 μmol/L DCAN处理组G₀/G₁期比例明显减少,G₂/M期细胞比例明显增加;DCAN诱导的HepG2细胞凋亡随着浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.031x+5[决定系数(R²)=0.915,F=64.782,P<0.001];DCAN诱导的HepG2细胞内caspase-3酶活性随着处理浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.001 6x+1(R²=1.000,F=21 266.064,P<0.001)。 结论 DCAN可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G₂/M期细胞阻滞、抑制RNA和蛋白质的合成并激活细胞内caspase-3凋亡途径有关。     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

不同膳食脂肪酸对大鼠乳腺癌细胞核受体基因表达的影响

目的 探讨核受体基因表达在不同膳食脂肪酸影响大鼠乳腺癌发生中的作用。方法用8种不同膳食脂肪酸（饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、n-6多不饱和脂肪酸、n-3多不饱和脂肪酸、1：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸、5：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸、10：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸、1：2：1饱和脂肪酸／单不饱和脂肪酸／多不饱和脂肪酸其中n-6／n-3多不饱和脂肪酸1：1）喂养SD雌性幼年大鼠,采用50mg／kg的甲基亚硝基脲单次腹腔注射诱导大鼠乳腺癌发生,电镜观察大鼠乳腺细胞结构变化,BrdU体内标记法检测大鼠乳腺细胞增殖活性,RT—PCR分析乳腺组织过氧化物酶增殖活化受体（PPARβ和PPARγ）mRNA表达。结果 无乳腺癌诱发的各对照和n-3多不饱和脂肪酸诱癌组大鼠乳腺细胞超微结构正常,细胞增殖活性低。而有大鼠乳腺癌诱发的组织细胞内可见明显的腺癌标志,且高乳腺癌诱发的饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、n-6多不饱和脂肪酸、5：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸、10：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸和1：2：1饱和脂肪酸／单不饱和脂肪酸／多不饱和脂肪酸喂养组大鼠乳腺细胞增殖活性升高（BrdU阳性率为21％～22％）,但1：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸低诱癌组乳腺细胞增殖活性明显降低上述高乳腺癌诱发组（BrdU阳性率为13％,P〈0．05）。此外,过氧化物酶增殖活化受体作为与脂代谢密切相关的细胞核受体基因,1：1n-6／n-3多不饱和脂肪酸低诱癌组较相应对照组上调PPARβ和PPARγ mRNA表达力度明显弱于高乳腺癌诱发组。结论 不同膳食脂肪酸对PPAR基因表达的调节截然不同,这可能是差异性调节大鼠乳腺癌发生的分子机制之一。     

氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响

目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。     

内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究

目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况,流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况,同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态...     

白藜芦醇通过TFEB调节细胞自噬的机制研究

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和TFEB总蛋白水平以及TFEB在核提取液中的水平;荧光显微镜观察GFP-LC3融合蛋白在细胞内分布;荧光定量PCR检测TFEB及其靶基因mRNA水平。结果白藜芦醇处理24 h后HeLa细胞活性降低,激活型Caspase-3蛋白水平增加。白藜芦醇处理增加细胞LC3-Ⅱ蛋白水平,在12h达到高峰,且呈剂量依赖性变化,同时GFP-LC3荧光在细胞内呈点状聚集。白藜芦醇处理增加总细胞和核提取液中TFEB蛋白水平,并增加TFEB自身mRNA及其靶基因mRNA水平。结论白藜芦醇可能通过TFEB在转录水平调节细胞自噬。[营养学报,2019,41(4):374-378]     

CI与医院营销

通过对CI和医院营销的基本概念及二者的相互关系的简述,阐述了CI是搞好医院营销的前提和保障,强调医院形象及品牌对医院创造服务对象价值的重要性。并导入了一个新的概念——医院内部营销。医院要搞好营销,就必须将广告宣传和内部营销有机地结合起来,取得事半功倍的效果。     

MALNUTRITION AND PHYSICAL AND MENTAL DEVELOPMENT

In a study conducted during the, past five years in urban America, results suggest that. malnutrition during early infancy will retard physical and intellectual development.     

ILEOSTOMY AND FLUID AND ELECTROLYTE LOSSES

The proper establishment of a permenent ileal stoma should present no unusual fluid or electrolyte problems incompatible with normal recovery after major surgery.     

吸烟与儿童青少年健康

吸烟对儿童青少年健康的危害是多方面的,可以影响到多个系统,不仅增加了患呼吸系统疾病的危险性,影响其生长发育,而且还与儿童青少年的智力发育密切相关,增加了某些行为问题的发生率.目前世界上许多国家都已采用了多渠道、多层面的综合措施来控制烟草对儿童青少年的危害.     

THE WEIGHT OF KNOWLEDGE: TEACHERS AND STUDENTS AND DOCTORS AND PATIENTS

This paper examines one particular problem in medical education: the rapid accumulation of technical medical knowledge. It is suggested that this development contributes significantly to several major deficiencies in training for clinical practice: it encourages a passive learning model, it helps to undervalue consultation skills and it inappropriately increases the student's anxiety in “not knowing all the facts.” In addition, the emphasis on technical knowledge helps to narrow the focus of attention to technical details at the expense of essential information on the patient's relationships and environment. Knowledge will continue to accumulate; a number of suggestions are made to ameliorate some of the harmful effects of this accumulation on teaching and learning in medical school. They include more emphasis on the process of the consultation and on problem-solving skills learned experientially rather than mastery of facts. A further recommendation is made to re-evaluate what is the essential knowledge base so that greater weight is given to information about the patient's relationships, attitudes and beliefs. The paper concludes with an assessment of the major institutional constraints standing in the way of the educational reforms outlined and suggests some ways these could be overcome.