亚抑菌浓度鱼腥草素钠及与红霉素联合对表皮葡萄球菌生物被膜的作用

目的:观察亚抑菌浓度(亚-MIC)的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜的影响.方法:连续稀释法测定鱼腥草素钠和红霉素对表皮葡萄球菌的MIC;棋盘格法测定鱼腥草素钠和红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用;体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,XTT递减法评价亚抑菌浓度的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌黏附及对生物被膜内细菌代谢的影响;扫描电镜观察亚抑菌浓度下2药单独及联合用药后对表皮葡萄球菌生物被膜形态的影响情况.结果:鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌的MIC分别为62.5,7.812 5 mg·L-1;1/8MIC鱼腥草素钠、1/2MIC红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用为协同,亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素以及二者联用对表皮葡萄球菌生物被膜菌黏附和代谢均有抑制作用,对表皮葡萄球菌牛物被膜的形态有影响.结论:亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌牛物被膜有抑制作用;鱼腥草素钠和红霉素联合用药对表皮葡萄球菌悬浮菌和生物被膜的抑制具有协同作用,在对生物被膜菌代谢的抑制和对牛物被膜形态的影响方面效果尤为显著.     

鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜作用的研究

 目的 通过中药有效成分鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物被膜引起的相关感染提供新的治疗途径。方法 利用XTT减低法评价鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌初始黏附及生物被膜内细菌代谢的影响,镜下观察该药对表皮葡萄球菌生物被膜的形态学影响。结果 鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜菌的SMIC₅₀和SMIC₈₀分别为62.5和1 000 mg·L-1;1 000 mg·L-1质量浓度的鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌早期黏附有抑制作用;500 mg·L-1质量浓度的鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜的形态有显著影响。结论 鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜的形成与黏附均有抑制作用。     

鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌luxS,agr/RNAⅢ影响的研究

细菌的群体感应及特异基因表达调控在细菌生物被膜形成中有十分重要的作用。luxS,agr均是表皮葡萄球菌群体感应调控中的关键基因,RNAⅢ是agr系统的效应器分子。为了评估鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌转录水平的影响,采用连续稀释法测定鱼腥草素钠、红霉素、万古霉素对表皮葡萄球菌的MIC;荧光定量PCR测定鱼腥草素钠及其与红霉素联用、万古霉素、红霉素等对表皮葡萄球菌作用后不同时间段luxS,agr/RNAⅢ的转录水平。结果表明1/2MIC,1/4MIC鱼腥草素钠,1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素,1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素,1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素等在作用于ATCC 35984伊始,就可迅速上调luxS的表达,与阴性对照相比,存在显著差异(P0.05);在作用6,12,48h后,鱼腥草素钠依然存在对luxS的上调作用。鱼腥草素钠在MIC,1/2MIC浓度时对agr表达均有显著下调作用(P0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用,在作用6,12,24 h等时间段对agr表达的下调作用也很显著(P0.05)。鱼腥草素钠在MIC浓度时,对RNAⅢ表达亦有显著下调作用(P0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显著(P0.05)。提示鱼腥草素钠及其与红霉素联用,可以迅速上调表皮葡萄球菌luxS转录水平的表达,在特定浓度下可下调agr/RNAⅢ的表达,具有抑制表皮葡萄球菌生物被膜菌之间的相互黏附聚集、抑制膜内营养和输水通道的形成、阻止膜内细菌脱离、并抑制细菌外毒素形成等作用的可能。     

鱼腥草素钠增强亚胺培南抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的：研究鱼腥草素钠联合亚胺培南增强抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用。方法：2倍稀释法测定被试药物最小抑菌浓度（MIC）,结晶紫染色法检测1/2MIC,1MIC,2MIC 的鱼腥草素钠（SH）、亚胺培南（IMP）单药组和1/2MIC的SH与IMP各药物浓度联合组对黏附菌的清除量、生物被膜生长量、藻酸盐产生量的影响。FDA-PI荧光素双染法荧光显微镜下观察各药物组膜分散后死活细菌、生物被膜形态。结果：鱼腥草素钠能增强亚胺培南抗绿假单胞菌生物被膜的作用,尤以2MIC药物浓度联合组作用最强（与阴性对照组比较P<0.001）。荧光显微镜下观察死活细菌、生物被膜形态支持了上述结果。结论：鱼腥草素钠联合亚胺培南能增强抗生物被膜作用,预期两药联合会提高相关感染的临床疗效。     

鱼腥草素钠(粉针剂)体外抗菌活性的初步研究

目的:测定鱼腥草钠(粉针剂)对临床常见致病菌的抗菌能力,以期评价其体外抗菌效果,为该药物粉针剂的开发和临床研究提供依据。方法:使用微量液体稀释法和琼脂稀释法测定鱼腥草素钠(粉针剂)不同条件下对临床常见致病菌最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果:鱼腥草素钠(粉针剂)对革兰阴性杆菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌)和真菌(白色念珠菌)抗菌效果较差,MIC>10 2 4μg/ ml。对革兰阳性球菌(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及肺炎链球菌)有较好抑制作用,其MIC在6 4μg/ ml左右,不同p H值和不同菌液浓度对鱼腥草素钠(粉针剂)的抗菌效果无明显影响。结论:鱼腥草素钠(粉针剂)对革兰阳性球菌(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及肺炎链球菌)有较好抑制作用,值得进一步开发和利用。     

泰利霉素体外抗金黄色葡萄球菌生物膜活性研究

目的:比较泰利霉素与常见抗菌药物(阿奇霉素、克林霉素、万古霉素和达托霉素)对金黄色葡萄球菌生物膜的作用。方法:本研究选择了2015年从华中科技大学协和深圳医院收集的4株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和4株甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA),通过药物作用,使用96孔微板法定量结晶紫染色检测菌株产生物膜的能力,通过cfu计数方法对生物膜中的细菌进行定量分析。结果:在亚抑制浓度下(4×MIC),泰利霉素明显优于阿奇霉素或克林霉素抑制MSSA菌株生物被膜的形成,优于万古霉素或达托霉素抑制MRSA生物膜的形成。在8×MIC浓度下,泰利霉素优于阿奇霉素或克林霉素清除已经形成的MSSA菌株生物被膜,优于万古霉素或达托霉素清除已经形成的MRSA菌株生物被膜,同时,对已经形成的金黄色葡萄球菌生物膜中活菌的杀灭作用,泰利霉素与达托霉素作用相似,明显优于阿奇霉素、克林霉素和万古霉素。结论:泰利霉素对金黄色葡萄球菌生物膜的疗效优于阿奇霉素、克林霉素、万古霉素或达托霉素。     

鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用

目的研究鱼腥草水提液体外对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用。方法应用微量倍比稀释法测定鱼腥草水提液、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法测定鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的影响,镜下观察该药对铜绿假单胞菌生物被膜的形态影响。结果实验结果提示,鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌的MIC为250 g.L-1,协同实验表明与阿奇霉素有抗菌相加作用。鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的SMIC501,3,7d分别是31.25,62.5,62.5 g.L-1,SMIC80分别是250,250,250 g.L-1。SMIC80药物浓度显示对铜绿假单胞菌生物膜形态形成有干扰作用。结论鱼腥草水提液与阿奇霉素抗菌相加作用明显,并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成,为鱼腥草治疗由生物膜引起的慢性感染提供了依据。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响

目的:研究鱼腥草素钠(houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜(biofilm,BF)形成的影响。方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的最小清除浓度(minimum eliminateing concentration,MEC)及最小抑膜浓度(sessile minimal inhibitoryconcentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响;扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响。结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1。250 mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P<0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状。结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。     

黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌生物被膜 及与阿奇霉素协同抗菌作用

目的:研究黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌牛物被膜及与阿奇霉素协同抗菌作用.方法:微量倍比稀释法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定黄连解毒汤和阿奇霉素协同抗菌作用,MTT法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC),显微镜下观察药物对生物膜形态的影响.结果:黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的MIC 100 g·L-1,阿奇霉素200 mg·L-1,两药联合后MIC分别为25 g·L-1和25 mg·L-1抑菌分级指数(FIC)0.1875,提示两药协同作用明显.黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的SMIC5.1,3d均为15.6 g·L-1,7 d31.25 g·L-1;SMIC801,3,7d均为250 g·L-1,形态观察提示黄连解毒汤SMIC80浓度对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用明显.结论:黄连解毒汤具有抗铜绿假单胞菌生物被膜作用,与阿奇霉素有协同抗菌作用.     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的清除作用

目的研究鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌早期生物被膜及成熟期生物被膜的清除作用。方法用96孔板建立体外铜绿假单胞菌生物被膜,给药24 h后MTT法检测生物被膜最低清除浓度(sessile minimal eradicating concentration,SMEC),扫描电镜下观察药物对生物膜形态影响。结果鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的SMEC50,早期是15.6 mg/L,成熟期是250 mg/L,在早期生物被膜向成熟生物被膜发展过程中SMEC50均在250 mg/L,镜下观察250mg/L药物质量浓度能清除大部分的生物被膜,同时可使铜绿假单胞菌发生形态变异。结论鱼腥草素钠对早期及成熟期的生物被膜有一定的清除作用,对早期生物被膜的清除作用更强于成熟期生物被膜。     

鱼腥草素钠预防生物被膜引起的早期肺气虚证的研究

目的研究鱼腥草素钠早期抗大鼠呼吸道生物被膜菌感染预防肺气虚证发生的作用。方法健康SD大鼠随机分为正常对照组、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)标准株(ATCC27853)和铜绿假单胞菌临床株(AH16)分别包括模型组、鱼腥草素钠(SH)治疗组和阿奇霉素(AZM)阳性对照组。将呼吸道生物被膜菌铜绿假单胞菌标准株(Pa)和临床株(AH16)以滴鼻法感染大鼠,并辅以寒冷、疲劳刺激引起大鼠呼吸道慢性感染,诱导大鼠肺气虚证的发生。治疗组与阳性对照组于感染成功后分别用鱼腥草素钠及阿奇霉素治疗。观察各组证候表现、血气变化,酶联免疫吸附法测定肺泡灌洗液中白细胞介素-8(IL-8)的含量变化,HE染色镜下观察肺支气管组织器官病理改变。结果模型组的大鼠证状符合肺气虚证的证候表现;药物治疗组肺气虚证状不明显;血气分析表明,模型组大鼠血液中动脉氧分压(Partial pressure of oxygen,PO2)均显著下降,与正常对照组比较,P0.05,或P0.01,而二氧化碳分压(Partial pressure of carbon dioxide,PCO2)均显著升高与正常对照组比较(P0.05);治疗组大鼠血液中PO2和PCO2变化不明显,与正常对照组比较P0.05;模型组大鼠肺部灌洗液中的IL-8的含量均明显升高,与正常对照组比较,P0.05,或P0.01;病理学检查模型组肺及支气管炎症明显,肺部特征符合慢性支气管炎、肺气肿病理变化,鱼腥草素钠治疗组和阿奇霉素阳性大鼠肺部无病理变化出现。结论鱼腥草素钠早期干预铜绿假单胞菌生物被膜呼吸道感染的大鼠能预防肺气虚证的发生。     

黄绵马酸BB联合红霉素抑制表皮葡萄球菌及其生物被膜的形成研究

目的 探讨黄绵马酸BB与红霉素联用对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)抑菌活性和生物被膜形成的作用,为黄绵马酸BB开发成为一种新型的生物被膜抑制剂提供理论基础。方法 采用微量稀释法分别测定黄绵马酸BB与红霉素联用对11株SE的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),并采用微量棋盘稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)与最低抑膜浓度(minimum biofilm inhibitory concentration,MBIC);采用时间-杀菌曲线法,评价联合用药对SE的动态杀菌作用;通过二甲氧唑黄[2.3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[carbonyl(phenylamino)]-2H-tetrazolium hydroxide,XTT]比色法、半定量黏附实验和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察,评价联合用药...     

麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法微量倍比稀释法测定麻杏石甘汤、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法评价二者对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC(SMIC50、SMIC80)的影响,镀银染色法观察麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响。结果麻杏石甘汤SMIC50和SMIC80分别为250,1 000 mg.ml-1;500 mg.ml-1的麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的形态有显著影响。结论麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜有较强的抑制作用。     

穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜作用初探

目的:通过穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物被膜菌引起的相关感染提供新的治疗途径。方法:体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,以红霉素作为阳性对照药,利用XTT减低法评价穿心莲内酯对表皮葡萄球菌初始黏附及生物被膜内细菌代谢的影响,显微镜下观察该药对表皮葡萄球菌生物被膜的形态学影响,刚果红培养基法检测穿心莲内酯对PIA(polysacchatide interc-ellular adhesion,胞间多糖黏附素)形成的影响。结果:穿心莲内酯1 000,100,10 mg.L-1对表皮葡萄球菌的黏附均有抑制作用,质量浓度大于31.25 mg.L-1对生物被膜内细菌代谢有明显抑制作用,质量浓度为250 mg.L-1时对表皮葡萄球菌生物被膜的形态有显著影响,质量浓度为10 mg.L-1时对PIA的形成无影响。结论:穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜的形成有显著抑制作用,但效果不及红霉素。     

鱼腥草素钠联合EDTA-Na2对生物被膜菌的影响

目的 探索鱼腥草素钠(SH)联合乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na₂)对生物被膜菌的影响,寻找潜在的抗生素替代品.方法 通过微量稀释法以及棋盘法,测定SH和EDTA-Na₂对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、白色念珠菌(Candida albicans,CA)的最小抑菌浓度(MIC)和最小膜清除浓度(MBEC)以及两药协同点;通过平板稀释涂布法测定3种菌在协同点的生存曲线;扫描电子显微镜法(SEM)观察PA、SA和CA生物被膜的形态.结果 SH对PA、SA和CA的MIC分别为2.048、0.064、0.064 mg/mL,MBEC分别为2.048、0.256、0.512 mg/mL;EDTA-Na₂对PA、SA和CA的MIC分别为3.75、0.938、0.117 mg/mL,MBEC分别为15、3.75、30 mg/mL;SH联合EDTA-Na₂(SH/EDTA-Na₂)对PA、SA和CA的MIC(mg/mL)分别为0.256/0.938、0.008/0.233、0.008/0.029,MBEC(mg/mL)分别为0.512/3.722、0.032/0.469、0.064/0.938;SEM观察到两药联合对细菌的生长抑制和生物被膜的清除有明显作用,载体上的细菌显著减少,未见或仅有少量的生物被膜结构,与空白对照组比较差异明显.结论 SH与EDTA-Na₂具有协同作用,二者联合能够显著增强SH对PA、SA和CA的生长抑制和生物被膜的清除作用.     

比较六种中草药成分的体外抑菌作用

目的比较种六种中草药成分对金黄色葡萄球菌与大肠埃希杆菌的抑菌作用。方法药物二倍稀释法与菌落计数法联合法测定六种中草药成分对金黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果鱼腥草素钠、松罗酸、大黄素、木犀草素对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用,而在本试验所设浓度范围内不抑制大肠埃希杆菌;硫酸氢黄连素对大肠埃希杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用;穿心莲内酯在本实验范围内对大肠埃希杆菌和金黄色葡萄球菌无抑制作用。结论此六种中草药成分对金黄色葡萄球菌的抑制作用要强于大肠埃希杆菌。     

鱼腥草贮藏过程中挥发油抑菌效果变化的研究

目的:研究鱼腥草地上部分和地下部分在贮藏过程中挥发油抑菌效果的变化。方法:采用二倍稀释法测定鱼腥草挥发油抑菌活性和最低抑菌浓度(MIC)。结果:鱼腥草鲜样挥发油的抑菌效果最强,对金黄色葡萄球菌、八叠球菌的MIC均为1/2×10-3ml/ml,在贮藏过程中随着时间的延长MIC逐渐增大。结论:鱼腥草挥发油抑菌活性随着贮藏时间的延长而呈下降趋势。     

阿奇霉素联合鱼腥草素钠治疗小儿呼吸道支原体感染的临床观察

目的评价阿奇霉素联合鱼腥草素钠治疗小儿呼吸道支原体感染的有效性和安全性。方法选择小儿呼吸道支原体感染患者40例,用阿奇霉素0.125 g,溶于10%葡萄糖注射液100 m l,静脉滴注,qd,疗程5~7 d;另用鱼腥草素钠4 mg,溶于10%葡萄糖注射液250 m l,静脉滴注,qd,疗程5~7 d。结果临床痊愈率75%,有效率87.5%,支原体清除率75%,不良反应发生率12.5%。结论阿奇霉素联合鱼腥草素钠治疗小儿呼吸道支原体感染安全、有效。     

鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对生物被膜细菌的清除作用

目的探讨鱼腥草对细菌生物被膜的影响,观察鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物被膜的作用.方法用试管二倍稀释法测定鱼腥草和左氧氟沙星的最低抑菌浓度;用平板培养法建立生物被膜细菌体外模型;用MTT活菌计数法测定存活细菌数;用扫描电镜观察药物对生物被膜的破坏及清除作用.结果铜绿假单胞菌培养7 d后可形成稳定的生物被膜.鱼腥草或左氧氟沙星单独作用,对生物被膜的形态及存活细菌数无明显改变.二者联合应用,能破坏生物被膜的结构,显著降低膜内存活细菌数.结论鱼腥草与左氧氟沙星联合运用对生物被膜细菌具有协同杀灭作用.     

大鼠肺部与外周血清阿奇霉素浓度对肺炎链球菌抑菌作用的比较

 目的观察阿奇霉素在血清、支气管肺泡上皮表面液(ELF)、肺组织匀浆的浓度及随时间分布的特点,并进一步比较三者浓度对肺炎链球菌的抑制作用。方法为SD大鼠灌胃阿奇霉素后微生物法测血、支气管肺泡灌洗液及肺组织匀浆阿奇霉素浓度。ELF的阿奇霉素浓度按尿素稀释法算出。用肉汤微量稀释法测定阿奇霉素、青霉素对27株肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC),比较血清、ELF和肺组织匀浆阿奇霉素浓度对肺炎链球菌的抑制作用。结果血清、ELF和肺组织匀浆中阿奇霉素浓度在首次给药后51 h最高,分别为(0.652 7±0.213 3),(1.325 5±0.280 3)和(29.094 2±2.940 2)mg·L^-1。青霉素对27株肺炎链球菌的敏感率为66.7%,高于阿奇霉素敏感率(14.8%);其中对阿奇霉素耐药的23株肺炎链球菌(85.2%)中,MIC>512 mg·L^-1的有16株(69.6%);除去美国疾病控制中心(CDC)的4株肺炎链球菌,仅有30.4%的菌株可被肺组织的峰浓度抑制,8.7%(2/23)可被ELF和血清的阿奇霉素浓度抑制。结论虽然阿奇霉素具有很高的肺组织浓度,并且超过了阿奇霉素中介或低度耐药的肺炎链球菌的MIC水平,但不能单以血清浓度预测阿奇霉素对病原体的抗菌效果。