硒、锌对老年性痴呆模型小鼠APP酶解通路的保护作用及机制研究

目的研究硒、锌对老年性痴呆(Alzheimer’s,AD)模型小鼠酶解通路的保护作用及机制。方法选用健康雄性2月龄昆明种小鼠60只,随机分为正常对照组(NC)、AD模型组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+AD组、锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、硒[Se,7.5μg/(kg bw)]+锌[Zn,5 mg/(kg bw)]+AD组、脑复康[Piracetam,230 mg/(kg bw)]+AD共6组,每组10只。连续60d腹腔注射D-半乳糖[150 mg/(kg bw)],建立老年性痴呆模型,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中α、β、γ-分泌酶含量以及脑组织中Aβ1-40含量;Western-blot法检测脑组织中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化Tau(Ph-tau)蛋白水平。结果 ELISA法显示,与AD组比较,硒、锌可以增强α-分泌酶活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,且硒锌联合作用增强,脑组织中Aβ_(1-40)含量明显降低。Western-blot法检测显示,与NC组比较,AD模型组GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平升高,而硒、锌处理组和硒锌联合作用组,GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平明显降低。结论硒、锌通过增加内源性α-分泌酶的活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,减少Aβ_(1-40)的生成,降低GSK-3β、Ph-tau蛋白表达水平,可能对AD的发病及进展有一定预防保护作用。     

硒、锌干预对体外淀粉样前体蛋白酶解通路的影响

目的研究硒、锌干预对体外淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)酶解通路的影响。方法用0.1μmol/L的硒、锌处理胚鼠皮层神经元细胞,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测γ-内切酶活性;另用脂质体转染构建APP695高表达CHO细胞系,用G418(500mg/L)对转染后细胞进行筛选,最终获得表达人CHO-APP695细胞模型,Western-blot法检测APP-N端片段蛋白的表达。用0.1μmol/L的硒、锌处理转染细胞,48h后,ELISA法检测细胞培养上清中Aβ1-40含量,Western-blot法检测细胞裂解液APP-N端片段蛋白的表达。结果 Western-blot法检测显示CHO-APP695细胞高表达APP-N端片段蛋白;与对照组比较,硒、锌处理组抑制内源性γ-内切酶的活性,且硒、锌联合使用,抑制作用增强;Aβ1-40的含量也减少;单纯硒、锌和硒锌联合处理组,APP-N端片段蛋白表达水平增加。结论硒、锌抑制内源性γ-内切酶对APP蛋白的剪切,减少Aβ1-40的生成,可能对阿尔茨海默病的发病及进展有一定的预防保护作用。     

矢车菊-3-O-葡萄糖苷对β淀粉样蛋白25-35致海马神经细胞损伤的干预研究

目的探讨矢车菊-3-O-葡萄糖苷(Cy-3G)的神经保护作用。方法原代培养乳鼠海马神经细胞,免疫荧光法检测细胞纯度。5μmol/Lβ淀粉样蛋白(Aβ)25-35处理细胞3 h,Cy-3G不同方式干预后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞上清液中LDH漏出率,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,罗丹明123试剂盒检测细胞线粒体膜电位。结果与对照组比,5μmol/L Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P0.05),而40μmol/L Cy-3G共孵育3 h可有效提高细胞存活率,还可显著降低细胞上清液中LDH漏出率、升高细胞线粒体膜电位、降低细胞ROS水平(P0.05)。结论 40μmol/L Cy-3G共孵育3 h对Aβ25-35损伤的原代海马神经细胞有保护作用。     

黄芪提取物对Aβ_(25-35)诱导的海马神经细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨黄芪提取物(EA)对Aβ_(25-35)所致海马神经元损伤的保护作用及其作用机制。方法分离孕18 d的胎鼠的海马神经细胞进行体外培养,实验分为3组:对照组、模型组和黄芪组。对照组:只加入无B27神经生长因子的神经基础培养基(NB)原液培养24 h;模型组:加入无B27神经生长因子的NB原液,再加入终浓度为10μmol/L Aβ_(25-35)培养24 h;黄芪组:加入无B27神经生长因子的NB原液,先加入终浓度为黄芪提取物20 mg/L培养4 h,再加入终浓度为10μmol/L Aβ_(25-35)培养20 h。在倒置显微镜下观察各组海马神经细胞形态学变化;采用乳酸脱氢酶(LDH)法和3-(4,5-甲基噻唑-2)-2,5-苯基的氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活性;Western blot检测各组海马神经细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果模型组的海马神经细胞活性明显下降,细胞出现凋亡的典型的形态学特征,Bcl-2蛋白的表达水平下降而Bax蛋白的表达水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪组海马神经细胞活性提高、凋亡的细胞数减少,Bcl-2蛋白的表达水平升高而Bax蛋白的表达水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪提取物对Aβ_(25-35)所诱导的海马神经元损伤具有一定的保护作用,可能与其降低海马神经细胞Bcl-2蛋白的表达水平升高Bax蛋白的表达水平有关。     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马细胞线粒体-内质网结构耦联的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))对大鼠海马线粒体-内质网结构耦联(MAM)的影响。方法将48只健康成年清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为6组,分别为对照(不进行任何处理)组、假手术(开颅进针但不注射溶液)组、生理盐水组和2.5、5、7.5μg/μl Aβ_(25～35)染毒组,每组8只。于海马CA1区一次性注射2μl染毒。于手术后14 d,应用ELISA法检测大鼠血清中Aβ_(25～35)水平,分别用RT-PCR和Western blotting检测海马内线粒体融合蛋白1(MFN1)、MFN2 m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组相比,5、7.5μg/μl Aβ_(25～35)染毒组大鼠血清中的Aβ_(25～35)水平均增高,差异有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25～35)染毒浓度的升高,大鼠血清中的Aβ_(25～35)水平呈上升趋势。与对照组相比,各浓度Aβ_(25～35)染毒组大鼠海马组织中MFN1、MFN2蛋白和mRNA的表达水平均增高,除7.5μg/μl组MFN1 m RNA外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25～35)染毒浓度的升高,大鼠海马组织中MFN1蛋白及MFN2蛋白和mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势,而大鼠海马组织中MFN1 mRNA的表达水平呈下降趋势。结论 Aβ_(25～35)可以增加大鼠血清中β-淀粉样蛋白的水平,同时Aβ_(25～35)可破环大鼠海马组织线粒体-内质网结构耦联结构,造成其功能异常,从而发挥神经毒性作用。     

花色苷对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞保护作用的研究

目的观察花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用,并初步探讨相关机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞。实验分组:首先进行Aβ_(25-35)损伤浓度的筛选,将细胞分为对照组和不同浓度Aβ_(25-35)处理组(浓度为5、10、15、20、25μmol/L);在确定Aβ_(25-35)的损伤浓度基础上进行Cy-3-G干预浓度的筛选,将细胞分为对照组、Aβ_(25-35)处理组和不同浓度Cy-3-G预孵育组(浓度为10、25、50、100μmol/L);而后进行Cy-3-G干预时间的筛选,将细胞分为对照组、Aβ_(25-35)处理组和不同时间Cy-3-G预孵育组(时间为3、6、12、24h)。MTT法测定细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,10μmol/L Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞时,细胞活力显著降低(P0.05);Cy-3-G对Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞保护作用的适宜浓度和适宜作用时间分别为100μmol/L和12h;Aβ_(25-35)处理组细胞凋亡率较对照组明显升高(P0.05),而Cy-3-G预孵育可明显抑制Aβ_(25-35)细胞凋亡。结论适宜剂量的Cy-3-G对Aβ_(25-35)损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

西红花酸对Aβ25-35诱导海马神经元损伤的神经保护作用

目的 探讨西红花酸对Aβ25-35诱导的SD大鼠海马神经元损伤的神经保护作用.方法 常规培养SD大鼠海马神经元,分为对照组、0.1μM西红花酸组、10μmol/L Aβ25-35组、0.01 μM西红花酸+10μmol/L Aβ25-35组、0.1μM西红花酸+10μmol/L Aβ25-35组、1μM西红花酸+10μmol/L Aβ25-35组;MTT检测细胞活力变化情况;荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平变化情况.结果 10μmol/L Aβ25-35显著降低细胞的活性和升高海马神经元ROS水平(P＜0.01);不同浓度西红花酸(0.01、0.1和1μM)预处理后,细胞活性分别比0A25-35组提高了39.2％、56.1％和76.4％,差异有显著性意义(P＜0.05),培养10天和25天海马神经元的ROS水平与Aβ25-35组比较均显著降低(P ＜0.01).结论 西红花酸对Aβ25-35诱导海马神经元的损伤具有保护作用,能显著降低Aβ25-35引起的海马神经元ROS水平的升高.     

原儿茶酸对β-淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤的保护作用研究

目的 通过β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)处理SH-SY5Y细胞或原代海马神经元建立AD细胞模型，探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对Aβ损伤后的神经细胞的保护效应及其可能机制。方法 应用MTT法筛选Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞的浓度，并筛选PCA作用于Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞的适宜浓度。通过DCFH-DA染色和JC-1染色探究PCA对Aβ_25-35损伤的细胞内ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果 Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞适宜的造模条件为10μmol/L处理24 h;800μmol/L的PCA对Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞保护效果最佳(P<0.001)。Aβ_25-35处理导致原代海马神经元细胞内ROS水平升高(P<0.001)而线粒体膜电位有降低趋势(P=0.287);PCA干预后，原代海马神经元的细胞内ROS水平显著降低(P<0.01)，线...     

米糠提取物对PC12细胞保护作用的体外实验研究

目的探讨富含γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的米糠提取物(rice bran extracts,RBE)对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的影响。方法 (1)将细胞分为对照组和不同浓度RBE处理组,RBE的浓度分别为50、100、200、400、800、1600和3200(μg/ml),用CCK-8法检测RBE对PC12细胞活性的影响。(2)将细胞分为对照组(不加任何处理因素)、Aβ_(25-35)处理组(20μmol/L)、不同浓度RBE干预+Aβ_(25-35)处理组,RBE浓度分别为100、200、400、500、800、1000和1600(μg/ml)。RBE干预采用预孵育和共孵育2种方式,用CCK-8法检测RBE对PC12细胞的保护作用;并比较2种不同孵育方式的保护效果。结果 (1)一定浓度范围内的RBE可提高PC12细胞的活性。(2)RBE预孵育的浓度为200~1000μg/ml时,对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有显著保护作用(P0.05),其最佳浓度为800μg/ml;RBE共孵育的浓度为400~1000μg/ml时,对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有显著保护作用(P0.01),其最佳浓度为1000μg/ml。结论适宜浓度的米糠提取物干预对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有保护作用。     

乙型肝炎表面抗原、表面抗体共存与HBV-DNA的相互关系及其临床意义

[目的]探讨HBsAg和抗-HBs共存表型的临床意义. [方法]83例HBsAg和抗-HBs共存表型,根据抗原和抗体含量分A、B、C、D群,并且对此4群进行HBV-DNA分析,根据肝炎诊断标准进行分型,肝功能状态进行分析. [结果]83例HBsAg和抗-HBs共存病例中A群占7.2%HBV-DNA捡出率3.6%,B群占84,3%HBV-DNA检出率48.2%,C群占1%未检出HBV-DNA,D群占7.2%HBV-DNA检出率1.2%;无症状慢性携带者13例、慢性肝炎30例、肝硬化12例、肝癌28例;AST、ALT、T-BiL正常分别为55.4%、57.8%、44.6%,抗原量高的B群一半以上肝功能异常. [结论]HBsAg和抗-HBs共存表型中B群HBV-DNA检出率最高,肝功能异常一半以上,肝癌发生率最高.     

硒、锌对老年性痴呆模型小鼠记忆障碍及丙二醛和一氧化氮含量的影响

目的 观察硒、锌时老年性痴呆(AD)模型小鼠学习记忆障碍及脑组织丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量改变的保护作用.方法 50只健康昆明种雄性小鼠随机分为5组,正常对照组(NC).AD模型组、硒(Se,0.0075 mg/kg bw)+AD组、Se(0.0075 mg/kg bw)+Zn(5 mg/kg bw)+模型...     

204名全托儿童膳食营养分析及干预措施

对阳江市204名全托集体儿童的膳食营养状况进行分析与评价,结果表明热量和总蛋白的供给量均达到平均供给量的90%以上,脂肪、锌、维生素B2的供给量偏低,而钙、视黄醇的供给严重不足,它们的实测值分别少于推荐值的70.3%、41.5%。而散居儿童的体格发育评价基本达到1985年九市区标准数值。     

儿童尺桡骨骨不连的治疗和预防

[目的]探讨儿童尺桡骨骨不连的治疗方法及预防措施。[方法]通过对32例儿童尺桡骨骨不连患者分别选用不同的内固定、自体骨移植、骨替代物、骨间膜松解以及局部皮瓣转移等综合治疗,术后及时功能锻炼。[结果]本组32例骨不连均骨性愈合,内置物无松动及断裂,前臂功能恢复理想。[结论]正确选择内固定方法、自体骨移植、骨替代物、骨间膜松解以及局部皮瓣转移等合理治疗方法,及时功能锻炼是治疗儿童尺桡骨骨不连的有效方法,合理选用内固定、减少局部组织损伤、预防感染、及时锻炼是预防儿童尺桡骨骨不连的重要环节。     

宁夏固原市2005～2009年餐饮具消毒效果监测结果与分析

[目的]掌握固原市近年来餐饮单位餐具卫生状况,加强餐饮单位餐具消毒管理.[方法]以大肠菌群快速检测纸片法为判定依据,大肠菌群作为监测指标,作者对固原市2005～2009年餐饮单位餐具消毒监测结果进行统计分析.[结果]共检测餐饮具4060份,总合格率为83.67%,不同年份、不同类型餐饮单位、不同餐饮具的监测合格率均有一定差异.[结论]进一步加强小型餐饮单位的监督执法力度,建立健全食品安全管理制度,加强硬件设施建设,提高从业人员的卫生知识和餐具消毒知识,做到专人负责,专人消毒,强化责任追究制度,消除食品卫生安全隐患.