PCR检测水中致病微生物的研究进展

ＰＣＲ检测水中致病微生物的研究进展军事医学科学院卫生学环境医学研究所李凤义综述张符光审校ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，多聚酶链反应）是一种体外核酸扩增技术，由美国学者Ｍｕｌｌｉｓ等人于１９８５年在Ｃｅｔｕｓ公司发明并命名。Ｐ...     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV一DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０８例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ一ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｓ、抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２０％（２／１０）；（４）在抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２５％（２／８）；文中就ＰＣＲ检测的结果及临床意义作了扼要的讨论。     

聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病毒检测中的应用

利用半抗原地高辛配基（ｄｉｇｉｘｉｇｅｎｉｎ）制备非同位素标记探针技术，分别标记乙型肝炎病毒全基因作者单位：１１０００６沈阳市传染病院中心研究室（孙峥嵘、郑志红、刘桂荣、胥婧、鲁润铭）；中国医科大学微生物教研室（刘兵、王桂珍）探针（ＤＩＧ－ＨＢＶＤＮＡ）及乙型肝炎病毒ＰＣＲ产物Ｃ区探针〔ＤＩＧ－ＨＢＶ（Ｃ／ｐｒｅＣ）〕，经斑点杂交检测血清ＨＢＶＤＮＡ及血清聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物，与ＰＣＲ平行检测１２２份血清标本。实验中以ＤＩＧ－ＨＢＶ（Ｃ／ｐｒｅＣ）为探针，即ＰＣＲ－斑点杂交方法直接标记纯化…     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV—DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０３例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清     

用Logistic回归模型预测血清中HBV－DNA的活动性

多聚酶链反应（简称ＰＣＲ）技术检测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ的活动性具有很高的敏感性，但因自身的特点，应用受到限制．结合乙肝三系检测结果，用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型配合ＰＣＲ检测结果具有较好的配合适度，在没有条件开展ＰＣＲ检测项目的情况下根据乙肝三系检测结果用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型预测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ的活动性。     

动脉粥样硬化血管组织中的巨细胞病毒感染

为探讨巨细胞病毒（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）感染与动脉粥样硬化的相关性，应用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术及二次ＰＣＲ法对病例组２６例动脉粥样硬化血管组织石蜡标本和对照组２３例正常血管组织石蜡标本进行检测。结果：应用传统ＰＣＲ技术检测到病例组１７例ＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为６５４％（１７／２６），对照组５例阳性，阳性率为２１７％（５／２３）；应用二次ＰＣＲ法检测到病例组２０例阳性，阳性率７６９％（２０／２６），对照组８例阳性，阳性率３４８％（８／２３）。结果表明，ＣＭＶ潜伏感染与动脉粥样硬化具有密切联系     

PCR技术在卫生微生物检测中的应用

ＰＣＲ技术在卫生微生物检测中的应用叶怀庄，吴丽丽浙江医科大学公卫学院卫生检测中心杭州多聚酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）［１］是近年来分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破，是基于天然ＤＮＡ复制的规律而设计的一种...     

随机引物多聚酶链反应对革兰氏阴性分型的影响因素研究

随机引物多聚酶链反应对革兰氏阴性分型的影响因素研究高瞻ＫａｔｈｙＪａｃｋｓｏｎＤａｖｉｄＥ．Ｌｅｓｌｉｅ江苏省卫生防疫站（２１０００９南京）随机引物多聚酶链反应（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＰＣＲ，简称ＲＡＰＤＰＣＲ）是...     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

PCR,EIA对乙型肝炎病毒检测的比较

多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是近几年发展起来的先进的快速体外基因扩增技术，已经在很多医学领域得到应用，目前ＰＣＲ技术已逐渐推广至病毒性疾病的诊断和研究中。为了寻找比目前常用的ＥＩＡ技术更敏感更有效的检测方法，...     

定量聚合酶链反应检测血清乙型肝炎病毒DNA及其意义

采用定量ＰＣＲ技术检测了１４０例病毒性肝炎患者及３１例ＨＢｓＡｇ携带者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ基因含量。结果显示１２３例乙型肝炎患者及３１例ＨＢｓＡｇ携带者血清ＨＢＶＤＮＡ基因含量范围在１０１至１０９拷贝／微升，１７例其它类型肝炎及３０例健康正常人均未检出ＨＢＶＤＮＡ；与定性ＰＣＲ及分子斑点杂交检测比较，定量ＰＣＲ的灵敏度更高。该方法是一种快速、敏感、特异的定量ＰＣＲ技术，可用于乙型肝炎的临床诊断和实验研究。     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型研究

根据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原检测、分型和流行病学目前还存在许多待解决的问题,研制了ＨＦＲＳＶ的核衣壳基因工程抗原,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和逆转录－聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＲＴ－ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型方法。根据ＨＦＲＳＶ汉滩型（ＨＴＮ）代表株７６－１１８Ｓ片段ｃＤＮＡ序列,用引物１（５’－ａｔｇｃａｔｇｃｇｇｃｃｇｃｔａｃｃａｔｇｇＮｃｏⅠｃａａｃｔａｔｇｇａｇｇ－３’）与引物２（５’－ｇａｔｃｇｔｃｇａｃＳａｌⅠｔｔａｇａｔｃｔａｇａｇｔｔｔｃａａ…     

聚合酶链反应检测HBV DNA在HBV不同血清免疫学标志组合中的应用价值

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染是一种世界性传染病，我国为高流行区，约1亿人口为乙型肝炎表面抗原携带者。随着聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的推广应用，对患者体内ＨＢＶ复制及传染性有了更深刻的认识，现将本研究应用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ在ＨＢＶ不同血清免疫学标志中的分布结果报告如下。一、材料与方法：（1）标本来源：135份血清均来自本站实验室门诊，凡采用聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ且同时检查ＨＢＶ血清免疫学标志者，静脉采血2ｍｌ，分离血清置-20℃备用。（2）试剂及方法：ＨＢＶＤＮＡ（ＰＣＲ法）购自复旦大学希格尔有限公…     

庚型肝炎病毒PCR产物直接序列测定方法的建立及应用

以ＰＣＲ产物为测序模板，γ３２ＰＡＴＰ标记的ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ＴａｑＤＮＡ聚合酶为测序酶，建立了庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１份ＰＣＲ阳性产物的ＨＧＶｃＤＮＡ序列，图谱呈清晰的序列梯，其序列与ＧＢＶＣ（Ｕ３６３８０）和ＨＧＶ（Ｕ４４４０２）的相应片段序列比较，同源性分别为８５６５％（１９１／２２３）和８５２％（１９０／２２３）。与用荧光法测定的另一株ＨＧＶ序列有高度一致性。对同一样品两端测序，重叠部分序列完全一致。表明ＰＣＲ产物直接测序法可用于ＨＧＶ核酸序列分析。     

PCR扩增16s～23s rRNA区间序列在细菌检测与鉴定领域的应用

传统的细菌学检验与鉴定需要进行细菌培养及一系列生化反应或免疫学检测，环境样品中的细菌检测与鉴定还需要前增菌培养、选择性培养及生化鉴定等程序，既费时又费力，对有些细菌尚不能给出理想的鉴定结果。随着分子生物学技术的发展，１９８５年产生了聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ），该技术以快速、敏感和特异等优点迅速地应用到微生物检测领域。９０年代初建立了ＰＣＲ扩增１６ｓ～２３ｓｒＲＮＡ区间多态性分析的技术，尤其是近两年，这一技术在细菌学检测与鉴定等研究领域得到长足发展，已涉…     

随机引物多聚酶链反应对细菌分型的价值及影响因素探讨

随机引物多聚酶链反应对细菌分型的价值及影响因素探讨高瞻，ＫａｔｈｙＪａｃｋｓｏｎ，ＤａｖｉｄＥ．Ｌｅｓｌｉｅ’踌机引物多聚酶链反应（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＰＣＲ，简称ＲＡＰＤＰＣＲ）是在对所扩增基因一无所知的情况...     

肝病患者血清HBV—DNA的检测

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染是慢性肝炎、肝细胞癌发生的主要原因之一［１］。长期以来一直采用血清学指标判断ＨＢＶ的感染状态。近年发展起来的聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）能敏感有效地检测病人血清中的ＨＢＶＤＮＡ［２］。我们用ＰＣＲ法检测了在各型肝炎、肝硬化和肝...     

用双重式聚合酶链反应技术检测鼠疫菌的实验研究

近几年来,随着分子生物技术的迅猛发展,国内外学者对聚合酶链反应（ＰＣＲ）用于鼠疫的检测十分关注。Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ等〔１〕（１９９３）用Ｐｌａ基因序列,以特异性片段为引物,建立了检测印鼠客蚤体内鼠疫菌的ＰＣＲ方法。Ｈｉｒｏｋｏ氏等〔２〕（１９９６）...     

聚合酶链反应技术诊断念球菌的进展

多聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测无菌源（血液、脑脊液、腹腔液）标本诊断念 球菌病方面局长迅速。本文阐述了念球功物引物设计、破和ＤＮＡ技术，ＰＣＲ及其产物检测方法，ＰＣＲ的注意事项等方面的研究进展。