TUNEL技术方法的探讨

探讨末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标标记技术（TUNEL）的染色的方法，以期提高特异性与敏感性，采用以去势（经手术切除睾丸）后天数不同的大白鼠前列腺，用TUNEL法染色，观察不同时期的细胞凋亡水平，对经典的TUNEL法进行改良，将染色结果与TUNEL经典法和HE要色法进行对比，结果表明，采用改良法手，阳性细胞明显增加，而且着色深，凋亡指数明显增高（P＜0．01）。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组（SH组）、模型组（IR组）。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降（P〈0.01）;TUNEL法检测显示：与假手术组相比,凋亡指数显著增加（P〈0.01）。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。     

改进的TUNEL技术在检测急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡中的应用

目的：探讨并总结末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）在急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌细胞凋亡检测中的方法学。方法：运用改进的TUNEL法检测大鼠AMI心肌组织中的细胞凋亡。结果：改进TUNEL法能特异地显示AMI大鼠心肌组织凋亡细胞核,对比明显,背景清晰,组织结构与细胞轮廓完整,染色结果稳定可靠,敏感性高,特异性强。结论：改进后的TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡效果理想,值得推广。     

沉默NFBD1表达对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的：研究抑制 NFBD1表达后,对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1凋亡的影响。方法：用NFBD1 shRNA慢病毒感染HNE-1,采用real-time PCR 和Western blot检测NFBD1 shRNA慢病毒对NFBD1的抑制效果;Hoechst33342染色观察细胞核的改变并结合流式细胞仪（flow cytometry,FCM）,TUNEL法检测细胞的凋亡情况。结果：NFBD1 shRNA慢病毒在mRNA和蛋白质水平均能高效、特异性地抑制NFBD1的表达;Hoechst33342染色结果显示,在NFBD1下调组,呈现固缩且边缘化的细胞核数量明显增加（ χ2=5.367;P=0.021）;TUNEL染色结果显示,在ＮＦＢＤ１下调组,显现荧光的凋亡细胞明显增加,FCM检测结果显示,在NFBD1下调组,细胞凋亡率明显增加（ χ2=326.86;P＜0.001）。结论：抑制NFBD1基因的表达后,能有效促进HNE-1凋亡,这为寻求ＮＰＣ的治疗靶点提供新的思路。     

神经细胞凋亡和Caspase-3表达与脑损伤时间的关系

目的观察脑挫伤后神经细胞凋亡和调节因子Caspase-3表达的时序变化,探索损伤时间推断的新方法。方法采用TUNEL和免疫组化染色方法,结合图像分析技术对不同损伤时间组的脑挫伤组织进行染色观察和分析。结果①TUNEL和Caspase-3免疫组化染色的阳性细胞分布在挫伤灶中央及其周围的半影区,与远隔部位和对照组脑组织呈阴性染色形成明显对比;半影区比中央区更显著,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。②脑挫伤后随着损伤时间的延长,半影区TUNEL染色和Caspase-3表达逐渐增强,呈平行关系;48h内两种染色方法的平均积分光密度（IOD）增加与损伤时间呈线性关系（r分别为0．93和0．69）。结论观察脑挫伤后神经细胞凋亡和Caspase-3的表达随损伤时间逐渐增强的变化规律,可以作为损伤时间推断的新方法。     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的形态学观察

目的：探讨在乙醇诱导下发生凋亡时,原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞的形态学变化。方法：用含60mL.L^-1乙醇的培养液持续作用6h诱导人肝癌细胞系HCC－9204凋亡,进行凋亡活细胞的台盼蓝,吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）染色,凋亡细胞固定后的May-Grunwald-Giemsa (MGG),HE染色和透和透射电镜观察,并进行TUNEL法凋亡检测。结果：60mL.L^-1乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的细胞固缩,变圆,胞核和胞质浓染,胞核呈颗粒状,环形或新月体状,胞质可见“出泡”现象等凋亡形态学变化,大部分细胞为台盼蓝拒染,并呈TUNEL阳性着色,部分TUNEL阳性细胞也可见明显的凋亡形态学变化。结论：乙醇可使肝癌细胞产生明显的凋亡形态学变化。TUNEL法可原位同时显示凋亡细胞的形态和分布。     

山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的保护作用

目的：探讨山楂叶总黄酮（FMCL）对脑缺血再灌注(CIR)损伤的保护作用及其可能机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组（舒血宁1.8 mg•kg^-1）及山楂叶总黄酮高、中、低（100 、30和10 mg•kg^-1）剂量组，采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型；流式细胞仪检测神经细胞凋亡率；原位末端标记（TUNEL）法测定神经细胞凋亡；免疫组化染色观察凋亡相关蛋白Fas、细胞色素C(CytC)蛋白表达的变化。结果：与模型组比较，山楂叶总黄酮高剂量组TUNEL染色阳性细胞数明显减少（P<0.01），凋亡率明显下降（P<0.01）；与模型组比较，山楂叶总黄酮高和中剂量组CytC蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01），Fas蛋白表达无明显变化。结论：山楂叶总黄酮可抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，其机制可能与抑制线粒体Cyt C通路的凋亡有关。     

单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的研究兔单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖和凋亡活性的影响.方法 24只5～6月龄的日本大耳白兔被随机分为两组：空白对照组和手术组.手术组通过手术切除右侧髁突建立动物模型,分别于术后2月、4月的时间处死动物,取其左侧（非手术侧）颞颌关节,采用免疫组化染色和TUNEL染色,分别观察非手术侧髁突软骨中增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡细胞的表达和分布.结果免疫组化和TUNEL染色显示与同时间段空白对照组相比,无论是手术组（单侧髁突切除）术后2月,还是手术组术后4月,非手术侧髁突软骨PCNA阳性细胞表达量均降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）;与手术组术后2月相比,手术组术后4月PCNA阳性细胞表达量降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）.结论单侧髁突切除可导致非手术侧髁突软骨细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量增加.     

颈椎间盘髓核组织中TRAIL及DR5的表达与髓核细胞凋亡的相关性研究

目的检测颈椎间盘内髓核组织细胞密度、细胞凋亡率以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及死亡受体5（DR5）的表达。方法实验组30个标本来自脊髓型颈椎病患者前路手术所切取的椎间盘组织（C3-C7）,对照组30个标本为颈椎创伤患者前路手术所取得的椎间盘组织。采用HE染色观察髓核组织中凋亡小体和细胞密度,原位DNA片段末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞率,用免疫组织化学法检测TRAIL、DR5的表达。结果实验组髓核组织中的细胞密度均低于对照组,TUNEL阳性细胞率均高于对照组（P〈0.01）;实验组TRAIL、DR5染色阳性细胞率均高于对照组（P〈0.05）。将两组全部60例颈椎间盘标本合并后进行Pearson相关分析,颈椎间盘TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关（r=-0.969,P〈0.01）;两组髓核内TRAIL、DR5染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关r=0.921和0.755,P〈0.01）。结论细胞密度下降参与了颈椎间盘的退变过程,细胞凋亡是椎间盘髓核细胞减少的原因之一,颈椎间盘组织中存在DR5/TRAIL诱导的凋亡途径。     

利多卡因对急性肺损伤中肺组织细胞凋亡的抑制作用

目的 观察利多卡因对大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型肺组织细胞凋亡的抑制作用.方法 成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组：生理盐水组（n=6）、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组（n=18）、利多卡因＋LPS组（n=18）、利多卡因组（n=6）.取材后进行肺组织石蜡切片苏木精-伊红染色,观察肺组织病理变化.并且应用TUNEL法进行肺组织细胞凋亡的检测.最后LPS组和利多卡因＋LPS组分别取15只大鼠进行生存率的分析.结果 LPS组苏木精-伊红染色结果显示肺泡腔广泛的炎性粒细胞以及红细胞渗出,肺泡正常结构破坏,肺泡间隔增厚以及部分肺不张.TUNEL染色则观察到肺组织上皮细胞大量凋亡.而这些改变在利多卡因＋LPS组则得到明显改善.利多卡因组和生理盐水组,肺组织形态学无明显异常,显微镜下几乎没有找到TUNEL染色阳性的细胞.结论 利多卡因减少LPS诱导的ALI过程中肺组织上皮细胞的凋亡,减轻ALI的程度,改善大鼠的生存率.     

口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞的Fas/FasL表达

目的研究口腔鳞状细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)Fas/FasL的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法和脱氧核糖核酸末端转移酶(TDT)介导的原位末端标记(TUNEL)技术,对38例口腔鳞癌TIL的Fas/FasL表达及TIL和癌细胞的凋亡进行检测,观察TIL的Fas/FasL表达与TIL和癌细胞凋亡的关系。结果TIL的Fas和FasL均有广泛的表达,TILFas表达阳性组的TIL凋亡指数(AI)明显高于Fas表达阴性组(P<0.05),TILFasL表达阳性组的癌细胞凋亡指数与FasL表达阴性组差异无显著性(P>0.05)。结论口腔鳞癌TIL的Fas阳性表达与其凋亡有密切关系,而FasL的阳性表达则与癌细胞凋亡无关。癌细胞可能通过Fas凋亡系统诱导TIL的凋亡并通过某种机制逃避TIL的杀伤。     

Change of apoptotic status in the human colorectal adenoma-carcinoma sequences and its correlation with carcinogenesis and prognosis

Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｐｒｏｃｅｅｄｓｔｈｒｏｕｇｈａｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔｉｃａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｆｏｃｕｓｅｄｎｏｔｏｎｌｙｏｎｔｈｅｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｕｔａｌｓｏｏｎｔｈｅｉｎｈａｂｉｔａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｌｏｓｓ Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｓｓｅｓｓｅｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎａｐｏｐｔｏｔｉｃｓｔａｔｕｓａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｈａｖｉｏｒｄｕｒｉｎｇ…     

腹腔镜手术治疗输卵管妊娠186例分析

目的：探讨腹腔镜手术治疗输卵管妊娠的临床意义,方法：加顾性分析1998年11月－2000年11月间本院收治的186 接受腹腔镜手术治疗的输卵管妊娠患者的临床资料,结果：本组186例患者中,183例在腹腔镜下成功完成手术,3例中转开腹手术,全部病列后72h内体温均恢复正常,3例发生穿刺口愈合不良,1例发生急性胰腺炎,均经相应的治疗后痊愈,结论：腹腔镜手术治疗输卵管妊娠成功率高,创伤小,术后患者恢复快,并发症少,值得在临床推广使用。     

The relationship between apoptosis and the expression of proliferating cell nuclear antigen and the clinical stages in gastric carcinoma

Studies indicated that apoptosis and proliferat-ing cell nuclear antigen( PCNA) might present thetumor's biological characteristics on the molecularlevel[1,2 ] .The abnormal apoptosis and proliferationmight play an important role in the development ofgastric carcinoma[3 ,4 ] ,butthe implication ofapoptosisand PCNA in the clinical stages of gastric carcinomawere very little studied.By using terminal deoxynu-cleotidyl transferase- mediated nick and labelling( TUNEL) technique and PCNA immu…     

新辅助化疗对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

目的:探讨新辅助化疗对乳腺癌肿瘤细胞的凋亡和增殖的影响.方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)及免疫组化的S-P法,分别检测新辅助化疗组和对照组乳腺癌组织中肿瘤细胞的凋亡指数(AI)和乳腺癌肿瘤组织的Ki-67抗原表达.结果:新辅助化疗组肿瘤细胞AI均数为9.26%,比对照组肿瘤细胞AI均数3.36%明显增高(P＜0.01).新辅助化疗组肿瘤细胞Ki-67抗原过表达率为15.63%,比对照组Ki-67抗原过表达率50.0%低(P＜0.05).结论:新辅助化疗能诱导人体乳腺癌肿瘤细胞发生凋亡,并能抑制其增殖.     

细胞凋亡及增殖细胞核抗原表达与大肠肿瘤生物学行为的关系

目的：探讨大肠肿瘤组织中细胞凋亡及增殖细胞核抗原（PCNA）表达与其生物学行为的关系。方法：应用免疫组化S－P法及凋亡细胞TUNEL检测法检测10例正常大肠黏膜，15例大肠腺和62例大肠癌标本中细胞增殖指数（PI）及凋亡指数（PI），并分析其与临床病理学参数间的关系。结果：在正常大肠黏膜，大肠腺瘤和大肠癌组织中PI，AI存在显差异（P＜0．05），腺瘤和腺癌组织AI和PI显高于正常黏膜组织；在腺瘤中，不典型增生I级与Ⅱ-Ⅲ级两组间AI和PI存在显差异（P＜0．05），且癌组织中PI高于均数，AI低于均数组淋巴结转移率明显高于其他组织（P＜0．01）。结论：细胞增殖与凋亡平衡失调是大肠黏膜上皮细胞恶性转化的重要因素，两联合检测对判断大肠肿瘤生物学行为及预后有重要意义。     

多发性骨髓瘤增殖与凋亡的研究

目的了解多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）中瘤细胞凋亡与增殖之间的关系及最终造成浆细胞数目异常增多，形成MM的发病机制。方法运用末端脱氧核着酸转移酶介导的脱氧尿毒三磷酸缺口末端标记（TUNEL）技术，结合HE形态和免疫组化结果，半定量分析12例MM中瘤细胞的凋亡与增殖的情况。结并MM瘤细胞增殖水平低，凋亡水平也低于常见人类肿瘤的平均凋亡水平，在瘤细胞聚积成给节或弥漫浸润时，给节中无TUNEL阳性标记细胞，瘤细胞的凋亡与增殖之间呈正相关（P＜0.05）。结论在MM中，造成瘤细胞数量异常增多形成肿瘤的重要原因是凋亡的减少。     

新辅助化疗对直肠癌细胞凋亡与增殖的影响

目的:探讨新辅助化疗(FOLFOX方案)对直肠癌细胞凋亡与增殖的影响。方法:选择进展期直肠癌患者76例,随机分为两组:常规手术组和新辅助化疗 手术组,各38例。分别应用TUNEL法和免疫组织化学染色法检测直肠癌细胞的凋亡(AI)与增殖(PI),并计算二者之间的比值(AI/PI)。结果:新辅助化疗 手术组与单纯手术组AI、PI差异具有统计学意义(P<0.01),AI/PI差异有统计学意义(P<0.01)。结论:新辅助化疗(FOLFOX方案)可明显促进直肠癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

Apoptosis in Primary Oral Squamous Cell Carcinomas without Lymph Node Metastases

In recent years, studies of the significance ofapoptosis or programmed cell death represent a bi ologically important field of research that has at tracted great attention. Tumor progression is char acterized by the imbalance between cell prolifera tion and apoptosis. Recently, in patients withtumors at various sites, the apoptotic index (AI)has been shown to correlate with various histologicparameters, biologic parameters, and patient sur vival.In this study, we have i…     

慢性低O2高CO2对小鼠神经元凋亡及硝基酪氨酸表达的影响

目的:探讨慢性低O2高CO2对小鼠皮层及海马神经细胞凋亡及硝基酪氨酸表达的影响.方法:雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为对照组、低O2高CO22 w组和低O2高CO24 w组,采用原位末端标记法检测皮层和海马区神经细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),免疫组织化学染色检测皮层和海马区细胞硝基酪氨酸的表达.结果:慢性低O2高CO22 w组和4 w组小鼠皮层和海马AI及硝基酪氨酸表达均明显高于对照组,两者呈正相关.结论:慢性低O2高CO2可以诱发小鼠皮层和海马神经元凋亡,可能与其促进硝基酪氨酸表达有关.