改良NADPH—d和AchE酶组织化学法诊断先天性巨结肠

目的：探讨进一步改良后的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH—d）和乙酰胆碱酯酶（AchE）酶组织化学染色法诊断先天性巨结肠（HD）的优势,以期提高HD术前及术中诊断的准确率。方法：取HD患儿术中切除的结肠标本18例,其中女7例,男11例,平均年龄（8．6±3）月。标本分狭窄段、移行段、扩张段,其冰冻切片分别用改良的NADFH—d和AchE酶组织化学染色法进行染色,与常规HE染色进行比较,并用肠神经元特异标记物β-Ⅲ Tubulin（TUJ-1）行免疫荧光及蛋白基因产物9．5（proteingeneproduct9．5,PGP9．5）行免疫组化检查论证改良方法的特异性。结果：NADPH—d法能快速确定扩张段近端切缘是否存在神经节细胞,诊断HD的阳性率为94．4％（17／18）;AchE法对于HD狭窄段黏膜下异常增生的神经丛诊断阳性率为88．9%（16／18）;两组间诊断阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。耗时方面NADPH-d法为（7．0±1．7）min,AchE法为（30．9±2．2）min,组间比较差异有统计学意义（P〈0．001）。上述两种改良方法与TUJ-1及PGP9．5对照结果一致。结论：NADPH—d法能快速确定肠管切缘是否有神经节细胞分布,适用于术中快速诊断HD;AchE法适用于术前直肠黏膜层的活检诊断。     

NADPH-d染色法术中快速诊断先天性巨结肠

目的:评价NADPH-d的快速染色法在术中诊断先天性巨结肠(Hirschprung’s disease,HD)及确定病变段肠管范围的优越性。方法:标本采自确诊HD患儿术中切除的结肠37例,其中男27例,女10例,平均年龄11.6个月。标本分狭窄段、移行段、扩张段,分别用NADPH-d的快速染色法与冰冻切片HE快速染色法进行配对比较研究。结果:NADPH-d染色法操作简单,易掌握,切片不需事先固定,无需水化、脱水等繁琐流程。冰冻切片HE染色法30 min出结果,NADPH-d法能在10 min内出结果,两者阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NADPH-d染色法能在术中快速诊断HD并确定手术中切缘是否已达到正常肠管,且操作流程简单,阳性神经节细胞识别容易,较冰冻切片HE染色法有一定优越性。     

先天性巨结肠肠壁神经中NSE和nNOS表达及其临床意义

目的 探讨先天性巨结肠(HD)肠壁神经中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经元型一氧化氮合酶(nNOs)阳性表达情况及其意义.方法 结合光镜下肠壁神经节细胞的形态特征,应用免疫组化技术对25例临床及病理诊断为HD患儿的病变肠段行NSE和nNOs染色,比较它们的染色结果和分布特点.结果 扩张段结肠壁中NSE在神经丛内神经节细胞阳性表达,而神经纤维、施万细胞及周围细胞有弱阳性表达,nNOs阳性神经节细胞和神经纤维形态分布良好;狭窄段中无NsE及nNOs阳性神经节细胞,散在分布细小nNOs阳性神经纤维以黏膜层为多.结论 神经分布异常是HD发病的机制之一,NSE和nNOS的协同检测可作为HD明确诊断的重要手段.     

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶染色法术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)酶组织化学染色法在术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值。方法选取2015年1月至2017年3月新疆乌鲁木齐儿童医院收治的37例先天性巨结肠患儿术中切除的肠管为观察标本,以同期因坏死性小肠结肠炎行结肠造瘘术患儿的切除肠管标本作为实验对照,将先天性巨结肠患儿的肠管标本分为扩张段和痉挛段,进行常规冰冻连续切片,采用NADPH-d进行染色(NADPH-染色组),显微镜下观察神经丛及神经节细胞的染色情况,并与术中快速苏木精-伊红(HE)染色法(HE染色组)进行配对比较。结果 37例患儿中,NADPH-d染色诊断阳性36例(97.3%),阴性6例(2.7%);HE染色诊断阳性34例(91.9%),阴性3例(8.1%);2种染色方法均诊断阳性或阴性者分别为34例、1例,另2例NADPH-d染色诊断阳性者HE染色诊断为阴性;2种染色方法的诊断结果比较差异无统计学意义(χ~2=0.059,P>0.05)。NADPH-d染色组扩张段标本低倍镜下可见呈串珠状分布的神经丛样结构,高倍镜下可见细胞质着紫蓝色、细胞核空白无着色的细胞,HE复染显示串珠状分布的紫蓝色组织为肌间神经丛,黏膜下未见着紫蓝色的神经丛;高倍镜下可清楚分辨核大、深染、细胞质略呈蓝色的神经节细胞。NADPH-d染色组痉挛段标本镜下背景清晰,无任何着色,未见神经丛及神经节细胞。HE染色组扩张段标本肌间神经丛内隐约可见神经节细胞,痉挛段肌间及黏膜下可见分布杂乱的神经丛,其间无神经节细胞。结论 NADPH-d染色法诊断婴幼儿先天性巨结肠快速、精确、易操作,NADPH-d法与术中快速HE染色法联用能提高诊断效率,准确判断病变段肠管的切除范围。     

钙视网膜蛋白在先天性巨结肠病理诊断中的应用

目的研究钙视网膜蛋白(calretinin,CR)免疫组织化学染色及胆碱酯酶染色(acetylcholinesterase staining,AchE)在先天性巨结肠(hirschsprung disease,HD)病理诊断中的作用对比,并探讨在直肠黏膜活检标本不足时CR的诊断作用。方法采用回顾性研究的方法对比163例直肠黏膜活检CR免疫组织化学染色与AchE染色诊断HD准确性及敏感性。研究26例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检标本中,CR免疫组织化学染色辅助病理诊断的准确率。结果在年龄<3个月的病例组中,CR免疫组织化学染色敏感度显著高于AchE染色。CR免疫组织化学染色能够准确诊断21例只含有1个黏膜下神经丛的直肠黏膜活检HD病例。结论 CR免疫组织化学染色是一种优于AchE染色的直肠黏膜活检诊断HD的必要辅助方法。     

先天性巨结肠患者RET和血管内皮素-β受体的表达及其临床意义

目的 探讨RET抗体、血管内皮素-β受体（endothelin-β receptor，EDNRB）抗体在先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）患者体内的分布情况及其意义。方法 结合光镜下肠壁的形态特征，并应用免疫组化技术对33例临床病理确诊为先天性巨结肠的病变肠段及10例正常结肠行RET抗体、EDNRB抗体免疫组化染色，比较RET和EDNRB的染色结果和分布特点。结果 RET在肠段神经纤维上表达，HD狭窄段中表达减少（P〈0．01）；EDNRB在肠段血管上表达，长、短型HD中表达减少（P〈0．01）。结论 RET、EDNRB基因与HD的发生及类型相关。可为HD的诊断与治疗提供新的研究方向。     

新生儿坏死性小肠结肠炎后肠狭窄合并先天性巨结肠的诊治研究

目的:探讨新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)后肠狭窄合并先天性巨结肠(HD)的诊治经验。方法:回顾性分析诊治的112例NEC患儿临床资料,共计37例肠狭窄患儿,按狭窄部位分为两组:脾曲近端狭窄组(PSCS)18例和脾曲远端狭窄组(DSCS)19例。收集患儿临床资料,分别通过直肠壁吸附活检术、术后病理学查找直肠末端和狭窄段肠管神经节细胞数量诊断是否合并先天性巨结肠。术后随访腹胀,便秘、小肠结肠炎并发症发生情况。结果:NEC合并HD共5例,占总NEC患儿4.5%,HD在NEC后肠狭窄中发病率为13.5%。NEC后最早出现肠狭窄时间为38 d,主要病变部位为小肠,最长时间204 d,病变部位主要为升结肠和横结肠。狭窄段肠管肠壁僵硬,增厚,管腔闭塞,闭塞管腔之间内见大量脓液,系膜血管闭塞,部分系膜缺失。直肠壁吸附术检查以及肠狭窄段病理检查发现PSCS组直肠神经节细胞与DSCS组神经节细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PSCS组诊断HD 1例,DSCS组诊断HD 4例,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。所有患儿术后随访1～3年,两组患儿术后便秘、腹胀、小肠结肠炎并发症的发生率以及体重增长比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NEC后肠狭窄患儿因警惕合并HD的可能,再次手术之前通过直肠壁吸附活检术可进一步明确诊断。     

小儿先天性巨结肠类缘病临床分析

目的 探讨小儿先天性巨结肠类缘病(HAD)的临床特点、病理特征及处理原则.方法回顾性分析2000年2月～2009年2月在笔者所在医院行手术治疗的先天性巨结(HD)肠患儿182例临床资料,包括临床表现、手术方式及术后HE染色切片.其中HAD 38例,根据不同情况选择合适的手术方式.结果 3例死于多次手术后肠功能异常、感染;2例术后需回流洗肠协助排便;2例失访;其余患儿排便情况满意.结论术前疑似HAD的患儿应尽量明确诊断,以便选择合适的术式,避免因多次手术导致患儿预后不良;HD根治术后不满意者,应及时复习HE切片,以免误诊.     

NSE和S-100在先天性巨结肠及其同源病诊断中的应用

目的:探讨神经元和神经胶质细胞标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)与S-100(soluble-protein100,S-100)在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)及其同源病(Hirschsprung's disease allied disorders,HAD)诊断中的作用。方法:对45例临床诊断为HD的手术切除标本进行常规HE染色,观察肠神经元及神经节细胞形态和数量的变化,并选择成人结肠肿瘤标本切缘正常组织作对照组进行比较。对HE染色光镜下可疑HD(即HAD)的21例标本进行NSE、S-100蛋白免疫组化测定。结果:对照组结肠壁神经丛中可见染色深浅不一的NSE免疫反应性神经节细胞,神经纤维均匀分布在肠壁各层;神经节细胞胞体对S-100蛋白则表现为细胞状"空白区"。HAD组结肠壁分化异常,狭窄段结肠壁神经丛内NSE神经节细胞中NSE呈明显阳性反应,S-100染色可见数量较少的细胞状"空白区"。结论:HD的诊断主要根据病理特征而定,在HE染色基础上结合NSE及S-100蛋白免疫组织化学染色能提高确诊率,为HD和HAD鉴别诊断提供依据。     

先天性巨结肠术中快速诊断方法的研究进展

先天性巨结肠(HD)是由于肠道神经系统先天性发育异常导致的肠道疾病。因肠道神经系统病变使受其支配的肠道运动功能障碍,因此患儿常出现反复便秘、腹胀、呕吐等症状。该病的治疗依赖于手术切除病变肠段。病变肠段切除的程度直接关系到预后,如为追求完全切除病变肠段导致切除肠管过多,常使患儿术后出现慢性腹泻、营养不良,且加大了再次手术的风险;而肠管切除过少,未完全切除病变肠段则未达手术目的,需再次手术。因此,在HD的诊治中,如有高效、快速的术中诊断方法确定切缘有无神经节细胞对处理疾病意义重大。     

肠神经元发育异常临床分析

为探讨肠神经元发育异常(INDB)的临床特点、诊断和治疗.同济医院自1997年1月至1999年6月共收治15例INDB患者,其中单纯INDB9例,合并先天性巨结肠(HD)6例;诊断依据①临床症状便秘;②钡灌肠;③测压;④组化;⑤病检.治疗根治术13例,回肠造瘘1例,直肠内括约肌部分切除1例.对12例进行随访,时间6个月至2年6个月,平均1年6个月,11例效果好(占91%).表明INDB临床症状和HD相似,而病理与之截然不同,因此正确认识此病极为重要.     

皮肤洗消剂PF2009对化学毒剂的消毒作用

目的 通过检测皮肤洗消剂PF2009对化学毒剂的体外消毒效率,对皮肤洗消剂PF2009的消毒效果进行评价.方法 将皮肤洗消剂PF2009按比例分别同梭曼(GD)、维埃克斯(VX)、芥子气(HD)混合,采用色谱分析法或T-135法于不同作用时间检测化学毒剂的剩余量.将皮肤洗消剂PF2009及其基质分别按相同比例与GD、V...     

GAP－43免疫组化和AChE染色在大鼠坐骨神经损伤和再生实验中的应用

采用ＰAP免疫组化和ＡＣｈＥ染色技术对２５只大鼠坐骨神经损伤后不同时期的近段和远段神经的生长相关蛋白（ＧＡＰ－４３）表达和再生情况作了观察。结果显示：（１）坐骨神经切断损伤后产生免疫反应阳性，近段神经以７ｄ组染色最强，远段神经以１４ｄ组最强；（２）神经切断处和近切口处的远段神经ＡＣｈＥ染色有逐渐增强趋势，单位面积阳性纤维数从７ｄ后逐渐增加。根据结果，本文对ＧＡP－４３的表达规律和ＡＣｈＥ染色的应用及其意义进行探讨。     

甲基强的松龙对脊髓半横断大鼠腓肠肌乙酰胆碱酯酶表达的影响

 目的 探讨注射甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓半横断后运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法 Wistar雄性大鼠96只,包括假手术组(A组,n=16)、脊髓半横断组(B组,n=40)和脊髓半横断后MP治疗组(C组,n=40),B、C组分别作右侧脊髓半横断术,C组术后MP干预;术后1 d、3 d、1周、2周、4周分别取右下肢腓肠肌制作冰冻切片,铜-铁氰化物改良染色法检测AChE的表达,比较各组标本阳性表达区的平均光密度值。结果 3组大鼠腓肠肌冰冻切片中均有表达AChE的棕色染色区;脊髓半横断术后1 d,3组大鼠腓肠肌切片中AChE染色区的平均光密度值无统计学差异(P > 0.05);术后3 d,B、C组AChE染色区平均光密度值均低于A组,差异有统计学意义（P 0.05);术后1周、2周,B组AChE染色区平均光密度值低于C组,B、C组均低于A组,差异均有统计学意义（P 0.05),B组仍维持低水平,平均光密度值低于A、C组（P<0.05）。结论 脊髓半横断后运动终板AChE水平下降,MP早期干预有助于骨骼肌运动终板AChE表达水平的恢复。     

改良NADPH-d和AchE酶组织化学法诊断先天性巨结肠

目的 ：探讨进一步改良后的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH-d）和乙酰胆碱酯酶（AchE）酶组织化学染色法诊断先天性巨结肠（HD）的优势,以期提高HD术前及术中诊断的准确率。 方法：取HD患儿术中切除的结肠标本18例,其中女7 例,男11例,平均年龄（8.6±3）月。标本分狭窄段、移行段、扩张段,其冰冻切片分别用改良的NADPH-d和AchE酶组织化学染色法进行染色,与常规HE染色进行比较,并用肠神经元特异标记物β-III Tubulin（TUJ-1）行免疫荧光及蛋白基因产物9.5（protein gene product 9.5,PGP9.5）行免疫组化检查论证改良方法的特异性。结果：NADPH-d法能快速确定扩张段近端切缘是否存在神经节细胞,诊断HD的阳性率为94.4%（17/18）;AchE法对于HD狭窄段黏膜下异常增生的神经丛诊断阳性率为88.9%（16/18）;两组间诊断阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。耗时方面NADPH-d法为（7.0±1.7）min,AchE法为（30.9±2.2）min,组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）。上述两种改良方法与TUJ-1及PGP9.5对照结果一致。结论：NADPH-d法能快速确定肠管切缘是否有神经节细胞分布,适用于术中快速诊断HD;AchE法适用于术前直肠黏膜层的活检诊断。     

缺氧对大鼠纹状体边缘区AChE和NADPH—d含量的影响及其与学习记忆的关系

目的 观察大鼠缺氧后纹状体边缘区（MrD)的病理改变及乙酰胆碱酯酶（AChE）和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）的含量改变，探讨缺氧对纹状体边缘区的损害及与学习记忆的关系。方法 建立40只大鼠缺氧模型（予氧含量为8％、氮气含量为92％的混合气，4h/d，连续5d）并对其进行Y迷宫实验，缺氧5d后处死动物观察其脑组织切片HE染色和AChE和NADPH－d组织化学染色情况并与对照组比较。结果 （1）大鼠缺氧前后Y迷宫实验成绩差异显著。（2）AChE组化结果显示，正常大鼠纹状体可见大量AChE阳性反应纤维和少量阳性细胞，MrD内AChE染色略谈；缺氧后纹状体其他部分AChE染色无明显变化，而MrD则明显加深。（3）NADPH－d组化反应显示，MrD内NADPH－d阳性细胞多呈梭形，纹状体内阳性细胞数较其他区域多；缺氧后阳性细胞形态变化不明显，但数目明显少于正常对照。结论 缺氧可导致大鼠学习记忆功能下降以及MrD内AChE、NADPH－d染色的明显改变。这些改变较纹状体其他区域更为明显，表明MrD对于缺氧较敏感，缺氧后AchE和NSADPH的减少可能与学习记忆功能的下降有关。     

小儿血液透析治疗分析

目的：探讨血液透析（HD）治疗小儿急性肾小球肾炎并急性肾功能衰竭（ARF）的方法及临床意义。方法：总结12例患者进行26次HD的方法并分析。结果：12例患者分别进行1－3次HD后尿毒症症状消失，肾功能明显改善，全部痊愈出院。透析过程中无严重并发症发生。结论：HD治疗ARF疗效迅速、安全、可靠。HD成功的关键在于血管通路的建立及血容量的稳定。     

S—100，SY在先天性巨结肠中的表达及其临床意义

目的：探讨S100与SY在先天性巨结肠病(Hirschsprung’s disease，HD)的分布情况及其意义。方法：结合光镜下肠壁神经节细胞的形态特征，并应用免疫组化技术对35例临床拟诊为先天性巨结肠的病变肠段行S—100蛋白(soluble—protein，S—100)，突触导素(Synaptophysm，SY)染色，比较它们的染色结果和分布特点。结果：SY只在神经节细胞和神经纤维有表达，S—100在神经丛内的神经纤维、施万细胞及周围细胞有表达，对神经节细胞则无表达。结论：S—100，SY可作为HD明确诊断的标记物，对临床HD的正确治疗提供依据。