转化生长因子β1对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义。方法：采用非放射性细胞增殖检测,3H－胸腺嘧啶摄入,3H－哺氨酸摄入及DNA定量分析方法,观察TGFβ1对体外培养的生长融合后早期（24h)的病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的增殖活性和胶原合成的作用。结果：经TGFβ1作用后,来自瘢痕的成纤维细胞的3H－胸腺嘧啶核苷和3H－脯氨酸掺入增强（P＜0．01）,但来自正常皮肤的无明显变化（P＞0．05）。结论：在细胞生长融合后早期（24h),TGFβ1对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有正性调控作用,其在瘢痕的形成中可能具有重要作用。     

反义TGF-β1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的研究

目的 应用反义技术抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）体外增殖,为应用基因治疗手段改善创伤愈合提供实验依据。方法 应用脂质体将反义TGF－β1转染至KF,通过细胞计数绘制细胞生长动力学曲线,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 ①转染反义TGF－β1的KF体外增殖明显降低。②与未转染反义TGF－β1的KF相比,转染反义TGF－β1的KF凋 亡发生率明显增高（差异有显著性意义,P＜0．05）。结论 反义TGF－β1可抑制体外培养的KF增殖,并促进KF的凋亡。     

hTGFβ_1基因转染对NIH3T3成纤维细胞增殖的影响

目的　探讨在体外培养条件下转化生长基因 β1(hTGFβ1)转染对成纤维细胞生物学功能的影响。　方法　用脂质体介导共转染法将hTGFβ1质粒DNA转染至NIH 3T3成纤维细胞中 ,并设NIH 3T3转染空载体组和NIH 3T3对照组 ,用细胞生长计数、四唑氮蓝流式细胞法 (MTT)和软琼脂集落形成试验分别进行检测。　结果　 (1)转染hTGFβ1后 ,成纤维细胞的生长速度下降 ,以 4～ 6d尤为显著。DNA合成下降 ,G1比例增高 (从 39.9%升至 6 6 .2 % ,P <0 .0 5 ) ;(2 )转染空载体组与对照组的各细胞周期未见明显的变化 ;(3)MTT法与细胞计数法间有良好的相关性 (相关系数达 0 .992 ) ;(4 )转染hTGFβ1后 ,成纤维细胞的软琼脂克隆形成率明显下降 (从 1.18%降至 0 .5 5 % ,P <0 .0 5 )。　结论　hTGFβ1基因转染可抑制成纤维细胞的增殖。原因可能是TGFβ1阻碍了成纤维细胞的DNA合成 ,即G1期与S期之间发生了阻碍     

川芎嗪对成纤维细胞增殖及TGF-β1和bFGF表达的影响

目的:研究川芎嗪对体外培养大鼠成纤维细胞增殖及碱性成纤维细胞因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)表达的影响,从而探讨川芎嗪抑制瘢痕形成的作用机制.方法:体外分离培养大鼠皮肤成纤维细胞,采...     

b-FGF和TGF-β1对体外培养的软骨细胞增殖的影响

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)对体外培养的软骨细胞增殖的影响。方法:细胞取自猪耳弹性软骨,体外培养原代至第6代软骨细胞,将培养液中加入TGF-β1或/和b-FGF作用于软骨细胞,并用MTT比色分析法对其增殖行为进行分析,探讨两种因子对软骨细胞增殖行为的影响。结果:b-FGF明显促进原代至第3代软骨细胞的增殖,并逐渐减弱,对第4代细胞无增殖作用,TGF-β1仅促进原代软骨细胞的增殖,TGF-β1和b-FGF联合应用,其刺激细胞增殖的作用明显低于b-FGF单一作用。结论:b-FGF显著促进体外培养的软骨细胞的增殖,主要作用于原代至第2代软骨细胞,明显强于b-FGF和TGF-β1联合应用。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

hTGFβ1基因转染对NIH 3T3成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To investigate the influence of hTGFbeta(1) ene transfection on the proliferation of in vitro cultured NIH 3T3 fibroblast. METHODS: Lipofictin mediated co-transfected method was employed to transfect hTGFbeta(1) plasmid DNA into NIH 3T3 fibroblasts of the rats. Cell growth counting method, MTT, flow cytometry (FCM) and soft agar clone forming method were adopted to examine the biology of the transfected cells. RESULTS: (1) Fibroblast growth slowed down after hTGFbeta(1) transfection, especially on 4th to 6th days after the transfection, which was accompanied by decreased synthesis of DNA as indicated by the increase of G(1) phase percentage (from 39.9% to 66.2% P < 0.05) and the decrease of S phase percentage (from 40.2% to 26.8%, P < 0.05); (2) There was no evident change of all the phases in a cell cycle in the blank load transfection group and in control group. (3) There was a good correlation between MTT and cell counting method (co-efficient 0.992) (4) The formation rate of the soft agar clone of fibroblast decreased from 1.18% to 0.55% (P < 0.05) after hTGFbeta(1) transfection. CONCLUSION: hTGFbeta(1) gene transfection could inhibit fibroblast proliferation, which might be related to the interference of TGFbeta(1) with the DNA synthesis of fibroblasts.     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨microRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:miR-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;miR-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

β1转化生长因子对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白及其受体α5β1整合素表达的影响

目的　研究 β1转化生长因子 (TGF β1)对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白 (FN)及其受体α5β1整合素表达的影响 ,探讨TGF β1、FN及其受体α5β1整合素在增生性瘢痕形成发展中的作用。方法　采用细胞培养、ELISA法、免疫组织化学、图像分析技术 ,观察浓度分别为 0、5、10、2 5、5 0、10 0 μg/L的TGF β1作用下 ,瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素表达的变化。结果　TGF β1浓度在 10～ 5 0μg/L之间时 ,可明显刺激瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素的表达 ,与对照组相比较 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,其作用呈一定的剂量效应关系 ,随着TGF β1浓度增加 ,促合成作用也随之增加 ,浓度在 10 0 μg/L时 ,作用达到饱和。 结论　TGF β1作用下FN及其受体α5β1整合素在成纤维细胞中的过度表达可能与增生性瘢痕形成有关。     

TGF-β_1影响人牙周膜成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1的初步研究

目的：研究转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在体外对人牙周膜成纤维细胞（human peri-odontal ligament fibroblasts,HPDLFs）分泌基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）的影响,进而探讨TGF-β1对HPDLFs分泌MMP-1的调控作用,以期为通过生物学途径建立防治正畸过程中牙根吸收的有效方法提供理论依据。方法：原代培养HPDLFs,取传代至第5代HPDLFs实验。设立TGF-β1工作浓度梯度：0.03ng/ml、0.05ng/ml、0.07ng/ml、0.09ng/ml;0ng/mlTGF-β1为空白对照组;选取4h、8h、12h、24h、48h5个时间点收获上清液。双抗体夹心酶联免疫吸附实验（enzyme-linked-immunosorbent serologic assay,ELISA）法检测各样本中MMP-1含量。采用多元线性回归方法分析实验结果。结果：MMP-1分泌量与TGF-β1作用时间总体上存在时间依赖性,具有统计学差异,P＆lt;0.05。但各作用时间下MMP-1分泌量与TGF-β1工作浓度并没有表现出一致的剂量依赖关系;4h时各实验组MMP-1分泌量随TGF-β1浓度的递增而下降;8h、12h、24h时,各实验组MMP-1分泌量与TGF-β1工作浓度基本呈正相关;48h时各组MMP-1含量变化较大没有明显趋势。结论：MMP-1分泌量与TGF-β1作用时间存在显著时间依赖性,TGF-β1可通过促进MMP-1分泌参与正畸过程中牙根吸收的发生和发展。     

体外培养人成纤维细胞转化生长因子-β1自分泌规律的研究

目的　探讨体外培养人成纤维细胞转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )的自分泌规律。方法　应用健康人包皮环切术所得包皮 ,通过体外成纤维细胞传代培养共 12代 ,运用 EL ISA法 ,分别检测不同代次成纤维细胞 TGF-β1 浓度 ,并测定第 6代成纤维细胞在不同时间培养上清液中 TGF-β1 的浓度。结果　自第 3代开始 ,成纤维细胞培养上清液可检测到 TGF-β1 ,并逐渐升高 ,至第 6代达分泌高峰 (45 0 ng/ L ) ,第 11、12代不能测到 ;而第 6代成纤维细胞 ,培养上清液中 TGF-β1 含量以第 5天的检测值最高 (6 80 ng/ L ) ,是第 1天检测值 (2 80 ng/ L )的 2 .5倍。结论　成纤维细胞 TGF-β1 自分泌能力 ,是由弱到强再逐渐减弱的过程 ,有自我调节能力     

bFGF和TGF-β1对原代培养的前列腺间质细胞的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)在良性前列腺增生(BPH)中的作用。方法:培养了人BPH间质细胞,采用MTT法检测无血清培养的间质细胞的增殖,用免疫组化方法检测平滑肌细胞表型变化,观察不同浓度bFGF和TGF-β1对培养的人BPH间质细胞的影响。结果:bFGF促进间质细胞增殖(P<0.05、P<0.01),较高浓度时(10μg/L)降低平滑肌细胞表型表达;TGF-β1(>0.1μg/L)抑制间质细胞增殖并增加平滑肌细胞表型表达(P<0.05、P<0.01);5μg/L的bFGF与0.001μg/L和0.01μg/L TGF-β1作用间质细胞,促进细胞增殖(P<0.01),与0.1μg/L,1μg/L及10μg/L TGF-β1作用间质细胞,抑制细胞增殖,0.1μg/L时对细胞的抑制作用轻微(P>0.05),1μg/L及10μg/L时出现明显的抑制(P<0.01),同时TGF-β1在较高浓度时(>1μg/L),平滑肌细胞表型表达明显增加(P<0.01)。结论:bFGF以时间和浓度依赖的方式促进培养的增生前列腺间质细胞的增殖,并减少平滑肌细胞表型表达;TGF-β1抑制间质细胞的生长并诱导间质细胞向平滑肌细胞分化,两者共同在BPH的形成机制中发挥着重要作用。     

TGF—β1表达对成纤维细胞胶原分泌影响的实验研究

目的 通过siRNA干扰成纤维细胞中TGF-β1（TGF-β1）的表达,探讨其对成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法 将siRNA转染兔成纤维细胞,通过RT-PCR,检测siRNA对兔TGF-β1表达的干扰效果,并选筛选出有干扰效果的siRNA.把筛选出的有最佳干扰效率的siRNA,重新转染兔成纤细胞,分别取成纤维细胞培养液行ELISA检测,观察细胞培养液中合成Ⅰ型胶原蛋白变化情况.结果 和对照组相比,siTGF-β1对成纤维细胞有明显的干扰效果;siTGF-β1转染成纤维细胞后,转染组细胞分泌Ⅰ型胶原浓度曲线明显低于空白细胞组,胶原蛋白合成明显降低.结论 siRNA可通过干扰TGF-β1的表达抑制成纤维细胞I型胶原蛋白的分泌,从而抑制瘢痕生成,为临床上尿道瘢痕的基因治疗提供了理论依据.     

凝血酶受体激活肽和凝血酶对人成纤维细胞释放TGF-β和VEGF的影响

目的探讨凝血酶受体激活肽TP508和α-凝血酶对体外培养的人成纤维细胞Lu13释放转化生长因子-β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,以了解其促进创面愈合的部分机制. 方法在体外培养融合的Lu13中,加入不同浓度的凝血酶和TP508,置培养箱培养一定时间后,收集上清液离心,采用ELISA法测定TGF-β1、TGF-β2和VEGF的含量. 结果α-凝血酶能显著促进Lu13释放TGF-β1;单纯TP508使Lu13释放TGF-β1显著减少(P<0.01),与小剂量凝血酶复合应用,对Lu13释放TGF-β1有一定协同作用.经凝血酶处理后,Lu13 释放TGF-β2也显著增高(P<0.05).在较大剂量(100 μg/ml)时,TP508对Lu13释放TGF-β2呈轻度抑制作用(P>0.05).经凝血酶处理后,VEGF释放量显著增加, TP508使Lu13释放VEGF减少. 结论凝血酶可刺激Lu13释放TGF-β1、TGF-β1和VEGF,TP508抑制上述生长因子释放.TP508对TGF-β1释放的抑制作用,可能有助于减少瘢痕形成,提高创面愈合质量.     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

糖肾宁对高糖培养肾近端小管上皮细胞FN分泌及TGF-β1 mRNA表达作用

目的研究中药复方糖肾宁对高糖诱导的肾近端小管上皮细胞转化生长因子β1（TGF-β1）表达和分泌纤维连接蛋白（FN）的影响,探讨其治疗糖尿病肾病（DN）的机制。方法分别采用RT-PCR和ELISA方法检测不同时间下高糖对肾近端小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达和分泌FN的作用,及糖肾宁药物血清对上述指标的影响。结果高糖呈时间依赖性增加肾小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达,高糖培养24h后细胞分泌FN也明显增多,加入糖肾宁药物血清后上述指标均有下降（P〈0．05）。结论糖肾宁抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1和FN表达可能是其治疗DN的分子机制之一。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的 观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，并应用三七总甙进行干预，用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化，用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果与对照组相比，三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达，并使细胞停滞于S期，而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少（P〈0．01）。结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达，可能成为防治增生性瘢痕的药物。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用.方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并应用三七总甙进行干预,用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化,用流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果与对照组相比,三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达,并使细胞停滞于S期, 而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少(P＜0.01).结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达,可能成为防治增生性瘢痕的药物.     

转化生长因子β1与碱性成纤维生长因子与儿童先天性胆管扩张症的关系

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和碱性成纤维生长因子(b FGF)与儿童先天性胆管扩张症(CBD)的关系。方法:采用免疫组化方法检测85例CBD患儿病理标本中TGF-β1和b FGF蛋白表达。结果:TGF-β1和b FGF蛋白在不同胆管扩张症患儿的胆管壁、胆囊壁均有不同程度的表达,两者在胆管壁的表达大于胆囊壁,且不同分型、亚型间的表达程度有明显差异,但均高于正常胆管壁与胆囊壁,其中II型中两者表达最强(均P0.05);TGF-β1与b FGF蛋白CBD胆管壁与胆囊壁中的表达随黏膜细胞脱落程度、增生肥厚程度,炎症细胞浸润程度加重而升高(均P0.05);TGF-β1与b FGF蛋白在CBD胆管壁与胆囊壁中的表达均呈明显正相关(r=0.893;r=0.953,均P0.05)。结论:TGF-β1与b FGF可能在CDB的发生发展中起了重要的协同作用,有望为从分子生物学角度治疗CBD提供新的途径。