HPLC测定异维A酸有关物质

目的 建立HPLC测定异维A酸有关物质的方法。方法 色谱柱为NUCLEOSIL 100-3 C₁₈（4.6 mm×150 mm,3 μm）,以甲醇-水-冰醋酸（770：225：5）为流动相,流速为1.0 mL·min^-1;柱温为25℃,检测波长为355 nm。结果 异维A酸峰与杂质H、I、维A酸、强制降解杂质峰分离良好;异维A酸、杂质H、I和维A酸的线性范围分别为0.000 545 5~21.82 μg·mL^-1（r=0.999 9）,0.002 856~7.14 μg·mL^-1（r=0.999 0）,0.002 789~6.97 μg·mL^-1（r=0.999 1）、0.017 07~22.76 μg·mL^-1（r=0.999 6）;检测限分别为0.27,0.60,0.65,5.50 ng·mL^-1,定量限分别为0.55,2.85,2.80,17.00 ng·mL^-1;杂质H、I和维A酸的平均回收率分别为101.57%,102.02%,101.03%,RSD分别为0.5%,0.8%,1.5%。结论 建立的HPLC方法准确、专属性强,可用于异维A酸有关物质的测定。     

HPLC波长切换法同时测定心神安胶囊中9种成分的含量

目的 建立HPLC波长切换法同时测定心神安胶囊中9种成分的含量。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）,梯度洗脱;流速0.9 mL·min^-1;检测波长分别为320 nm[检测远志（口山）酮Ⅲ、3,6''-二芥子酰基蔗糖]、203 nm （检测人参皂苷Rb₁、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷XVⅡ）和254 nm （检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素）;柱温25℃。结果 远志（口山）酮Ⅲ、3,6''-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Rb₁、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷XVⅡ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在2.070~41.40 μg·mL^-1（r=0.999 2）、3.860~77.20 μg·mL^-1（r=0.999 6）、11.29~225.8 μg·mL^-1（r=0.999 8）、5.070~101.4 μg·mL^-1（r=0.999 9）、19.86~397.2 μg·mL^-1（r=0.999 5）、1.280~25.60 μg·mL^-1（r=0.999 1）、0.960 0~19.20 μg·mL^-1（r=0.999 3）、0.670 0~13.40 μg·mL^-1（r=0.999 7）、2.580~51.60 μg·mL^-1（r=0.999 1）内线性关系良好,平均回收率分别为98.04%,99.26%,99.05%,97.42%,100.0%,98.27%,97.81%,96.84%和99.86%,RSD分别为1.28%,0.82%,1.43%,1.43%,0.86%,1.26%,1.38%,1.16%和0.69%。结论 本方法操作简便、准确、重复性好,能够对心神安胶囊中9种成分进行同时含量测定,为提高和完善心神安胶囊的质量标准提供了有效方法。     

基于斑马鱼的香青兰总黄酮整体发育急性毒性评价研究

目的 利用模式生物斑马鱼研究香青兰总黄酮（TFDM）整体发育急性毒性。方法 采用发育至48 h的斑马鱼暴露于5、10、20、40、42、44、46、48、50、100 μg·mL^-1的TFDM,分别于暴露后24、48 h（24、48 hpe）,计算死亡率、半数死亡浓度（LC₅₀）值;测量每组斑马鱼幼鱼的体长,进行形态学观察并评分;显微镜下观察斑马鱼心脏形态并拍照,记录心率,使用Image-Pro Plus 5.1测量斑马鱼静脉窦-动脉球（SV-BA）距离;显微镜下观察各组斑马鱼是否有体侧水肿来判断TFDM对肾脏的影响并拍照;应用肝脏标记绿色荧光的转基因斑马鱼Tg （L-FABP∶EGFP）,通过检测肝脏荧光强度和面积,观察TFDM对肝脏毒性的影响。结果 TFDM的24 hpe LC₅₀为50 μg·mL^-1,48 hpe LC₅₀为48 μg·mL^-1,100 μg·mL^-1 TFDM组斑马鱼幼鱼全部死亡。与空白对照组比较,20 μg·mL^-1以下的TFDM对斑马鱼的形态和心、肝、肾各脏器无影响;20 μg·mL^-1浓度的TFDM处理斑马鱼48 h导致个别斑马鱼鱼鳔体积减小或缺失,对其他脏器无显著影响;40 μg·mL^-1的TFDM导致斑马鱼出现轻微的心包水肿,处理48 h以后斑马鱼体长显著减小（P＜0.01）,形态评分显著下降（P＜0.01）,斑马鱼的肝脏形态出现轻微变化,但肝脏荧光强度和肝脏荧光面积无显著性变化,对肾脏无影响;暴露在50 μg·mL^-1的TFDM中24 h,斑马鱼出现心包水肿,心率显著下降（P＜0.05）,肝脏荧光强度和面积显著减小（P＜0.05）,肾脏无明显变化。结论 TFDM对斑马鱼的毒性较小,低浓度（≤10 μg·mL^-1）的TFDM对斑马鱼无毒性;中浓度（20 μg·mL^-1）下TFDM对斑马鱼的毒性微弱,仅导致部分斑马鱼鱼鳔体积减小或缺失,对其他各脏器无毒性;高浓度（≥40 μg·mL^-1及以上）下有轻微的心脏毒性和肝脏毒性,在临床应用中有必要合理控制用量。     

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

HPLC同时测定双氯芬酸钠滴眼液中3种抑菌剂的含量

目的 建立HPLC同时测定双氯芬酸钠滴眼液中羟苯乙酯、硫柳汞和苯扎氯铵含量的方法。方法 用十八烷基键合硅胶为填充剂,以1%三乙胺溶液（磷酸调节pH值至3.0）为流动相A,以甲醇为流动相B,进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1,柱温40℃,检测波长254 nm。结果 羟苯乙酯在20.58~205.8 μg·mL^-1、硫柳汞在8.242~82.42 μg·mL^-1、苯扎氯铵n-C₁₂H₂₅取代物在12.88~128.8 μg·mL^-1、苯扎氯铵n-C₁₄H₂₉取代物在6.624~66.24 μg·mL^-1内线性良好（r≥0.999 8）,平均回收率为99.3%~102.5%（n=9）。结论 该方法简单、准确、重复性好,可用于控制双氯芬酸钠滴眼液中羟苯乙酯、硫柳汞和苯扎氯铵的含量。     

以OATP1B1/OATP1B3转运体为作用靶点的何首乌肝毒性成分筛选

目的 建立以有机阴离子转运多肽1B1（OATP1B1）和OATP1B3为作用靶点的何首乌肝毒性成分快速筛选方法。方法 使用Discovery Studio 2.5软件将何首乌主要单体成分（48个）与OATP1B1/OATP1B3蛋白进行分子对接,以OATP1B1和OATP1B3主要转运底物胆红素作为阳性对照,对目标化合物进行虚拟筛选;采用CCK-8法考察芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（AEG）、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（EG）、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷（PG）、2,3,5,4''-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）处理24 h后对人源肝永生化肝细胞HepaRG的毒性强弱,并采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术测定4种化合物对HepaRG细胞的OATP1B1和OATP1B3 mRNA表达量的影响。结果 与OATP1B1对接结果显示,polygonumnolide B3、cis-emodin-physcionbianthrones、polygonumnolide B2、大黄素甲醚-8-β-D-（6''-O-乙酰基）-葡萄糖苷、trans-emodin-physcionbianthrones、大黄素-3-甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、polygonumnolide B4、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、EG、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷、AEG、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷高于胆红素打分值的80%,可被初步认定为潜在毒性成分;与OATP1B3对接结果显示,trans-emodin-physcionbianthrones、PG、polygonumnolide A4及虎杖苷高于胆红素打分值的80%,可被初步认定为潜在毒性成分。CCK-8实验进一步证实AEG、EG及PG均具肝细胞毒性作用,半数抑制浓度分别为16.10、49.43、69.44 μg·mL^-1,与分子对接结果一致。与对照组比较,AEG、EG均可显著下调OATP1B1的mRNA表达水平（P<0.05）;PG可显著下调OATP1B3的mRNA表达水平（P<0.05）。结论 以OATP1B1/OATP1B3分子对接技术为切入点,可有效预测何首乌潜在肝毒性成分,实现快速高效的高通量筛选,为中药安全性评价提供新思路。     

HPLC-DAD同时测定清感穿心莲片中3种成分的含量

目的 建立清感穿心莲片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和异丹叶大黄素3种成分的HPLC含量测定方法,为清感穿心莲片的质量控制提供参考。方法 采用HPLC-DAD法,Agilent Extend C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱,检测波长225 nm （穿心莲内酯）,254 nm （脱水穿心莲内酯）,323 nm （异丹叶大黄素）,柱温35℃,流速0.8 mL·min^-1。结果 穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和异丹叶大黄素分别在8.395~335.790 μg·mL^-1（r=0.999 9）,5.948~237.924 μg·mL^-1（r=0.999 9）和0.854~25.607 μg·mL^-1（r=0.999 9）内线性关系良好;平均加样回收率分别为97.2%,102.1%和98.2%,RSD分别为1.7%,3.0%和1.0%。对来自2个企业的14批次样品进行测定,穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和异丹叶大黄素含量范围分别为每片0.80~2.43,0.59~2.71,和0.045~0.275 mg。结论 本方法准确可靠,可用于清感穿心莲片的质量控制。     

HPLC同时测定通脉颗粒中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、阿魏酸和葛根素的含量

目的 建立通脉颗粒中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、阿魏酸和葛根素的HPLC测定方法。方法 采用Welch Ultimate XD-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈-0.1%三氟乙酸为流动相,梯度洗脱,双波长检测（282,305 nm）,柱温35℃,流速1.0 mL·min^-1。结果 丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛、葛根素和阿魏酸的线性范围分别为3.117~62.33 μg·mL^-1（r=0.998 7）,4.044~80.88 μg·mL^-1（r=0.9985）,1.280~25.60 μg·mL^-1（r=0.997 9）,7.964~159.3 μg·mL^-1（r=0.992 8）,1.980~39.60 μg·mL^-1（r=0.999 1）;平均回收率分别为101.6%（RSD=1.62%）,99.7%（RSD=1.76%）,97.4%（RSD=1.19%）,99.9%（RSD=1.52%）,102.2%（RSD=1.56%）。结论 该方法操作简便、快速,结果准确,可用于通脉颗粒的质量控制。     

UHPLC测定芎菊上清丸中9种成分含量及化学模式分析

目的 建立UHPLC波长切换法同时测定芎菊上清丸中9种成分的含量方法。方法 采用Agilent Ecilipse C₁₈（2.1 mm×100 mm,1.6 μm）色谱柱,流动相：甲醇-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^-1;检测波长：327,237,320,345,278,254 nm;柱温30℃;进样量2 μL;并采用SPSS 22.0统计软件对含量测定结果进行主成分分析与聚类分析。结果 绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、栀子苷、甘草苷、阿魏酸、盐酸小檗碱、黄芩苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷线性范围分别为4.30~68.80 μg·mL^-1（r=0.999 0）、6.66~106.56 μg·mL^-1（r=0.999 2）、7.67~122.72 μg·mL^-1（r=0.999 4）、4.88~78.08 μg·mL^-1（r=0.999 1）、2.37~37.92 μg·mL^-1（r=0.999 1）、6.50~103.92 μg·mL^-1（r=0.999 2）、8.85~141.60 μg·mL^-1（r=0.999 4）、0.88~14.08 μg·mL^-1（r=0.999 7）、0.74~11.92 μg·mL^-1（r=0.999 3）;平均加样回收率（n=9）均在99.42%~103.10%,RSD均<2.0%。主成分分析与聚类分析均可将不同生产厂家的芎菊上清丸很好地分类,且分类结果一致。结论 所建立的多成分方法快捷、准确、重复性好,可用于芎菊上清丸的质量控制。     

基于分子对接和体外大鼠肝微粒体抑制实验综合考察何首乌中潜在肝毒性成分研究

目的 基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）介导的胆红素代谢,构建UGT1A1酶蛋白模型,用于研究何首乌中潜在致肝毒性成分的毒性作用,并用体外大鼠肝微粒体抑制实验进行验证。方法 采用同源模建方法构建UGT1A1酶蛋白结构,将UGT1A1底物胆红素及何首乌中主要蒽醌类成分大黄素、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚与UGT1A1蛋白进行分子对接,考察分子结合靶点及结合强弱。采用大鼠肝微粒体孵育体系（RLM）,加入系列浓度的底物胆红素对照品溶液及待测单体对照品溶液,检测表观抑制常数（K_i）,测定蒽醌类单体成分对UGT1A1酶的抑制作用。结果 分子对接结果显示,UGT1A1酶蛋白结构上共有9个活性口袋区,胆红素的结合口袋确定为位点F;6个单体主要集中在两个活性口袋区：大黄素、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酚对接进入位点F;大黄素甲醚和大黄酸对接进入位点C。结合于UGT1A1酶蛋白位点C中的单体大黄酸和大黄素甲醚的结合自由能（IE）值较小;位点F区中,单体大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素及羟基大黄素具有较高的IE值,结合能力强。体外抑制实验显示,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素表现为较强的竞争型抑制作用,羟基大黄素为较强的混合型抑制作用,与分子对接结果一致。结论 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、羟基大黄素、大黄素对UGT1A1酶介导的胆红素代谢产生较强的抑制作用,构建的UGT1A1酶蛋白模型可有效预测药物的潜在风险。     

Genetic polymorphisms and linkage disequilibrium of sulfotransferase SULT1A1 and SULT1A2 in a Korean population: comparison of other ethnic groups

Aims: To determine the allele frequencies of sulfotransferases (SULTs) 1A1 and 1A2 and their linkage disequilibrium in a Korean population and compare them with those of other ethnic groups. Methods: Genotypes of the SULT1A1*1, *2, and *3 and SULT1A2*1, *2, and *3 allelic variants were determined in 234 Korean subjects using polymerase chain reaction (PCR)–restriction fragment length polymorphism (RFLP) methods. Results: Allele frequencies for SULT1A1*1 and *2 were 0.876 [95% confidence interval (CI), 0.843–0.905] and 0.124 (95% CI, 0.096–0.157), respectively. Similarly, those for SULT1A2*1 and *2 were 0.885 (95% CI, 0.852–0.912) and 0.115 (95% CI, 0.088–0.150), respectively. However, no subject with SULT1A1*3 or SULT1A2*3 was detected. These genotype distributions are similar to those of Asian populations including the Chinese and Japanese, but quite different from other ethnic groups such as African-Americans and Caucasians. The expected allelic frequencies of SULT1A1 and SULT1A2 at Hardy–Weinberg equilibrium are quite similar to the observed distributions in the population. SULT1A1*2 and SULT1A2*2, the most common variant alleles of these two genes, are strongly and positively linked in the Korean population (D′=0.8919, χ² =343.24, P=0.0034). Conclusions: SULT1A1*2 and SULT1A2*2 are the major allelic variants in the Korean population, whereas the SULT1A1*3 and SULT1A2*3 alleles were not found. SULT1A1*2 and SULT1A2*2 are strongly linked.     

Genetic polymorphisms of<Emphasis Type="Italic"> CYP1A1</Emphasis> in a Korean population

Genetic polymorphisms in the coding exons of the CYP1A1 gene were analyzed in 100 Koreans. Three types of CYP1A1 polymorphisms, specifically G134A, G184C and A2455G, were identified with allelic frequencies of 18, 3, and 16%, respectively, and no linkage was observed among them. The novel G184C polymorphism identified in this study was associated with the mutation of an alanine residue at position 62 to proline. Other earlier-reported polymorphisms in the coding region of CYP1A1 were not detected.Abbreviations CYP Cytochrome P450 - PCR Polymerase chain reaction     

UGT1A1基因多态性对药物代谢和临床作用影响的进展

UGT1A1基因是参与人体代谢循环的重要基因,随着药物基因组学的发展,发现其基因多态性与某些药物代谢水平相关,进而影响疾病的发生、发展及治疗等诸多方面。随着研究进展,UGT1A1的底物在不断扩展,包括胆红素、雌激素、伊立替康及其他一些药物已有研究。研究UGT1A1基因多态性对药物代谢情况的影响,在临床疾病的诊治、预后判断及药物不良反应等方面有重要的指导意义。     

Constitutive and inducible levels of CYP1A1 and CYP1A2 in rat cerebral cortex and cerebellum

We examined the constitutive and inducible levels of microsomal cytochromes P450 1A1 and 1A2 (CYP1A) in rat cerebral cortex and cerebellum at the level of proteins by western blot analysis, and by catalytic activities via ethoxyresorufin O-deethylase (EROD) and methoxyresorufin O-demethylase (MROD). In the cerebral cortex, cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) protein was more abundant than cytochrome P450 1A2 (CYP1A2) protein. Treatment with -naphthoflavone (-NF) caused a slight decrease in the level of the former but induced the latter 5.8-fold. In the cerebellum, in contrast to the cerebral cortex, CYP1A1 protein was less abundant than CYP1A2 protein in untreated rats, and while -NF treatment caused a 3.3-fold induction of CYP1A1 protein, it resulted in a 10-fold decrease in CYP1A2 protein. The CYP1A-preferential activity EROD was 2.3-fold higher in the cerebellum than in the cerebral cortex, and was induced 1.5-fold and 1.9-fold in the cerebellum and cerebral cortex, respectively, by -NF treatment. The CYP1A2-preferential activity MROD was 3-fold higher in the cerebellum than in the cerebral cortex, and was repressed 2.2-fold in the cerebellum but induced 3.7-fold in the cerebral cortex following -NF treatment. The results show that CYP1A1 and CYP1A2 proteins and catalytic activities are constitutively expressed in brain but are differentially inducible in the rat cerebral cortex and cerebellum.     

膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性的相关分析

目的探讨细胞色素CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测44例膀胱癌患者(病例组)和85例同期住院非膀胱癌患者(对照组),检测CYP1A1基因MSPI多态性位点的3种基因型及等位基因的分布频率。结果在病例组CYP1A1基因MSPI位点基因型分布频率为:TT(54·5%)、TC(36·4%)、CC(9·1%),等位基因分布频率为T(72·7%)、C(27·3%);在对照组CYP1A1基因MSPI位点基因型的分布频率为TT(61·2%)、TC(31·2%)、CC(7·1%),等位基因分布频率为T(77·1%)、C(22·9%)。各个基因型在两组中所占的比例差异无统计学意义(P>0·05);T、C等位基因频率两组比较差异亦无统计学意义(P>0·05)。结论CYP1A1基因MSPI位点多态性的单独存在可能与本地区膀胱癌易感性无关。     

多氯联苯对小鼠肝微粒体CYP1A1酶活力及其mRNA表达的影响

多氯联苯是一种含氯有机化合物，因为具有良好的物理化学稳定性，自发明并实现工业生产以来被广泛用于各生产领域。但由于其极高的亲脂性和高生物富集性，多氯联苯对生物体诸如免疫功能、激素代谢和生殖遗传等各个方面有重要影响。细胞色素CYP450是机体中混合功能氧化酶系中最重要的一族氧化酶，主要分布在肝脏，参与了包括药物、     

氟伏沙明和CYP1A2*1F基因多态性对血清奥氮平浓度的影响

目的研究氟伏沙明与细胞色素P450酶1A2(cytochromeP4501A2,CYP1A2)基因*1F位点多态性对精神分裂症患者血清奥氮平浓度的影响。方法入组精神分裂症患者单用奥氮平者(奥氮平组)92例以及奥氮平联用氟伏沙明者(联合组)103例,采集血液,测定CYP1A2*1F基因型以及血清奥氮平浓度,比较2组以及CYP1A2*1F各个基因型间的血清奥氮平浓度差异。结果奥氮平组血清奥氮平浓度(3.39±2.70)mg·L-1·mg-1显著低于联合组(5.14±3.06)mg·L-1·mg-1(t=4.23,P=0.000)。AA型血清奥氮平浓度比CC型低[奥氮平组:(2.46±1.64)mg·L-1·mg-1 vs(4.42±2.88)mg·L-1·mg-1,P<0.05;联合组:(4.06±2.65)mg·L-1·mg-1 vs(6.86±3.25)mg·L-1·mg-1,P<0.01],但是CA型与CC型的差异无统计学显著意义。结论氟伏沙明可升高血清奥氮平浓度;不同基因型个体,血清奥氮平浓度不同;应根据氟伏沙明使用情况和CYP1A2*1F基因型个体化给药。     

丹参-红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响

目的 研究丹参、红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。方法 分别选用咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的探针药物。将大鼠随机分为4组,即空白对照组、丹参（1.2 g生药/kg）组、红花（0.4 g生药/kg）组、丹参（1.2 g生药/kg）+红花（0.4 g生药/kg）组,按上述剂量ig给药7 d。于末次给药后30 min,尾iv探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑溶液,在不同的时间点取血进行检测;以甲硝唑为内标,采用HPLC法检测探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的量,评价各药物组对大鼠CYP3A4、CYP2E1和CYP1A2活性的影响。结果 与空白对照组比较,丹参组咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的清除率（CL）有所增强,曲线下面积（AUC）减少,其半衰期（t_1/2）有减少趋势,但差异均不显著;红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL有所降低,但差异不显著,咪达唑仑的CL显著降低（P<0.01）,氯唑沙宗的AUC增加,但差异不显著,咖啡因和咪达唑仑的AUC明显增加（P<0.05、0.01）;丹参+红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL明显降低（P<0.05）,曲线下面积（AUC）明显增加（P<0.05）,其t_1/2有延长趋势,但差异不显著。结论 丹参、红花配伍后对CYP450亚型CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,这可能是丹参、红花配伍协同增效的作用机制之一。     

MicroRNA changes associated with atypical CYP1A1 inducer BMS-764459

The corticotrophin releasing factor (CRF) receptor I antagonist, BMS-764459 (evaluated as a potential treatment of affective disorders), was orally dosed to female Sprague-Dawley rats once daily for 2 weeks (vehicle control or 175 mg/kg/day). To investigate the mechanism of BMS-764459-related liver weight increases, total liver RNA was isolated and evaluated for mRNA gene expression by microarray analysis (assessing the expression of approximately 24,000 genes) from snap-frozen tissue. Subsequently, mRNA and miRNA (microRNA) were also analyzed 5 years later from FFPE (Formalin Fixed Paraffin Embedded) samples via RT-PCR (about 800 miRNA evaluated). Genomic analyses showed that BMS-764459 induces AhR target genes with additional inductions of CYP2B, CYP3A, and Abcc3 consistent with the gene expression pattern of atypical CYP1A1 inducers. Analysis of miRNA expression identified a number of significantly affected miRNAs. To further evaluate their role in atypical CYP1A1 induction, an in silico evaluation of differentially expressed miRNA was performed and their putative mRNA 3′-UTR (untranslated region) binding sequences were evaluated. MiR-680 and miR-29a were identified as potential regulators and biomarkers of atypical CYP1A1 induction by regulating Abcc3, CYP3A and CYP2B as well as a number of AhR targeted genes.     

防己诺林碱阻断自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0 μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱（2.5、5.0、10.0 μmol·L^-1）组,除对照组外,以感染复数（MOI）为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达）和Western blotting ［H1N1病毒核蛋白（NP）］检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防己诺林碱预处理、病毒感染早期药物处理、病毒感染晚期药物处理以及吸附和进入阶段给药对病毒复制的影响;MDCK细胞转染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3双荧光质粒,观察防己诺林碱对EGFP-LC3的荧光强度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影响,设置自噬诱导剂雷帕霉素（0.5 μmol·L^-1）、自噬晚期抑制剂氯喹（10 μmol·L^-1）、巴佛洛霉素A1 （100 nmol·L^-1）对照。转染过EGFP-LC3质粒的MDCK细胞感染H1N1病毒,免疫荧光检测防己诺林碱对LC3与胞内的病毒NP蛋白共定位的影响;体外培养A549细胞,以MOI为0.1的H1N1病毒感染,Western blotting检测防己诺林碱对LC3II/LC3I蛋白表达的影响。结果 防己诺林碱对MDCK细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为40.19 μmol·L^-1 ;与模型组比较,防己诺林碱以浓度相关性的方式抑制HIN1 mRNA表达,以浓度和时间相关性的方式抑制NP蛋白表达（P＜0.01、0.001）;显著减少H1N1诱导的细胞死亡（P＜0.001）;抑制H1N1病毒进入过程。与对照组比较,防己诺林碱处理诱导LC3荧光聚集,诱导EGFP-LC3和mCherry-LC3双荧光共定位显著增加（P＜0.001）。与模型组比较,防己诺林碱处理明显减少NP的荧光数量（P＜0.001）,同时造成LC3荧光积累并与胞内的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II积累（P＜0.01、0.001）。结论 防己诺林碱同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻断自噬途径,使病毒粒子在自噬体内滞留,破坏病毒生命周期。