miR-432-5p靶向UCK2调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的:探讨miR-432-5p调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的分子机制.方法:过表达或敲低miR-432-5p后,检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.敲低miR-432-5p后,检测miRDB数据库在线分析的靶标的mRNA水平.通过荧光素酶报告系统检测miRNA是否与潜在靶标直接结合.过表达或敲低靶标后,分析乳腺癌细胞M...     

miR-642a-5p靶向KRT19调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的研究

目的：探讨miRNA调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的潜在机制。方法：通过过表达甲状腺癌中异常表达的miRNA,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过siRNA敲低潜在靶标,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过荧光素酶报告实验检测miRNA与潜在靶标之间的关系。结果：过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著上升（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量上升（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量下降（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量上升（P<0.05）。当敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,KRT19的蛋白水平下降（P<0....     

microRNA-186-5p及其靶基因CLDN18与甲状腺乳头状癌复发风险的关系

背景与目的：microRNA（miRNA）在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,而且不同的miRNA表达状态与肿瘤的不同生物学特征紧密关联。本研究通过分析不同复发风险甲状腺乳头状癌（PTC）患者差异表达的miRNA,筛选与PTC复发风险相关的miRNA,并分析其作用机制。 方法：用基因芯片技术分析低危复发风险与中高危复发风险PTC患者血清外泌体中差异表达的miRNA,然后用qRT-PCR方法PTC患者肿瘤组织中验证;用Transwell实验筛选出与PTC细胞侵袭能力有关的差异表达miRNA。通过OncomiR在线数据库对筛选的细胞侵袭力相关miRNA的靶基因进行预测,随后采用过表达与敲低策略,分析PTC细胞相关蛋白表达（Western blot）与PTC细胞侵袭能力（Transwell）的变化,明确细胞侵袭力相关miRNA与预测靶基因的关系。最后,通过GEPIA在线网站对TCGA数据库中PTC临床样本的分析进一步确证。 结果：基因芯片分析结果显示,与低危复发风险PTC患者比较,中高危复发风险PTC患者血清外泌体中4个miRNA（miR-186-5p、miR-532-3p、miR-199b-3p、miR-3158-5p）表达上调,1个miRNA（miR-3605-5p）表达下调（均P<0.05）;组织标本qRT-PCR验证结果显示,中高危复发风险PTC患者癌组织中miR-186-5p和miR-3158-5p表达上调（均P<0.05）;Transwell实验结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞侵袭能力明显增强,敲低则明显减弱（均P<0.05）,但改变miR-3158-5p的表达水平对PTC细胞的侵袭能力无明显影响（均P>0.05）。OncomiR在线数据库预测PRDX6、S100PBP、CLDN18、MAP2可能是miR-186-5p的靶基因;Western blot结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞中CLDN18的蛋白表达明显降低,敲低则相反,但改变miR-3158-5p的表达水平对其他3个基因的蛋白表达无明显影响;Transwell实验结果显示,过表达CLDN18表达后PTC细胞的侵袭能力明显减弱,敲低则明显增强,而过表达或敲低miR-186-5p对PTC细胞的作用被同时过表达或敲低CLDN18所逆转（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,PTC组织中CLDN18表达较正常甲状腺组织明显降低。 结论：miR-186-5p表达的增高可能与PTC的复发风险密切相关,机制可能与其通过调节下游CLDN18基因的表达而影响PTC细胞的侵袭能力有关。     

微小RNA-146-5p靶向Notch2对非小细胞肺癌增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-146-5p靶向Notch2对非小细胞肺癌增殖、凋亡和侵袭的影响。方法选取南阳医学高等专科学校第一附属医院2018年5月至2022年5月收治的58例非小细胞肺癌和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤和癌旁组织miR-146-5p表达水平。采用慢病毒建立miR-146-5p过表达非小细胞肺癌A549细胞系, 分别为miRNA对照组和miR-146-5p组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和体外移植瘤实验分析肿瘤细胞增殖能力, 采用流式细胞术分析细胞凋亡水平;采用Transwell分析细胞侵袭能力;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-146-5p靶基因。蛋白质免疫印迹分析靶基因的表达水平。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织中miR-146-5p表达水平(1.09±0.16)明显高于非小细胞肺癌组织表达水平(0.48±0.12), 差异有统计学意义(t=23.940, P<0.05)。miRNA对照组细胞miR-146-5p表达水平(0.96±0.41)明显低于miR-146-5p组细胞(2.69±0.2...     

miR-6827-3p靶向CXCL16调控结直肠癌细胞HT-29凋亡的机制研究

目的:研究miR-6827-3p靶向CXCL16调控结直肠癌细胞HT-29的凋亡的机制。方法 :使用MiRBase在线分析MiRBase与CXCL16信使RNA的结合位点;将分析出的结合位点克隆进PmirGLO质粒,使用luciferase assay分析miR-6827-3p是否靶向这些结合位点;在结直肠癌细胞HT-29中过表达或者敲低miR-6827-3p后,使用Western blot分析CXCL16以及细胞凋亡关键蛋白的表达情况。结果:MiRBase分析后,发现miR-6827-3p与CXCL16具有3处匹配区域;克隆PmirGLO-CXCL16-3’UTR后,luciferase assay发现miR-6827-3p靶向CXCL16;当过表达miR-6827-3p时,CXCL16的表达量下降,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、BAX表达量下降,Bcl-2表达量上升(P0.05);当敲低miR-6827-3p时,CXCL16的表达量上升,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、BAX表达量上升,Bcl-2表达量下降(P0.05)。结论:miR-6827-3p可以通过靶向CXCL16抑制结直肠癌细胞HT-29的凋亡。     

hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌进展

目的:研究hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制。方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_circ_0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平。结果:hsa_circ_0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞。核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加。过表达hsa_circ_0005221则结果相反。在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显。荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加。敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反。结论:hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展。     

miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

微RNA-129-5p靶向Fas相关死亡功能域蛋白基因对体外培养人椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的研究微RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)基因对人椎间盘髓核细胞(hNPC)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法运用脂质体法将miR-219-5p抑制子转染至hNPC中抑制miR-219-5p表达,将pcDNA-FADD转染至hNPC中使FADD过表达,将miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共转染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表达。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测抑制miR-219-5p表达后hNPC细胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。通过Targetscan软件预测miR-129-5p和FADD靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测二者的靶向关系。结果抑制miR-219-5p、过表达FADD均可明显促进hNPC凋亡。Targetscan软件预测发现FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实miR-129-5p和FADD具有靶向结合关系。抑制miR-219-5p的表达后,hNPC中FADD表达上调,同时促凋亡蛋白Caspase-3表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调。抑制FADD可逆转miR-219-5p低表达对hNPC凋亡的促进作用。结论低表达miR-219-5p可促进hNPC凋亡,其机制可能与miR-129-5p靶向FADD有关。     

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。     

微小RNA-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制

目的:探讨微小RNA(miR)-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制。方法:选择2018年6月至2019年6月南阳市中心医院收治的45例锁骨上淋巴结转移的乳腺癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌作为研究对象。采用转录组织化学方法分析淋巴结转移和无淋巴结转移癌组织中差异表达的miRNA。采用荧光定量聚合酶链反应(P...     

微小RNA-205-5p调控轴抑制蛋白2基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制的临床研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测分别检测组织和细胞中miR-205-5p和AXIN2表达水平。荧光素酶报告实验验证miR-205-5p与AXIN2的靶向关系。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测各组转染细胞增殖和凋亡变化,两组和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析。结果结肠癌组织及细胞系中miR-205-5p低表达(2.16±0.24比1.00±0.04,t=10.660,P<0.01),AXIN2高表达(mRNA,0.21±0.02比1.00±0.04,t=30.600,P<0.01;蛋白,0.64±0.03比1.44±0.06,t=26.670,P<0.05),差异均有统计学意义。AXIN2是miR-205-5p的靶基因。mimic组AXIN2蛋白表达量显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义(0.33±0.03,t=116.490,P<0.05);miR-205-5p抑制剂(inhibitor)组AXIN2蛋白表达量显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义(1.67±0.11,t=11.270,P<0.05)。miR-205-5p mimic组(增殖,48 h 0.82±0.09,t=5.375,P<0.05;72 h 1.46±0.13,t=3.333,P<0.05;凋亡,28.71±2.27,t=12.350,P<0.05)和AXIN2沉默表达(siRNA-AXIN2)组(增殖,48 h 1.11±0.11,t=2.814,P<0.05;72 h 1.68±0.06,t=4.959,P<0.05;凋亡,4.45±0.64,t=5.090,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著低于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义;而miR-205-5p inhibitor组(增殖,48 h 2.11±0.18,t=4.386,P<0.05;72 h 2.66±0.19,t=4.898,P<0.05;凋亡,4.71±0.26,t=5.155,P<0.05)和AXIN2过表达(OE-AXIN2)组(增殖,48 h 0.44±0.05,t=0.002,P<0.05;72 h 0.88±0.11,t=7.446,P<0.05;凋亡,25.65±2.12,t=10.900,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著高于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义。结论miR-205-5p在结肠癌中异常升表达,AXIN2呈低表达。miR-205-5p抑制表达靶向上调AXIN2表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。     

结肠腺癌中微小RNA-134-5p的表达及与肝转移的关系

目的检测结肠腺癌中微小RNA(microRNA,miR)-134-5p的表达,分析其与细胞增殖的关联性,探讨其与肝转移的关系。方法2013年4月至2014年8月,收集大连大学附属中山医院确诊为结肠腺癌并行手术治疗的患者共69例作为研究对象,选取肿瘤组织作为观察组,选取距肿瘤的边缘>5 cm的正常结肠组织作为对照组。应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测二组中miR-134-5p的表达。应用免疫组织化学法检测观察组中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,组间比较采用t检验。结果miR-134-5p在观察组中的表达明显低于对照组(1.15±0.38比1.55±0.42,t=6.670,P<0.01),差异有统计学意义,miR-134-5p的表达在不同肿物最大径(1.01±0.26比1.35±0.25,χ²=3.110,P<0.05)、有无脉管累犯(0.85±0.25比1.32±0.27,χ²=4.990,P<0.05)、不同浸润深度(1.02±0.30比1.35±0.31,χ²=3.040,P<0.05)、有无淋巴结转移(0.95±0.22比1.28±0.40,χ²=3.540,P<0.05)和不同TNM分期(0.98±0.29比1.36±0.28,χ²=3.980,P<0.05)的分组中差异均有统计学意义。相关分析显示miR-134-5p与PCNA呈负相关(r=-0.560,P<0.05)。随访中肝转移者miR-134-5p的表达低于无肝转移者(0.78±0.11比1.44±0.32,t=6.950,P<0.05),随访显示miR-134-5p的表达与生存时间相关(χ²=4.330,P<0.05),差异均有统计学意义。结论miR-134-5p在结肠腺癌组织中低表达,对肿瘤的形成和进展有重要作用,miR-134-5p异常表达时可能对细胞增殖有促进作用。miR-134-5p的表达可能与预后有关。     

环状RNA KIF4A在结直肠癌中表达与功能及其作用机制

背景与目的：环状RNA KIF4A (circKIF4A)被发现在多种肿瘤的恶性进展中起到重要作用,然而,circKIF4A在结直肠癌中的生物学作用尚未见报道。因此,本研究探讨circKIF4A对结直肠癌生物学行为的影响及机制。方法：用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系与结肠黏膜上皮细胞以及结直肠癌组织与癌旁正常组织中circKIF4A的表达;用siRNA敲低结直肠癌SW620细胞中circKIF4A的表达后,分别检测细胞生长、克隆形成及侵袭能力以及细胞内总谷胱甘肽（T-GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）比例与铁死亡抑制蛋白SLC7A11表达的变化;通过生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验预测和分析circKIF4A的目标microRNA (miRNA)以及下游的靶基因并验证。结果：与正常结直肠上皮细胞及癌旁组织比较,circKIF4A在不同直肠癌细胞系及癌组织中的表达均明显上调（均P<0.05）;敲低circKIF4A后,SW620细胞的生长、克隆形成、侵袭能力、细胞内T-GSH/GSSG比例及SLC7A11蛋白表达均明显降低（均P<0.05）;预测与分析结果显示,...     

特异性核基质结合区结合蛋白1和微小RNA-495-3P在甲状腺乳头状癌侵袭和转移中的作用

目的:探讨特异性核基质结合区结合蛋白1(SATB1)和微小RNA(microRNA,miR)-495-3P在甲状腺乳头状癌(PTC)侵袭和转移中的作用。方法:2019年9月至2020年4月,福建医科大学附属第二医院甲状腺乳腺外科采集肿瘤标本,将取得的40对PTC组织作为实验组,与之对应40对癌旁正常组织作为对照组。采用...     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的 观察敲低microRNA(miR)-30a-5p表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响.方法 用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物(miR-30a-5p inhibitor)于人脑胶质瘤U251细胞.采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Annexin V法检测细胞早期凋亡.结果 real-time PCR检测结果 显示转染miR-30a-5p inhibitor后,肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降,细胞增殖活性降低,细胞侵袭能力明显受到抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期及早期凋亡增加.结论 miR-30a-5p可能是癌微RNA(oncomiR)之一,有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of knock-down of miR-30a-5p on the biological characteristics of U251 glioblastoma cells. Methods miR-30a-5p inhibitor, mediated by Lipofectamine 2000, was transfected to U251 cells for knocking down miR-30a-5p. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the expression of miR-30a-5p in transfected cells. The cell proliferation rate was detected by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, and cell cycle kinetics was examined by flow cytometry. The cell invasive ability was evaluated by Transwell assay and apoptosis detected by Annexin V assay. Results The expression of miR-30a-5p in the miR-30a-5p inhibitor group was significantly down-regulated. The cell proliferation activity and invasive ability were reduced. Cells were arrested in G0/G1 phase, and apoptosis was induced in cells transfected with miR-30a-5p inhibitor as compared to those of the cells transfected with scramble siRNA and control cells, so suppression of miR-30a-5p expression rendered the glioma cells harboring less aggressive phenotype. Conclusion miR-30a-5p is one of oncomiRs. It may be a candidate target miRNA for gene therapy of gliomas.