miR-432-5p靶向UCK2调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的:探讨miR-432-5p调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的分子机制.方法:过表达或敲低miR-432-5p后,检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.敲低miR-432-5p后,检测miRDB数据库在线分析的靶标的mRNA水平.通过荧光素酶报告系统检测miRNA是否与潜在靶标直接结合.过表达或敲低靶标后,分析乳腺癌细胞M...     

miR-558靶向CD155调控乳腺癌细胞MCF7的凋亡研究

目的:探讨miR-558调控乳腺癌细胞凋亡的潜在机制.方法:用miR-558 inhibitor敲低miR-558或miR-558 mimics过表达miR-558后,检测乳腺癌细胞BC-009、MCF-7、MDA-MB-435、MX-1、BT-20、HCC1937的凋亡水平.通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统确...     

苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的凋亡研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长抑制作用及诱导凋亡机制。方法 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的半数抑制浓度(IC50)，用荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 0．3—2．5g／L浓度苦参碱对MCF—7／ADR细胞有明显的抑制作用，并诱导发生凋亡，实验范围内细胞凋亡的比率与药物浓度呈一定相关。结论 苦参碱能抑制人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长，其机制与阻止细胞周期的进程，启动细胞自身调控程序，诱导凋亡有关。     

bcl-2反义寡核苷酸促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的 观察ｂｃｌ－２反义寡核苷酸（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ）对ＭＣＦ－７细胞内ｂｃｌ－２表达及细胞凋亡的影响。方法 电转染法将合成的针对ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的反义ＯＤＮ导入ＭＣＦ－７乳腺癌细胞,用荧光显微镜,电镜,免疫组化法及流式细胞仪检测反义ＯＤＮ对乳腺癌细胞凋亡,ｂｃｌ－２表达及细胞周期的影响。     

紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶、凋亡及p53/bcl-2表达影响的研究

目的 观察紫杉醇对MCF-7细胞端粒酶活性、凋亡及其p53/bcl-2表达的影响，以了解紫杉醇的抗癌机理。方法 运用体外细胞培养、端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAPELISA）及流式细胞技术观察、分析不同浓度的紫杉醇作用72h的MCF-7细胞。结果 紫杉醇能以浓度依赖方式下凋端粒酶活性并诱导细胞凋亡，使其bcl-2基因的表达显著降低，而P53基因的表达则增强。端粒酶活性下调与细胞凋亡及其P53/bcl-2基因表达有关。结论 紫杉醇能下调端粒酶活性、诱导细胞凋亡、降低bcl-2的表达和增强p53的表达，这可能是紫杉醇抗癌作用的重要机理之一。     

miR-31-5p靶向Notch1调节骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的作用

目的明确miR-31-5p在骨关节炎软骨细胞中的作用。方法采用Hulth法进行大鼠骨关节炎造模,并分离原代软骨细胞,白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导体外模型,检测miR-31-5p的表达变化;进一步通过在线数据库预测miR-31-5p靶点并验证,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术检测miR-31-5p对原代软骨细胞增殖和凋亡的影响。结果骨关节炎大鼠中miR-31-5p表达下调;miR-31-5p mimics促进软骨细胞增殖,而miR-31-5p inhibitor诱导软骨细胞凋亡增加;此外,miR-31-5p inhibitor促进IL-6和基质金属蛋白酶13(matrix metalloprotein,MMP-13)表达增加;荧光素酶报告基因实验证实Notch1是miR-31-5p的直接靶点,Notch1过表达质粒会部分抵消miR-31-5p mimics对软骨细胞的增殖保护作用。结论miR-31-5p下调表达介导骨关节炎软骨细胞增殖受限和凋亡发生,可能参与骨关节炎的发病。     

miR-518a-5p靶向HDAC2调控甲状腺鳞癌细胞SW579凋亡的实验研究

目的:探讨miR-518a-5p调控甲状腺鳞癌细胞SW579凋亡的潜在机制.方法:通过实时荧光定量PCR分析33例癌组织和癌旁组织中miR-518a-5p的表达水平.使用miR-518a-5p mimics和miR-518a-5p inhibitor甲状腺鳞癌细胞SW579中过表达或敲低miR-518a-5p,检测细胞...     

miR-299-3p通过调控PAX3基因表达介导乳腺癌细胞增殖和凋亡

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制.方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 mRNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX...     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路抑制体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的机制研究

目的:探讨下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路对体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的影响和机制.方法:以小鼠足细胞MPC5作为研究对象,分成Control(空白对照)、Model(高糖处理)、Anti-NC(转染inhibitor control后高糖处理)、Anti-miR-150-5p组(转染miR-15...     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

血浆外泌体miR-17-5p和miR-21对乳腺癌的诊断价值

目的探讨微小RNA-21（miR-21）和miR-17-5p在乳腺癌患者血浆外泌体中的表达水平及其诊断价值。 方法选取2017年6月至2018年3月于成都市第七人民医院就诊的86例乳腺癌患者为乳腺癌组,选取同期体检健康女性45例为对照组。采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-21、miR-17-5p在两组血浆外泌体中的表达水平。根据qRT-PCR检测结果将乳腺癌患者分为miR-17-5p高表达组及低表达组,miR-21高表达组及低表达组,比较分析其与乳腺癌患者临床病理参数的关系。采用受试者工作特征曲线（ROC）分析血浆外泌体miR-21、miR-17-5p对乳腺癌的诊断价值。 结果乳腺癌组患者血浆外泌体miR-17-5p表达水平显著低于对照组（P<0.05）,而miR-21表达水平显著高于对照组（P<0.05）;miR-17-5p单独检测时曲线下面积（AUC）为0.677,敏感度为58.14%,特异度为75.56%,截断值为0.72;miR-21单独检测时AUC为0.694,敏感度为59.30%,特异度为77.78%,截断值为1.68;联合检测时敏感度为96.51%,特异度为95.56%,准确性为96.18%;联合检测诊断乳腺癌的敏感度、特异度及准确性均显著高于单项检测（P<0.05）。血浆外泌体miR-17-5p、miR-21表达水平均与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、cerbB-2及Ki-67有关（P<0.05）。 结论血浆外泌体低表达的miR-17-5p与高表达的miR-21均可作为诊断乳腺癌的潜在生物学标志物。     

LncRNA SNHG1下调miR-195-5p改善软骨细胞凋亡和炎症微环境

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（LncRNA SNHG1）和miR-195-5p在OA凋亡和炎症微环境中的作用及相关性。方法 先检测OA患者与大鼠模型软骨组织和正常软骨组织中SNHG1和miR-195-5p的表达情况。再对体外软骨细胞进行培养，转染，建立OA细胞模型。建立大鼠OA模型，将大鼠分为对照组（n=10）、模型组（n=10）、模型组+SNHG 1干预（SNHG 1，n=10）、模型组+inhibitor干预（inhibitor，n=10）。最后收集软骨组织进行一系列细胞功能实验，研究SNHG1、miR-195-5p对OA软骨细胞凋亡、炎症、增殖的影响，并与体外实验比较。研究SNHG1和miR-195-5p的关系。注射SNHG1过表达质粒、miR-195-5p抑制剂探究对OA大鼠模型的体内影响。结果 在OA组织中SNHG1的表达下调，而miR-195-5p的表达上调（P<0.001）。调高SNHG1或敲低miR-195-5p的表达可降低OA细胞凋亡率，改善炎性微环境，恢复细胞增殖能力（P<0.05）。得出SNHG1可充当miR-195-5p的分子海绵。SNHG1促进剂、miR-195-5p抑制剂能够减弱OA大鼠模型的凋亡与炎症反应。结论 通过调节SNHG1-miR-195-5p轴，调高SNHG1或敲低miR-195-5p有利于改善软骨细胞的凋亡与炎症微环境，为OA进展机理提供了新见解。     

CircRNA pappalysin 1 facilitates prostate cancer development through miR-515-5p/FKBP1A axis

The role of circular RNA (circRNA) pappalysin 1 (circ-PAPPA; hsa_circ_0088233) in prostate cancer (PCa) cells was explored in the current study. Circ-PAPPA abundance was markedly enhanced in PCa. Circ-PAPPA interference restrained cell viability, proliferation, motility and glycolysis while elevated the apoptosis rate of PCa cells. Circ-PAPPA negatively regulated microRNA-515-5p (miR-515-5p) abundance. MiR-515-5p silencing largely diminished circ-PAPPA knockdown-mediated effects in PCa cells. MiR-515-5p directly bound to FKBP prolyl isomerase 1A (FKBP1A). MiR-515-5p overexpression-mediated impacts were partly counteracted by FKBP1A overexpression. Circ-PAPPA silencing reduced FKBP1A protein level partly by elevating miR-515-5p expression. Circ-PAPPA knockdown significantly restrained the tumour growth in vivo. Circ-PAPPA elevated the malignant phenotypes of PCa cells by sequestering miR-515-5p to induce the expression of FKBP1A.     

miR-483-5p通过下调CDK15促进肾上腺皮质癌增殖和侵袭

目的探讨miR-483-5p在肾上腺皮质癌中的作用及其可能的作用机制。方法荧光定量PCR法检测miR-483-5p和CDK15在肾上腺皮质癌组织和细胞系中的表达,CCK-8增殖试验测定miR-483-5p对细胞增殖的影响,Transwell法检测ACC细胞侵袭性的变化。荧光素酶试验和挽救实验验证miR-483-5p与CDK15相关的分子机制。结果miR-483-5p在肾上腺皮质癌组织中高表达(2.36±1.02 vs 1.09±0.43),CDK15在肾上腺皮质癌组织中低表达(0.57±0.26 vs 1.06±0.32)。荧光素酶检测证实CDK15是miR-483-5p的直接靶点。过表达miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进ACC细胞的增殖(24 h:0.26±0.03 vs 0.23±0.04,48 h:0.56±0.05 vs 0.41±0.03,72 h:0.73±0.04 vs 0.59±0.03)和侵袭能力(95.78±4.66 vs 23.89±2.52)。结论miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进肾上腺皮质癌的发生发展,其可作为肾上腺皮质癌的潜在生物标志物及治疗肾上腺皮质癌的新的作用靶点。     

NNT-AS1 enhances bladder cancer cell growth by targeting miR-1301-3p/PODXL axis and activating Wnt pathway

As a tumor involved in the urinary system, bladder cancer (BC) seriously threatens human health. Emerging as crucial biomarkers, long noncoding RNAs (lncRNAs) play an important role in the regulation of many cancers. lncRNA NNT-AS1 has been studied in a series of cancers, whereas its role and potential molecular mechanism was poorly understood in BC. Here, we found that NNT-AS1 was upregulated in BC cells. Functionally, the silencing of NNT-AS1 inhibited cell proliferation, migration, invasion, and endothelial-mesenchymal transition. Furthermore, the apoptosis of BC cells was induced upon NNT-AS1 knockdown. Later, miR-1301-3p, the downstream gene of NNT-AS1, was found at a low level in BC cells. In addition, we found that miR-1301-3p targeted to PODXL. PODXL expression downregulated in NNT-AS1-silenced cells was restored by miR-1301-3p inhibition. Importantly, NNT-AS1 was discovered to activate Wnt pathway, and the treatment of LiCl recovered the repressive role of NNT-AS1 silencing in BC cell growth. Through restoration assays, we observed that PODXL overexpressing countervailed NNT-AS1 depletion-mediated suppression on BC cell growth and Wnt pathway. These data suggested that NNT-AS1 enhances BC cell growth and activates Wnt pathway by targeting miR-1301-3p/PODXL axis.     

miR-148-5p靶向H型血管调控因子Slit3的实验研究

目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3’UTR互作的miRNAs,构建野生型和突变型Slit3-3’UTR重组荧光素酶报告载体,和miRNAs表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶报告基因测定荧光素酶活性验证miRNA对Slit3-3’UTR的靶向作用。结果 与假手术组相比,模型组Slit3 mRNA表达水平略上调和平均光密度显著上调,生物信息学预测Slit3-3’UTR与miR-148a-5p、miR-148b-5p、miR-410-3p、miR-129-5p和miR-374-5p存在碱基结合位点,野生型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性下调至空白对照组的68.91%,突变型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性未见下调。结论 Slit3可能是绝经后骨质疏松症H型血管的调控基因,miR-148b-5p与Slit3-3’UTR的靶向结合直接调控Slit3的表达水平。