硼替佐米对人急性淋巴细胞白血病B细胞株细胞的生长抑制作用分析

目的 探讨硼替佐米对人急性淋巴细胞白血病B细胞株(Nalm-6)细胞的生长抑制作用.方法 将体外培养Nalm-6细胞分为细胞对照组和硼替佐米组,细胞对照组加RPMI 1640培养液,硼替佐米组加不同浓度的硼替佐米(浓度分别为100、200、400、800、1 600 nmol/L).采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同时间不同浓度硼替佐米对Nalm-6细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测400 nmol/L硼替佐米作用12 h后对Nalm-6细胞周期的影响.结果 ①硼替佐米对Nalm-6生长抑制情况:100、200、400、800、1 600 nmol/L细胞作用12 h后其抑制率分别为(8.0±6.1)％、(18.3±7.5)％、(30.3±7.5)％、(37.8±2.6)％、(41.1±2.1)％;作用24h后其抑制率分别为(13.5±5.2)％、(43.3±6.5)％、(68.7±2.1)％、(81.6±1.6)％、(87.4±1.4)％;作用48 h后其抑制率分别为(5.21±3.71)％、(9.33±2.53)％、(49.32±7.12)％、(97.71±1.1 1)％、(99.9±0.1)％;作用72 h后其抑制率分别为(4.00±3.62)％、(4.32±5.61)％、(8.32±4.42)％、(79.52±8.61)％、(99.94±0.13)％.细胞对照组抑制率为0,各浓度硼替佐米组与细胞对照组之间两两比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).②400 nmol/L硼替佐米作用Nalm-6细胞12h后,G2/M期细胞比例为(18.6±2.4)％,细胞对照组G2/M期细胞比例为(3.8±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 硼替佐米能抑制Nalm-6细胞的增殖,并将Nalm-6细胞周期阻滞在G2/M期.     

硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系

目的硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系。方法 Brdu ELISA法测细胞增殖活性;Boyden小室培养测细胞的迁移率;Western blot测细胞uPA、NF-κB的蛋白水平;细胞免疫化学测NF-κB细胞表达及细胞定位。结果 (1)与对照组(无血清培养基组)相比,10%FCS组细胞增殖活性与迁移率明显增高(P<0.05);与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及迁移,硼替佐米浓度为(4μg.L-1),人胃癌SGC-7901细胞增殖活性与迁移率均明显降低(P<0.05);与PDTC组(10μmol.L-1)相比,两者无明显差别;(2)与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB蛋白表达,硼替佐米浓度为(4μg.L-1)时uPA、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05);与NF-κB特异性抑制剂PDTC组相比,两组uPA、NF-κB表达均无明显差别;硼替佐米浓度为(4μg.L-1)能明显降低NF-κB核蛋白含量,与PDTC组相比,两者无显著差异(P>0.05);(4)细胞免疫化学结果示:硼替佐米(4μg.L-1)抑制10%FCS诱导人胃癌SGC-7901细胞NF-κB核移位。结论①硼替佐米抑制血清诱导胃癌SGC-7901细胞增殖迁移及uPA、NF-κB蛋白表达,②硼替佐米降低胃癌SGC-7901细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB活性,降低UPA水平有关。     

硼替佐米对K562细胞株DNA甲基转移酶表达的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,商品名:万珂)对K562细胞株DNA甲基转移酶(DNMTs)表达、细胞凋亡的影响。方法常规体外培养白血病K562细胞株,随机将处于对数生长期的细胞分为12、24、36h3个作用时间组,予以不同浓度的硼替佐米:0,6,20,60nmol/L,蛋白印迹法检测胞内DNMT1的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与阴性对照组相比,硼替佐米可显著抑制DNMT1表达。硼替佐米作用于细胞12、24、36h后细胞凋亡率逐渐增加,60nmol/L硼替佐米作用36h后细胞凋亡率为(61.68±3.20)%。结论硼替佐米抑制K562细胞株DNMT1表达,诱导细胞凋亡,该作用呈浓度依赖性。     

硼替佐米对混合淋巴细胞培养体系细胞活性影响的研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对混合淋巴细胞（MLC）培养体系细胞活性、细胞凋亡率的影响。方法：体外建立单向混合淋巴细胞培养体系,分别用0、2、4、8nmol/L的硼替佐米干预培养体系,在不同的时间点收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western印迹法检测胞内NF-κBP65表达。结果：（1）硼替佐米可明显抑制MLC体系细胞增殖（P＆lt;0.05）,对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系,8nmol/L硼替佐米作用24h后细胞活性抑制率为41.35%。（2）硼替佐米作用于细胞后细胞凋亡率增加（P＆lt;0.05）,8nmol/L硼替佐米作用36h细胞凋亡率为（61.67±3.21）%。（3）硼替佐米作用后胞内NF-κBP65的表达下降（P＆lt;0.05）。结论：硼替佐米能通过阻断NF-κB的活化而抑制MLC体系细胞活性,诱导细胞凋亡。     

硼替佐米对K562细胞株DNA甲基转移酶表达的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib,商品名:万珂)对K562细胞株DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)表达、细胞凋亡的影响。方法常规体外培养白血病K562细胞株,随机将处于对数生长期的细胞分为12h、24h、36h 3个作用时间组,予以不同浓度的硼替佐米:0,6,20,60nmol·L-1,Western印迹法检测胞内DNMT1的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与阴性对照组相比,硼替佐米可显著抑制DNMT1表达。硼替佐米作用于细胞12、24、36h后细胞凋亡率逐渐增加,60nmol·L-1硼替佐米作用36h后细胞凋亡率为(61.68±3.20)%;结论硼替佐米抑制K562细胞株DNMT1表达,诱导细胞凋亡,该作用呈浓度依赖性。     

姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人胃癌SGC-7901细胞生长活力;Hoechst 33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、8、9活性.结果 姜黄素(5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)明显抑制SGC-7901细胞牛长并呈剂量依赖关系,48 h的IC50值为(23.65±3.15)μmol/L,细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光.与对照组相比,姜黄素处理后凋亡细胞比例增加;姜黄素处理SGC-7901细胞48 h后Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活Caspase级联活化而抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并诱导其凋亡.     

胃泌素对胃癌细胞增殖和COX-2表达的影响

目的 探讨胃泌素和胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对胃癌细胞株SGC-7901增殖和环氧化酶2(COX-2)表达的调控作用.方法 SGC-7901细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中常规培养24 h后,换无血清培养基继续培养24 h,加入胃泌素(终浓度为0.1、1、10、100 nmol/L)或胃泌素(100 nmol/L)加丙谷胺(终浓度为1、10、100、1000 μmol/L),分别培养24、48和72 h;MTT比色分析细胞增殖,Western blot检测COX-2蛋白表达.结果 胃泌素呈时间和剂量依赖性地促进SGC-7901细胞增殖,而丙谷胺抑制了胃泌素诱导的细胞增殖.胃泌素增加COX-2在SGC-7901细胞的表达,丙谷胺有效抑制胃泌素诱导的COX-2表达.结论 胃泌素通过胃泌素受体诱导COX-2表达促进胃癌细胞增殖.     

啤酒花中蛇麻酮体外诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用研究

目的探讨啤酒花(Humulus LupulusL.)中成分蛇麻酮(Lupulone,LP)体外对人胃癌细胞SGC-7901生长抑制及诱导凋亡作用的研究。方法体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,MTT法检测不同浓度蛇麻酮对SGC-7901细胞体外生长的影响;流式细胞仪分析蛇麻酮对SGC-7901细胞的凋亡率的影响。结果蛇麻酮对SGC-7901的生长具有较强的抑制作用,IC50为0.73μg/mL;0、0.2、0.8、3.2μg/mL剂量的蛇麻酮作用SGC-7901细胞48h细胞凋亡率分别为0.1%、7.1%、18.0%、49.3%。结论蛇麻酮对SGC-7901具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与其可诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

虎杖苷通过蛋白激酶 B信号通路影响胃癌细胞增殖凋亡

目的 研究虎杖苷对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响和机制.方法 虎杖苷处理胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测增殖,平板克隆实验检测克隆形成能力,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期分布,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、Bcl-2相关X(Bax)、剪切型胱天蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达.用蛋白激酶B(Akt)信号激活剂和虎杖苷联合处理胃癌细胞SGC-7901,检测细胞增殖、克隆、周期、凋亡变化.结果 虎杖苷处理以后的胃癌细胞SGC-7901增殖能力下降[(0.58±0.06)比(0.20±0.01)],细胞克隆形成数目减少[(118.54±10.65)个比(69.52±7.91)个],细胞凋亡增多[(2.97±0.32)％比(17.45±1.69)％],细胞G0/G1比例升高[(50.47±3.25)％比(67.13±3.84)％],cyclin D1、CDK4蛋白表达减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平升高,p-Akt蛋白水平降低[(0.51±0.05)比(0.24±0.03)].Akt信号激活剂处理可以逆转虎杖苷对胃癌细胞SGC-7901增殖、克隆抑制和周期阻滞、凋亡促进作用.结论 虎杖苷通过抑制Akt信号通路阻碍胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

硼替佐米联合阿糖胞苷诱导对K562细胞株PTPROt基因的影响

目的 研究硼替佐米及阿糖胞苷序贯及联合用药对K562细胞的凋亡率的影响,同时观察硼替佐米是否经由PTPROt基因的表达上调促细胞凋亡.方法 以慢性粒细胞白血病（CML）细胞的K562细胞为研究对象.不同用药组分别用药48 h,细胞选用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术观察细胞抑制率与凋亡率情况,同时观察PTPROt基因表达情况.结果 联合应用硼替佐米及阿糖胞苷组与分别应用硼替佐米及阿糖胞苷组两两相比差异有统计学意义（P＜0.05）.联合用药使细胞凋亡率增加,序贯先应用阿糖胞苷后硼替佐米的细胞凋亡率最高,与单用硼替佐米及阿糖胞苷组两两相比差异有统计学意义（P＜0.05）.应用硼替佐米后PTPROt基因表达明显上调.结论 联合硼替佐米及阿糖胞苷,对白血病细胞株K562细胞有协同增强肿瘤细胞凋亡作用,其作用机制可能与上调PTPROt基因表达相关.     

CCL21对胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化的影响史冠男1,袁媛2,彭琼1,戴 夫1

目的 探讨趋化因子CCL21能否参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化。方法 取不同浓度的CCL21(0、50、100、150ng/ml)作用胃癌SGC-7901细胞,划痕试验检测细胞侵袭能力。镜下观察细胞形态的变化。Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9的蛋白表达。结果 150ng/ml CCL21作用胃癌SGC-7901细胞后,较其它浓度侵袭能力最强,同时使胃癌SGC-7901细胞形态发生变化,细胞逐渐变为长梭状,部分可见伪足生成。E-cadherin蛋白表达下降(p<0.05),N-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白表达升高(p<0.05)。结论 趋化因子CCL21可能参与诱导胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化,进而促进该肿瘤细胞的侵袭转移。     

低氧状态下As_2O_3对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在低氧状态下对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制及凋亡的影响。方法:用氯化钴建立低氧模型,将细胞分为常氧组、低氧组、低氧加药(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol·L-1 As2O3)组,作用于胃癌细胞24、48、72h后用MTT法检测细胞光密度并计算抑制率,染色法检测细胞凋亡率。结果:作用24、48、72h后,低氧加药组中10.0μmol·L-1浓度抑制率分别为31.99%、55.98%和72.40%,凋亡率分别为(42.88±1.72)%、(56.48±1.48)%和(65.52±1.00)%,而低氧组则分别为4.04%、6.65%和8.11%,(2.08±0.28)%、(2.44±0.51)%和(2.76±0.67)%,两组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:低氧状态下As2O3对人胃癌细胞SGC-7901生长具有抑制和诱导凋亡作用,该作用可能是As2O3产生抗肿瘤效果的生物学基础。     

川陈皮素对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用的实验研究

目的研究川陈皮素的体外抗人胃癌细胞SGC-7901作用。方法以不同浓度（1.25、2.5、5、10、20、40、80、160mg/L）的川陈皮素作用于SGC-7901细胞,分别用MTT法、细胞生长曲线研究其对SGC-7901的增殖抑制作用。结果MTT显示川陈皮素浓度在2.5～80mg/L时,对SGC-7901细胞的抑制率为19%～90%,IC50值为（21.28±4.17）mg/L。生长曲线提示川陈皮素对SGC-7901细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论川陈皮素对人胃癌细胞SGC-7901有较强的增殖抑制作用。     

Anticancer effect of 2,7-dihydroxy-3-methylanthraquinone on human gastric cancer SGC-7901 cells in vitro and in vivo

Context: 2,7-Dihydroxy-3-methylanthraquinone (DDMN) is reported to have a remarkable anticancer activity against gastric cancer SGC-7901 cells.

Objective: The objective of this study is to study the anticancer effect and mechanism of DDMN on SGC-7901 cells.

Materials and methods: The MTT assay was used to determine the effect of DDMN on cell viability of SGC-7901 cells, and the cytotoxic effect was evaluated by the IC₅₀ value. After treatment with different doses of DDMN (10, 20, and 40?μM) for 48?h, flow cytometry was used to investigate the apoptosis of SGC-7901 cells induced by DDMN. Further, western blotting was performed to study anticancer mechanism by assaying apoptosis-related proteins containing Mcl-1, Bcl-xl, Bcl-2, Bax, Bak, Bad, cytochrome c, caspase-3, and caspase-9. Finally, xenograft assay was used to further evaluate the effect of DDMN on SGC-7901 cells by determining body weight of nude mice, tumor volumes, and apoptosis-related proteins.

Results: These results suggest that DDMN can significantly inhibit (IC₅₀ value?=?20.92?μM) the proliferation of SGC-7901 cells and induce apoptosis of SGC-7901 cells demonstrated by flow cytometry analysis. Additionally, the results of western blotting indicated that DDMN can suppress the expression of anti-apoptotic proteins Bcl-xl and Bcl-2, increase the expression of pro-apoptotic proteins Bax, Bad (40?μM), caspase-3 and caspase-9, and evidently promote the release of cytochrome c from the mitochondria to the cytoplasm. The xenograft assay further confirmed that DDMN had significant anticancer effects on SGC-7901 cells.

Conclusion: DDMN had significant anticancer effect on SGC-7901 cells in vitro and in vivo related to mitochondria-mediated apoptosis.     

姜黄素的抗骨肉瘤活性及其相关作用机理

目的探讨姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抗肿瘤活性及其相关作用机制。方法 MTT实验检测姜黄素对人成骨肉瘤细胞MG-63的细胞毒作用;Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;提取细胞总蛋白Western blot实验检测细胞PARP蛋白的裂解带和survivin蛋白的表达变化。结果姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞具有高效的细胞毒作用,其IC50值为(11.55±0.63)μmol/L;10,20和40μmol/L姜黄素处理MG-63细胞48 h后,细胞的凋亡率从(2.73±0.56)%依次升高到(18.1±1.22)%,(36.41±4.52)%和(57.23±5.86)%;Westernblot结果显示姜黄素诱发了MG-63细胞内PARP蛋白的裂解,同时姜黄素也可剂量依赖性的降低细胞内survivin蛋白的表达。结论姜黄素显示了高效的致骨肉瘤细胞凋亡活性,下调survivin蛋白可能是其诱导MG-63细胞凋亡的主要机制。     

多巴酚丁胺对常见上皮源性肿瘤细胞增殖的影响

目的观察多巴酚丁胺对多种常见上皮源性肿瘤细胞株的增殖抑制作用。方法收集不同浓度多巴酚丁胺处理的胃癌SGC-7901细胞、结肠癌HT-29细胞、卵巢癌HO-8910细胞、宫颈癌SiHa细胞和肺癌A549细胞,于24 h、48 h和72 h采用噻唑蓝(MTT)法检测抑制率,流式细胞仪检测凋亡率。结果不同浓度的药物处理24 h、48 h和72 h后对以上5种上皮源性肿瘤细胞均有一定的抑制作用,随着药物浓度的增加和时间的延长,抑制率有不同程度的增加。30μmol/L药物处理72 h之后对各组细胞的抑制作用最强,由强到弱依次为SGC-7901(41.57±1.10)%、A549(24.32±2.22)%、SiHa(20.66±2.60)%、HT-29(20.38±1.60)%和HO-8910(15.25±0.73)%,对SGC-7901的抑制作用较强,与其他几种细胞差异有统计学意义(P<0.05)。该浓度在72 h对各肿瘤细胞的凋亡率以胃癌SGC-7901和肺癌A549细胞较明显,与对照组细胞差异有统计学意义(P<0.05)。结论多巴酚丁胺对上皮源性肿瘤细胞有一定的增殖抑制作用,并且呈浓度和时间依赖性,该药可明显抑制胃癌细胞增殖,并诱导其凋亡,具有潜在应用价值。     

(±)2-(7,8,3,′4,′5′-五甲氧基)黄烷通过诱导周期阻滞和细胞凋亡抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖

目的研究(±)2-(7,8,3′,4′,5′-五甲氧基)黄烷(PMF)体外对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度PMF体外对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测PMF对细胞周期分布的影响;Western blot法检测PMF对凋亡相关蛋白PARP、caspase-3表达的影响。结果不同浓度的PMF作用72 h可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖;PMF作用12 h可使SGC-7901细胞周期阻滞于G2/M期;PMF作用24 h细胞周期检测可见亚二倍体峰(SubG1),并可诱导细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase-3的活化。结论PMF体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞和细胞凋亡有关。