虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响

目的　观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制。方法　取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型。用液体闪烁计数仪测定PKC的活性。结果　缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0 .05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0 .05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0. 05,vs正常组P>0 05 ),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0 .05,vs正常组P>0 .05)。结论　PD对缺血缺氧作用下的VSMCPKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一。     

益气活血方对缺血缺氧刺激下心肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的:探讨益气活血方(YQHXF)治疗缺血缺氧性心血管疾病的机理。方法:用自制的密闭有机玻璃盒填充造成大鼠乳鼠心肌细胞缺氧环境,用低糖培养基造成缺血的环境,从而制成心肌细胞的缺血缺氧模型。然后用γ-闪烁计数仪测定蛋白激酶C(Pro-teinkinase C,PKC)的活性。结果:缺血缺氧状态下心肌细胞胞浆PKC的活性上升(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0.05),经益气活血方治疗后胞浆PKC的活性有所下降,而胞膜PKC的活性有所升,都接近到正常的水平(vs正常组P>0.05)。结论:益气活血方对缺血缺氧性心脑血管疾病的治疗作用可能与调节心肌细胞的PKC活性有关。     

虎杖苷对缺血缺氧下心肌细胞蛋白激酶C的影响

目的探讨虎杖苷对缺血缺氧作用下心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响及其抗休克的机制。方法取大鼠乳鼠心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细胞缺血缺氧模型。用γ-闪烁计数仪测定PKC的活性。结果正常状态下心肌细胞胞质PKC经虎杖苷(PD)刺激后活性下降(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs正常组P<0.05)。缺血缺氧后胞质和胞膜PKC的活性均下降(vs正常组P<0.05),再经PD处理后胞质胞膜的PKC活性均上升(vs缺血缺氧组P<0.05,vs正常组P>0.05)。结论PD对缺血缺氧作用下的心肌有保护作用,可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是PD抗休克的分子机制之一。     

血管加压素1a与血管加压素2受体在精氨加压素调节缺氧血管平滑肌细胞蛋白激酶C表达中的作用

目的观察血管加压素1a(V1a)受体与V2受体拮抗剂对精氨加压素(AVP)调节缺氧血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)α,δ和ε亚型表达的影响,以及磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)和磷脂酶A2(PLA2)活性的变化。方法缺氧培养大鼠肠系膜上动脉VSMC,采用Western蛋白印迹法检测PKCα,δ和ε亚型蛋白表达;采用酶偶联荧光分析法测定PLC和PLD的活性,酸碱滴定法检测PLA2的活性。结果缺氧处理1.5h,VSMC胞膜PKC-α和ε亚型蛋白表达量明显升高,AVP进一步升高胞膜PKC-α和ε的表达。V1a受体拮抗剂d(CH2)5[Tyr2(Me)]AVP预处理可明显拮抗AVP诱导的胞膜PKCα和ε亚型蛋白表达升高,同时也明显拮抗AVP诱导的缺氧VSMC中PLC和PLD活性升高。而V2受体拮抗剂d(CH2)[d-Ile2Abu4]AVP对缺氧诱导的胞膜PKC-α和ε表达增加和VSMC中PLC和PLD活性升高无明显作用。结论AVP诱导PKC激活的机制可能与V1a受体介导的PLC/PLD途径有关,而V2受体在这一信号传导途径中可能并不起主要作用。     

拉马克啉对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C表达的作用

目的：探讨拉马克啉（levcromakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响。方法：体外培养Wistar大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs），用ET-1诱导其增殖，用不同浓度拉马克啉共培养，MTT法评价VSMCs增殖情况，3H—TdR检测DNA合成，流式细胞术检测VSMCs凋亡，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），Western blot检测PKCamRNA及蛋白表达。结果：拉马克啉对ET-1所致VSMCs增殖有显著抑制作用，随浓度增加，其MTT活性细胞含量和3H—TdR掺入量都明显减少（P〈0．05）；拉马克啉呈剂量依赖性地增加G0／G1期VSMCs（P〈0．05），促使VSMCs凋亡增多（P〈0．05）；拉马克啉抑制VSMCs内PKCamRNA及蛋白表达。结论：拉马克啉抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用，可能的机制是通过下调VSMCs内PKCa表达水平而影响vSMCs增殖和凋亡。     

黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系

目的：研究黄色素(SY)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及机制。方法：以培养的家兔VSMC为材料,用细胞计数和³²P-参入法,观察SY对VSMC的增殖及3种蛋白激酶活性。结果：SY抑制VSMC的增殖,且呈剂量和时间依赖性,1.0 mg.mL^-1作用最强,抑制率为54.6%; SY抑制VSMC的DNA合成,1.0 mg.mL^-1作用2 d,抑制率为80.2%;在一定浓度范围内,随着SY浓度的升高,VSMC中3种蛋白激酶(TPK,PKC及MAPK)活性下降。结论：SY对VSMC的增殖有抑制作用,可能是通过抑制TPK和PKC依赖的MAPK信号传导途径而发挥作用。     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：研究马齿苋总黄酮（Portulaca totalflavone,PTF）对血小板源性生长因子-BB型（PDGF-BB）致血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmuscle cell,VSMC）增殖的影响并探讨其机制。方法：采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF（8、24、72mg/L）对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内[Ca2＋]i。结果：PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少（P〈0.01）;能抑制高K＋诱导的VSMC内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca2＋]i有关。     

蛋白激酶C ε亚型在AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平及MLCK/MLCP活性中的作用

目的研究蛋白激酶C（PKC）ε亚型在精氨酸血管加压素（AVP）调节休克血管肌球蛋白轻链（MLC20）磷酸化及缺氧血管平滑肌细胞（VSMC）肌球蛋白轻链激酶（MLCK）和肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）活性中的作用。方法采用大鼠失血性休克模型和缺氧培养VSMC,观察PKCε亚型在AVP调节失血性休克大鼠肠系膜上动脉（SMA）血管平滑肌MLC20磷酸化水平中的作用,同时检测缺氧VSMC中MLCK和MLCP活性的变化。结果失血性休克后SMA血管平滑肌MLC20磷酸化水平降低,同时缺氧VSMC的MLCP活性明显升高,MLCK活性明显降低;AVP处理可显著升高MLC20磷酸化水平和抑制缺氧VSMC的MLCP活性升高,特异性的PKCε抑制肽可明显拮抗AVP升高MLC20磷酸化、降低MLCP的作用;而AVP和PKCε抑制肽对MLCK活性的变化无明显影响。结论AVP可通过PKCε亚型来发挥改善休克血管反应性的作用,其机制可能是通过抑制MLCP活性、升高MLC20磷酸化水平,进而增强血管平滑肌细胞钙敏感性升高血管反应性。     

蛋白激酶C ε亚型在AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平及MLCK/MLCP活性中的作用

目的 研究蛋白激酶C(PKC) ε亚型在精氨酸血管加压素(AVP)调节休克血管肌球蛋白轻链(MLC₂₀)磷酸化及缺氧血管平滑肌细胞(VSMC)肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)活性中的作用。方法 采用大鼠失血性休克模型和缺氧培养VSMC,观察PKC ε亚型在AVP调节失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管平滑肌MLC20磷酸化水平中的作用,同时检测缺氧VSMC中MLCK和MLCP活性的变化。结果 失血性休克后SMA血管平滑肌MLC₂₀磷酸化水平降低,同时缺氧VSMC的MLCP活性明显升高,MLCK活性明显降低;AVP处理可显著升高MLC₂₀磷酸化水平和抑制缺氧VSMC的MLCP活性升高,特异性的PKC ε抑制肽可明显拮抗AVP升高MLC₂₀磷酸化、降低MLCP的作用;而AVP和PKC ε抑制肽对MLCK活性的变化无明显影响。结论 AVP可通过PKC ε亚型来发挥改善休克血管反应性的作用,其机制可能是通过抑制MLCP活性、升高MLC₂₀磷酸化水平,进而增强血管平滑肌细胞钙敏感性升高血管反应性。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

Rho kinase and protein kinase C involvement in vascular smooth muscle myofilament calcium sensitization in arteries from diabetic rats

Background and purpose:

Diabetes mellitus (DM) causes multiple dysfunctions including circulatory disorders such as cardiomyopathy, angiopathy, atherosclerosis and arterial hypertension. Rho kinase (ROCK) and protein kinase C (PKC) regulate vascular smooth muscle (VSM) Ca²⁺ sensitivity, thus enhancing VSM contraction, and up-regulation of both enzymes in DM is well known. We postulated that in DM, Ca²⁺ sensitization occurs in diabetic arteries due to increased ROCK and/or PKC activity.

Experimental approach:

Rats were rendered hyperglycaemic by i.p. injection of streptozotocin. Age-matched control tissues were used for comparison. Contractile responses to phenylephrine (Phe) and different Ca²⁺ concentrations were recorded, respectively, from intact and chemically permeabilized vascular rings from aorta, tail and mesenteric arteries.

Key results:

Diabetic tail and mesenteric arteries demonstrated markedly enhanced sensitivity to Phe while these changes were not observed in aorta. The ROCK inhibitor HA1077, but not the PKC inhibitor chelerythrine, caused significant reduction in sensitivity to agonist in diabetic vessels. Similar changes were observed for myofilament Ca²⁺ sensitivity, which was again enhanced in DM in tail and mesenteric arteries, but not in aorta, and could be reduced by both the ROCK and PKC blockers.

Conclusions and implications:

We conclude that in DM enhanced myofilament Ca²⁺ sensitivity is mainly manifested in muscular-type blood vessels and thus likely to contribute to the development of hypertension. Both PKC and, in particular, ROCK are involved in this phenomenon. This highlights their potential usefulness as drug targets in the pharmacological management of DM-associated vascular dysfunction.     

预适应和前胡丙素对缺氧肥厚血管平滑肌胞内钙离子浓度及NO含量的影响

观察了预适应和前胡丙素对缺氧肥厚血管平滑肌胞内钙离子浓度 ([Ca2 +]i)及NO含量的影响 .①建立两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型 ,分离培养主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC) ,以fura 2 /AM为钙指示剂。测得前胡丙素 (2 0mg·kg- 1·d- 1,术后第9周起ig 9周 )治疗和缺氧预适应 (5minN2 ,5min95%O2 + 5%CO2 混合气体 ,循环 3次 )对缺氧 (30minN2 )所致肥厚VSMC对KCl和去甲肾上腺素刺激反应性升高 ([Ca2 +]i 升高 )有明显的拮抗效应 .②用血管紧张素Ⅱ刺激致VSMC肥厚 ,前胡丙素 (10μmol·L- 1温育 2 4h)和缺氧预适应合用使缺氧肥厚VSMC的NO含量恢复至正常VSMC水平 .结果提示前胡丙素与缺氧预适应对肥厚VSMC缺氧损伤有协同性的保护作用 .     

蛋白激酶C与血管平滑肌α_1肾上腺素受体触发Ca~（2＋）内流的关系

在酶新鲜分离的犬肠系膜上动脉平滑肌细胞，蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂佛波二丁酯（ＰＤＢ）引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被ＰＫＣ抑制剂１－（５－异喹啉磺酰）－２－甲基哌嗪（Ｈ７）所阻断，而哌唑嗪和普萘洛尔则不能阻断ＰＤＢ的这一作用；１０μｍｏｌ·Ｌ－１苯福林引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７部分阻断；在无Ｃａ２＋液，Ｈ７可部分抑制苯福林引起的内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，两者分别被抑制了３３±３％和５８±６％；ＫＣｌ（２０－１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地引起胞内钙升高，这一作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７不同程度地阻断；ＰＤＢ引起的胞内Ｃａ２＋增高也可分别被１．２５和２．５μｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米部分和全部阻断。上述结果提示ＰＫＣ参与苯福林引起的部分内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，但以参与外Ｃａ２＋内流为主；这一作用可能与ＰＫＣ激活，引起电压依赖性Ｃａ２＋通道开放有关。     

丝裂原活化蛋白激酶参与血小板源生长因子刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖(英文)

选择大鼠主动脉平滑肌细胞作为细胞模型 ,观察丝裂原活化蛋白激酶 ( MAPK)信号通路在血小板源生长因子 ( PDGF)诱导的血管平滑肌细胞( VSMC)增殖中的作用。用 [3 H]Td R参入率作为衡量 VSMC增殖的指标 ,以 Western-印迹方法 ,用磷酸化一抗测 MAPK磷酸化的程度作为衡量 MAPK活性的指标 ,实验结果发现 ,PDGF( 0 .0 2 - 2 0μg·L-1)诱导 VSMC增殖呈剂量依赖性。 PDGF( 2μg· L-1)能持续性激活 MAPK。用 PD980 59( 1 0 -1 0 0 mol· L-1)预处理 1 5min后 ,MAPK活性较对照组均有明显差别 ( P<0 .0 5) .MAPK反义寡核苷酸能明显抑制 PDGF诱导的 MAPK的激活 ,并明显抑制 VSMC[3 H]Td R参入。上述结果表明 ,MAPK参与 PDGF促细胞增殖的信号途经 ,它的持续性激活与细胞增殖有关 ,针对 p42 /p44MAPK设计的反义寡核苷酸类能有效抑制 PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

醋柳黄酮对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的 :探讨醋柳黄酮 (TFH )、槲皮素(Que)、异鼠李素 (Isor)对自发性高血压大鼠 (SHR)及Wistar Kyoto大鼠 (WKY )血管平滑肌细胞(VSMC)胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 :采用钙荧光探针Fluo 3/AM检测TFH及其主要单体Que和Isor,对培养的SHR及WKY的VSMC[Ca2 + ]i 水平在高钾 (K+ )、去甲肾上腺素 (NE)、血管紧张肽Ⅱ (AngⅡ )刺激下的改变 ,并与传统的钙拮抗剂维拉帕米进行对照研究。结果 :(1)TFH10 0mg·L- 1,Que 0 .1mol·L- 1,Isor 0 .1mol·L- 1对静息状态SHR的VSMC [Ca2 + ]i 有一定的抑制作用 (P <0 .0 1) ;而对WKY的VSMC [Ca2 + ]i无明显影响 (P >0 .0 5 )。 (2 )高K+ 使SHR[Ca2 + ]i 增加明显强于WKY(P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor明显抑制高K+ 去极化引起的SHR和WKY [Ca2 + ]i 升高 ,与维拉帕米作用相似 ,其对SHR [Ca2 + ]i升高的抑制作用明显强于对WKY(P <0 .0 1)。 (3)NE ,AngⅡ使SHR[Ca2 + ]i增加明显大于WKY (P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor对NE ,AngⅡ通过受体介导引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 升高具有明显的抑制作用。 (4 )无细胞外钙存在下 ,TFH ,Que ,Isor对NE引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 也具有一定程度的抑制效应 ,其对SHR[Ca2 + ]i 升高的抑制效应明显强于对WKY(P <0 .0 1)?     

蛋白激酶C不参与在无钙溶液内高钾引起的血管收缩

蛋白激酶Ｃ不参与在无钙溶液内高钾引起的血管收缩关超然２，ＧｅｎｎａｄｉＭＫＲＡＶＴＳＯＶ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＦａｃｕｌｔｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＴｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｏｎｇＫｏｎｇ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ）关键词钙；蛋...