九节龙-Ⅲ经BAD凋亡途径诱导胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究九节龙-Ⅲ诱导胶质瘤U251细胞凋亡及其内在机制。方法四甲基偶氨唑蓝（MTT）分析药物对U251细胞及胶质细胞增殖的影响；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（Annexin V．FITC／PI）染色、Hoechst33342染色和透射电镜检测细胞凋亡；Western blotting分析Bcl-xL／Bcl-2相关死亡启动子（BAD）蛋白表达和磷酸化水平。结果九节龙-Ⅲ以剂量和时间依赖方式抑制U251细胞活性（P〈0.05，IC50=8.2μg/ml），诱导染色质浓聚边集、凋亡小体形成等凋亡改变，且浓度低于40μg／ml时不抑制胶质细胞活性（P〉0.05）。Western blotting发现U251凋亡细胞内BAD表达明显增加、去磷酸化并被裂解。结论九节龙-Ⅲ经BAD去磷酸化和裂解的凋亡途径诱导了胶质瘤U251细胞的显著凋亡。     

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡及其机制研究

目的研究九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法用四甲基偶氨唑蓝（MTT）法检测不同剂量九节龙皂苷于不同时间（6、12、24、72h）对人胶质瘤SHG-d4细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Western—blot检测caspase-3和Bcl-2在SHG-44细胞中的表达情况。结果流式细胞仪检测显示,随着九节龙皂苷浓度的增大和时间延长,SHG-44细胞的凋亡率明显上升,Western—blot结果提示九节龙皂苷下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白caspase-3,九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长与增殖。结论九节龙皂苷引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用,通过调控caspase-3和Bcl-2诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡。     

下调磷酸甘油酸激酶 1 对胶质瘤 U373 细胞的放疗增敏作用及其机制的研究

目的研究下调磷酸甘油酸激酶1(PGK1)对U373细胞的放疗增敏作用;探讨PGK1参与的放疗增敏的可能机制。方法建立放射抵抗U373(RR-U373)细胞;采用Lipofectamine~(TM) 2000将shRNA-PGK1转染至U373细胞;对照组为0 Gy,处理组为5 Gy放射治疗。应用MTT法、划痕实验、Matrigel侵袭实验分别检测放疗前后各组细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力; Western-Blot法检测各组细胞PGK1、CIN(chronophin)和丝切蛋白1(cofilin 1,CFL1)蛋白表达量。结果在U373细胞和RR-U373细胞中,相对于对照组,下调PGK1的细胞在放疗前后的增殖、迁移及侵袭能力均减弱;下调PGK1表达后,CIN、CFL1蛋白表达水平降低。结论下调U373细胞中PGK1的表达对胶质瘤U373细胞有放疗增敏作用。PGK1可能通过调节CIN、CFL1蛋白表达影响胶质瘤细胞对放射的敏感性。     

人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞U87MG凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rh2对胶质瘤细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法 将培养的人胶质瘤细胞U87MG随机分为人参皂甙Rh2组、人参皂甙Rh2+尼莫地平组和对照组。人参皂甙Rh2组在常规培养细胞时加入20 μg/ml的人参皂甙Rh2，人参皂甙Rh2+尼莫地平组在人参皂甙Rh2组培养细胞时加入浓度为10 μmol/L的尼莫地平。利用流式细胞仪检测U87MG细胞凋亡，利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测U87MG细胞内钙离子浓度。结果 与对照组相比，人参皂甙Rh2促进U87MG细胞凋亡（P<0.05），且增加细胞内游离钙离子浓度（P<0.05）；尼莫地平显著减少人参皂甙Rh2引起的U87MG细胞凋亡（P<0.05）。结论 人参皂甙Rh2可以通过增加细胞内游离钙离子浓度促进U87MG细胞凋亡。     

华蟾素诱导人胶质瘤U87细胞凋亡的作用机制研究

目的 探讨华蟾素(Cinobufacini)对人胶质瘤U87细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U87细胞分为对照组、华蟾素组(依华蟾素水平不同分为3个亚组),MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤U87细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平。结果 华蟾素对胶质瘤U87细胞增殖有抑制作用; 流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测显示,随着华蟾素作用浓度的递增,胶质瘤U87细胞凋亡率呈剂量依赖性递增; 华蟾素作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平升高。结论 华蟾素通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平来抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进其凋亡。     

siRNA-ATF3表达载体对人胶质母细胞U373MG的作用研究

目的 构建、筛选并鉴定siRNA-ATF3表达载体,探讨转录激活因子3(ATF3)、乳腺丝氨酸蛋白酶抑制因子(Maspin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在转染了siRNA-ATF3表达载体的人胶质母细胞U373MG细胞株中的表达和意义.方法 构建siRNA-ATF3表达载体,并转染U373MG细胞株,以荧光定量PCR...     

二氢杨梅素促进胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的 探讨二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)对人胶质瘤U251细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U251细胞分为对照组和DHM组(根据DHM水平的不同分为3个亚组),MTT法观察细胞活性,Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态,Western blot检测Bax和bcl-2蛋白表达水平。结果 Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测显示,随着DHM水平的增高,U251细胞凋亡率呈剂量依赖性增高; 电镜观察显示,对照组胶质瘤U251细胞形态正常,DHM组胶质瘤U251细胞肿胀,细胞器呈碎片样分散,随着DHM水平升高,线粒体、内质网等细胞器结构破坏明显。此外, DHM处理后Bax蛋白表达水平增高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论 DHM可能通过改变Bax及Bcl-2蛋白表达水平来抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进其凋亡。     

vasohibin基因重组腺病毒对胶质瘤U251移植瘤的抑制作用

目的探讨vasohibin基因重组腺病毒对胶质瘤U251移植瘤的抑制作用。方法构建vasohibin基因重组腺病毒,观察其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响。建立胶质瘤U251移植瘤模型,观察vasohibin基因重组腺病毒对胶质瘤U251移植瘤生长的抑制作用。结果 vasohibin基因重组腺病毒能明显抑制HUVEC的增殖,显著减缓胶质瘤U251移植瘤生长(P<0.05),同时明显减少了移植瘤组织微血管密度(P<0.05)。结论 vasohibin基因重组腺病毒能明显抑制胶质瘤U251移植瘤的生长与血管生成,为胶质瘤的基因治疗提供了新的思路。     

蒿甲醚对人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响

目的研究蒿甲醚对体外培养的人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法不同浓度蒿甲醚（25、50、100、200、400、800μmol／L）作用U251胶质瘤细胞,四甲基偶氮唑盐法测定药物抑制率和半抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测细胞周期的变化和细胞凋亡情况;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况。结果蒿甲醚对U251细胞生长抑制率随药物浓度增加而显著增加（P〈O．05）,同时随药物作用时间延长而显著增加（P〈O．05）。药物作用24、48和72h,其IC50分别为849．28±25．89、518．93±32．83和172．99±6．06μmol／L,三者之间均差异显著（P〈0．05）。经400μmol／L蒿甲醚作用48h,Hochest33258荧光染色可观察到凋亡小体。经400μmol／L蒿甲醚作用24、48、72h,细胞凋亡率分别为（4．55±0．24）％、（12．82±1．88）％和（24．22±2．17）％,三者之间均差异显著（P〈0．05）;细胞周期分析显示,随着蒿甲醚作用时间的延长,G0/G1期细胞比例显著增加（P〈0．05）,S期和G2/M期细胞比例显著减少（P〈O．05）。结论蒿甲醚能抑制U251细胞生长,呈剂量和时间依赖性;其机制可能为将细胞阻滞在G0/G1期并诱导其凋亡。     

High concentrations of cannabinoids activate apoptosis in human U373MG glioma cells

Cannabinoids bind to two G-protein-coupled receptors, CB1 and CB2, expressed by neurons and cells of the immune system, respectively. Glioma cells (astrocyte-derived brain tumor cells) express cannabinoid receptors, and numerous in vitro and in vivo studies performed in rodents have concluded that apoptosis could be induced by cannabinoids in these cells. Whether this also applies to human cells is controversial; we, therefore, assessed the effect of cannabinoids on human glioma cell viability with the human astrocytoma cell line U373MG. We report here that U373MG human glioma cells are sensitive only to high concentrations of cannabinoids (>5 microg/ml for Delta(9)-THC). Similar concentrations of the compounds promoted a rapid activation of extracellular-regulated kinase and c-Jun NH2-terminal kinase, suggesting that cannabinoid receptors are functional in U373MG cells. Nevertheless, these kinases are not involved in cannabinoid-induced cell death in U373MG cells, insofar as blocking their activation with specific inhibitors does not reduce cell death. CB1 is expressed in U373MG cells and is involved in cannabinoid-induced cell death, in that blocking its activation with a specific antagonist (AM251) almost totally prevented cell death following incubation of the cells with Delta(9)-THC. In addition, as already reported, some cannabinoids may have modest proproliferative properties in U373MG cells. Human U373MG glioma cells are sensitive only to very high, pharmacologically irrelevant concentrations of cannabinoids, so it seems unlikely that cannabinoids would constitute promising molecules for treating malignant astrocytoma; they do not induce glioma cell death at doses that could be applied safely to humans.     

广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素对胶质瘤细胞株U251增殖抑制作用的研究

目的 探讨广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素对胶质瘤细胞株U251增殖抑制作用,并初步阐明其作用机制. 方法 以含10%胎牛血清RPMIl640培养液湿化孵育培养U251细胞.采用MTT法通过抑制率评价蜘蛛毒素对胶质瘤细胞的细胞毒作用,应用倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态及细胞核变化,采用TUNEL法检测蜘蛛毒素对U251细胞凋亡的影响. 结果 蜘蛛毒素能够抑制胶质瘤细胞株U251的增殖.其48 h及72 h的半量抑制浓度为82.60μg/mL和71.12μg/mL,且呈明显的量效及时效关系.HE染色观察到胶质瘤细胞核同缩、碎裂的凋亡征象.TUNEL法染色可见凋亡的胶质瘤细胞核染成棕黄色. 结论 广西虎纹捕鸟蜘蛛毒素能够抑制胶质瘤细胞U251增殖,其抑制作用可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现.     

Mobilization of intracellular calcium by substance p in a human astrocytoma cell line (U-373 MG)

Variations in intracellular free calcium concentration (Δ[Ca²⁺]_i) were measured in intact and isolated human astrocytoma cells (U373 MG) loaded with fura-2 acetoxymethylester. Microperfusion of 50 nM substance P (SP), applied for 1 s, increased [Ca²⁺]_i by 351 nM from a stable basal level of [Ca²⁺]_i of 26 nM. The peak Δ[Ca²⁺]_i induced by SP was dose dependent with a threshold of 10_-3 nM, an ED₅₀ of 1.3 nM and a maximal effect for concentrations of SP greater than 100 nM. The NKI receptor agonist, [Sar⁹Met(O₂)¹¹]SP, mimicked the effect of SP, while the NK₂ and NK₃ selective receptor agonists, [N1¹⁰]NKA(4-10) and senktide, respectively, had no effect. The Δ[Ca²⁺]_i induced by SP was unaffected by 100 μM cadmium or by removal of extracellular calcium ions. Caffeine up to 30 mM had no effect on [Ca²⁺]_i. In contrast, thapsigargin increased resting [Ca²⁺]_i by 92 nM and reduced the Δ[Ca²⁺]_i induced by SP. A pertussis treatment (500 ng/ml-24 h) did not modify the Δ[Ca²⁺]_i induced by SP. We conclude that SP, acting on a NK1 receptor, mobilizes cytosolic calcium from an intracellular calcium pool which can be partially depleted by thapsigargin. © 1994 Wiley-Liss, Inc.     

Bcl-2在人脑胶质瘤干细胞样细胞中的表达及病理相关性

目的 检测B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)基因在胶质瘤干细胞样细胞(GSLCs)中的表达水平,并分析Bcl-2与来源胶质瘤恶性程度的相关性.方法 从8例临床标本中培养出GSLCs并鉴定后,检测Bcl-2在GSLCs以及相应原代胶质瘤细胞中的mRNA和蛋白水平并比较分析;此外对GSLCs中Bcl-2水平及来源胶质瘤恶性程度之间的关系进行分析.结果 从8例胶质瘤标本中培养出GSLCs并通过鉴定.实时逆转录酶-聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测显示Bcl-2在GSLCs中的mRNA和蛋白水平均显著高于对应的原代胶质瘤细胞,配对t检验结果分别为P＜0.001和P＜0.005,有统计学意义.此外,Bcl-2的在Ⅳ级脑胶质瘤来源的GSCLs中的表达水平明显高于Ⅲ级脑胶质瘤来源的GSCLs.结论 首次检测并发现GSCLs中Bcl-2的表达水平高于相应的原代胶质瘤细胞,此结果与胶质瘤干细胞(GSCs)特点相符,这可能是GSCs产生治疗耐受性并逃避凋亡的原因之一.以Bcl-2为靶点的抗肿瘤治疗须能诱导GSCs凋亡,才有望治愈胶质瘤.     

齐墩果酸通过MAPK/ERK信号传导通路对U87 MG细胞增殖及凋亡的体外实验研究

目的 探讨齐墩果酸(0A)对神经胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 以U87MG细胞为研究对象,使用25、50、80、100、150和200μg/ml的OA处理24、48和72h后,采用MTT实验检测OA对体外培养U87MG细胞增殖抑制作用,计算其抑制率;采用划痕法检测OA对U87MG细胞迁移能力的影响;用流式细胞仪分析OA对U87MG细胞周期与凋亡的影响;通过Western blot检测OA对MAPK/ERK信号传导通路活性的影响.结果 50μg/ml以上浓度的OA处理48h后,U87MG细胞的形态发生不同程度的变化,大量细胞脱落.150μg/ml和200μg/ml的OA处理U87MG细胞72h后,生长抑制率可达100％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).25μg/ml的OA处理48 h后,迁移至划痕区的细胞数量相比于对照组明显减少.经50μg/mlOA作用48h后,处于Go/G1期的细胞从64.23％上升至75.03％,说明发生Go/G1期阻滞.同一浓度下,细胞凋亡率达到18.77％.U87MG细胞中MEK和ERK蛋白的磷酸化水平受到明显的抑制.结论 OA可显著抑制U87 MG细胞的生长增殖,呈一定的量效关系;OA可明显抑制U87MG细胞的迁移,并能抑制MAPK/ERK信号传导通路的激活.OA通过抑制MAPK/ERK信号传导通路的激活,可以抑制神经胶质母细胞瘤细胞的增殖生长.