瘦素基因敲除肥胖大鼠的血糖及病理长期观察

目的对Leptin基因敲除SD大鼠血糖变化及病理表型进行长期分析,为使用该大鼠作为糖尿病和脂代谢模型积累数据。方法 western blot检测Leptin+/+大鼠和Leptin-/-大鼠肝脏中Leptin的表达。利用称量方法测定Leptin基因敲除的SD大鼠(Leptin-/-)1,3,6,8月龄的体重变化,利用稳豪血糖仪采尾血测定1,3,6,8月龄Leptin-/-大鼠空腹血糖值。HE染色和免疫组织化学观察Leptin-/-大鼠胰腺及肝脏的病理学变化。结果 Leptin-/-大鼠肝脏中表达变短的功能异常的Leptin蛋白。Leptin-/-大鼠从1月龄开始出现显著的体重增加,8月龄时雌性体重为884 g,雄性体重可以达到1200 g,是野生SD大鼠的2倍。自1月龄起,Leptin-/-雌鼠的空腹血糖值显著高于野生大鼠,在1月龄到6月龄之间差别明显(40%~26%),到8月龄和野生大鼠恢复到近正常水平。8月龄Leptin-/-大鼠肝脏肝小叶中出现大量脂肪空泡,胰腺内较多脂肪细胞浸润、胰岛数量明显增多,体积增大,胰岛素阳性β细胞增多。结论 Leptin-/-大鼠表型表现为肥胖,脂肪肝,胰岛增生和早期高血糖。     

Tg-visfatin×ob/ob小鼠表型特征与内脂素表达

[摘要] 目的 内脂素（visfatin ）是近年发现的一种在内脏脂肪中大量表达的细胞因子,很多研究表明其与胰岛素抵抗和2型糖尿病有关,但作用效果存在争议。本文将visfatin转基因小鼠和2型糖尿病模型小鼠ob/ob杂交,研究Tg-visfatin×ob/ob小鼠的表型特征并探讨内脂素的作用。方法 将visfatin转基因小鼠与ob（+/-）小鼠杂交,获取visfatin转基因ob/ob小鼠（Tg-visfatin×ob/ob）,以ob/ob小鼠为对照,测定两种小鼠1至9月龄的体重变化,分别在3,5,9月龄测定其腹腔糖耐受和胰岛素耐受情况,并对其从9月龄至11月龄的死亡率进行统计。结果 两种小鼠在1至9月龄的体重没有显著性差异。腹腔糖耐受和胰岛素耐受实验显示,与ob/ob小鼠相比,3月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的糖耐受受损及胰岛素耐受情况得以改善;5月龄时,Tg-visfatin×ob/ob 小鼠仅糖耐受受损得以改善;9月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠具有更严重的糖耐受受损及胰岛素耐受。统计结果显示,从9月龄到11月龄之间,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的死亡率比ob/ob小鼠提高了44.4%。结论 visfatin体内的高表达对ob/ob小鼠糖耐受和胰岛素耐受有影响,作用效果随着小鼠的年龄不同而变化,在早期起到代偿性的缓解ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受的作用,到后期表现为失代偿性的加重了ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受,并增加了小鼠的死亡率。     

大鼠胰腺发育过程中胰岛素释放功能完善的研究

目的: 明确大鼠胰腺发育不同时期胰岛素合成及释放相关基因的表达差异,探讨胰岛素分泌功能完善的过程? 方法:分离并提取SD大鼠胚胎发育12.5天(E12.5)?E15.5?E18.5?新生?出生后21天及成年大鼠胰腺组织,利用Affymetrix公司的高密度寡核苷酸芯片检测大鼠发育各阶段胰腺组织基因表达谱并分析胰岛素合成及释放相关基因的特异及差异表达情况?分别进行正常新生鼠?成年鼠血糖水平及正常新生第1?3?7?10?12天大鼠腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)?采用ELISA法测定新生鼠和成年鼠血中胰岛素浓度?新生大鼠胰岛细胞原代培养观察新生鼠胰岛细胞的形态?结果:在胰岛素合成及释放相关基因中,胰岛素基因及其特异性转录因子如PDX-1在大鼠E12.5~E15.5时即开始有表达,以后胰岛素基因持续存在且表达增多;胰岛素胞吐过程中的关键基因Syntaxin-1a?Vamp-2?Rab-3a?Munc13-1等从E15.5开始出现,以后表达量亦增多;而葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)相关基因中,葡萄糖转运体-2(Glut2)在胚胎早期开始表达,葡萄糖激酶(GCK)在胚胎中晚期才表达?自E18.5即检测到大鼠血中胰岛素的存在,随着胚胎的发育,血胰岛素浓度逐渐升高?新生大鼠对葡萄糖负荷不能耐受,出现IPGTT异常,出生1周以后IPGTT才逐渐趋于正常?新生鼠的胰岛形态与成年鼠相似,但体积相对较小,透亮度稍差?结论:大鼠胚胎胰腺发育早中期即已具备胰岛素合成及分泌的能力,但新生鼠刚出生时,其胰岛功能仍尚未完善,出生以后才逐渐对葡萄糖负荷有良好的反应性?     

应用CRISPR/Cas9技术敲除Trib3基因大鼠的基因型鉴定

目的构建Trib3基因敲除大鼠模型及基因型鉴定。方法靶向敲除大鼠Trib3基因后,通过基因测序和PCR技术对大鼠Trib3基因的第3号外显子删除情况进行检测与基因型鉴定。结果得到阳性F0代首建大鼠Trib3-/+,通过自交得到F1与F2代大鼠,筛选出F2代Trib3-/-大鼠。结论成功制备Trib3基因敲除大鼠模型,依次鉴定出Trib3-/-、Trib3-/+和Trib3+/+大鼠,并可以稳定遗传,为后续的实验开展提供理论依据。     

加味苓桂术甘汤对代谢综合征大鼠脂肪-胰岛素轴影响

目的:探讨加味苓桂术甘汤对MS大鼠脂肪-胰岛素轴的早期干预作用。方法:采用高脂高糖高盐饲料喂养建立MS大鼠模型,筛选符合MS标准的大鼠随机分为模型对照组及加味苓桂术甘汤高、中、低剂量组,相应药物灌胃4周,检测体重、空腹血糖、血清胰岛素、血脂、瘦素、FFA,计算Lee's指数和胰岛素敏感指数。结果:(1)各组大鼠体重、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血游离脂肪酸(FFA)升高,高密度脂蛋白(HDL)降低,空腹血糖、瘦素水平、胰岛素水平均升高,与正常对照组有明显差异(P0.05)。(2)加味苓桂术甘汤高、中剂量组较模型对照组的HDL明显升高(P0.05),体重、TC、TG、FFA、血糖、胰岛素、瘦素明显降低(P0.05),加味苓桂术甘汤高剂量组的差异更为显著(P0.01),而加味苓桂术甘汤低剂量组仅对FFA有一定的降低作用(P0.05)。结论:加味苓桂术甘汤可调节MS大鼠糖脂代谢,进而改善脂肪-胰岛素轴的功能,其机制可能与改善胰岛素抵抗和调节瘦素、FFA等脂肪细胞因子表达有关。     

QPRT基因功能缺失对肾脏发育的影响

目的：研究喹啉磷酸核糖基转移酶（quinolinic phosphoribosyl transferase,QPRT）基因功能缺失对胚胎肾脏发育的影响。方法：通过免疫组化确定QPRT在胎鼠肾脏组织的表达;构建QPRT基因缺陷型小鼠模型,取QPRT+/+（WT）型和QPRT-/-（KO）型小鼠的血清进行肾功能检测;称重法计算KO及WT组小鼠的体重、肾脏重量及肾脏系数;用HE染色观察小鼠及其子代肾脏病理组织学变化。结果：在妊娠13 d胎鼠肾脏组织,QPRT在发育中的输尿管芽中强烈表达。在基因敲除小鼠模型中,QPRT-/-小鼠的肾脏系数（肾重/体重）显著低于野生型小鼠（P<0.05）,且QPRT-/-小鼠的尿素氮、血肌酐、尿酸水平高于野生型组（P <0.05）。肾脏组织HE染色显示QPRT-/-仔鼠的肾脏实质部位局部呈现蜂窝状囊性扩张;QPRT+/-仔鼠见肾脏皮质间质局灶性疏松水肿;QPRT+/+仔鼠肾脏未见明显病理组织学变化。结论：QPRT基因功能缺失可能影响胚胎肾脏发育。     

糖耐量异常OLETF大鼠胰腺结构及功能改变与糖、脂代谢的关系

目的 观察糖耐量异常OLETF大鼠的血液生化和病理改变,阿卡波糖治疗后的临床及病理转归。方法 雄性OLETF大鼠分为3组,糖耐量异常组10只,阿卡波糖治疗组10只,糖尿病组8只。以同种鼠系正常糖耐量鼠为正常对照组。结果 糖耐量异常大鼠肥胖、内脏脂肪增加,甘油三脂合成、分泌增加,导致胰腺、骨骼肌细胞内及细胞间脂肪浸润。结论 脂质代谢紊乱一方面引起胰岛素抵抗,一方面导致胰腺分泌功能减退,严重者出现糖尿病。阿卡波糖治疗可以减轻该鼠体重、降低血清咀固醇及甘油三脂,减轻胰腺脂肪沉积,恢复胰腺分泌胰岛素功能,有效降低餐后血糖。     

利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Irs1）基因

目的为研究胰岛素受体底物1(Irs1)基因与代谢病之间的关系,我们利用CRISPR/Cas9系统敲除大鼠Irs1基因,为研究代谢病提供基因敲除大鼠。方法针对Irs1第一外显子,设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9。将Cas9 mRNA和sgRNA混合物注射入SD大鼠的受精卵中,实现靶基因敲除。用T7EN1实验初步检测靶基因的修饰情况,再经过测序分析确定突变。结果获得了5个在Irs1基因突变的首建鼠,突变效率为83%。结论得到了稳定遗传的Irs1基因敲除大鼠。     

肥胖大鼠血糖、血脂、瘦素和下丘脑瘦素水平的变化

目的 建立营养性肥胖鼠的动物模型,观察营养性肥胖鼠中糖、脂代谢异常和胰岛素抵抗及瘦素抵抗的情况。方法 （1）高脂饮食诱导建立肥胖大鼠模型;（2）采用放射免疫法测定其血清胰岛素．瘦素和下丘脑组织的瘦素水平。结果 （1）肥胖和超重大鼠血糖、血脂、血清瘦素水平程度显著升高;（2）肥胖组和超重组大鼠下丘脑组织的瘦素含量低于正常组;（3）大鼠的体重、TG、HOMA—IR与血清瘦素水平呈显著正相关,而与下丘脑瘦素水平呈负相关。结论 肥胖鼠体内存在糖、脂代谢异常和胰岛素抵抗,同时还存在瘦素抵抗。这些代谢紊乱对肥胖的发生具有重要意义。     

通络方剂对1型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的探讨通络方剂对1型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。方法 30只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)、通络方剂治疗组(TLR),每组10只;后两组大鼠采用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射制备1型糖尿病模型。模型制备成功后,通络方剂组给予通络方剂(1.0 g.kg-1.d-1)灌胃,糖尿病组、正常对照组给予同剂量双蒸水灌胃。8周后比较各组大鼠体质量、附睾周围脂肪组织质量、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及血总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、瘦素(leptin)水平,检测脂肪组织中瘦素mRNA表达水平。结果与糖尿病组相比,通络方剂治疗组大鼠体质量增加(P<0.01)、血FBG降低(P<0.05)、FINS升高(P<0.01)、FFA降低(P<0.01)、血leptin水平增加(P<0.05);脂肪组织leptin mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论通络方剂可能通过改善糖尿病大鼠瘦素、胰岛素低水平状态纠正糖脂代谢紊乱。     

胰岛素抵抗大鼠 Orexin/leptin系统变化及其影响因素的研究

目的研究IR大鼠下丘脑及脂肪组织中orexin和leptin系统的变化,分析其可能的调控因素.方法IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实;RT-PCR技术检测orexin/leptin及其受体(OX1R、OX2R、LR)mRNA的表达;生化比色法测定血清FFA、放免法测定血清TNF-α.结果该模型大鼠下丘脑中Prepro-orexin表达减少约80%,OX1R、OX2R分别增加3.4及3.2倍,leptin mRNA增加约8倍;LR减少78%;血清FFA和TNF-α均升高;钳夹技术中葡萄糖输注率(GIR60-120)明显低于对照组.结论高脂肪膳食可诱导大鼠体内IR;并导致orexin/leptin系统平衡状态的破坏;orexin与leptin相互作用共同维持机体能量代谢的稳定:FFA和TNF-α可能参与该系统的调控.     

重组瘦素治疗对链脲佐菌素糖尿病大鼠胃促生长素水平的影响

目的：探讨重组瘦素治疗对链脲佐菌素（STZ）糖尿病大鼠血浆胃促生长素水平及胃壁组织mRNA表达水平的影响。方法：SPF级近交系雄性健康Wistar大鼠分为正常对照组(NC, n=8)、糖尿病组（DM, n=6）、糖尿病瘦素治疗组(DM-LEP, n=6)和糖尿病瘦素治疗饮食配对组(DM-PF, n=6)。瘦素按4mg/kg皮下注射。观察治疗前后各组大鼠进食量、体重及血糖、胰岛素、瘦素、胃促生长素水平以及瘦素在脂肪组织和胃促生长素在胃壁组织的mRNA表达水平。结果：瘦素治疗后,DM-LEP组大鼠摄食量显著低于DM组(P＜0.05),血糖水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05）,但与NC组比较,仍有显著差异（P＜0.01）;DM-LEP组和DM组及DM-PF组相比,血清瘦素水平及其脂肪组织表达水平均显著升高（P均＜0.05）,但仍低于NC组（P＜0.05）;DM-LEP组血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA表达水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05）,但仍高于NC组（P＜0.05）。结论：瘦素可降低STZ大鼠血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA的表达水平,且此作用与其抑制摄食作用无关。     

脂蛋白脂肪酶基因敲除小鼠脂代谢动态观察

目的通过脂蛋白脂肪酶(LPL)基因敲除杂合子LPL(+/-)小鼠模型脂质代谢的动态观察,进一步明确LPL在脂代谢中的关键作用。方法野生型16周龄C57小鼠6只(对照组)、16周龄LPL(+/-)小鼠6只[LPL(+/-)16周龄组]、28周龄LPL(+/-)小鼠6只[LPL(+/-)28周龄组],螺旋CT测量小鼠内脏脂肪和皮下脂肪的含量,内眦静脉采血分离血清检测血清甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平,然后处死小鼠,检测3组小鼠内脏脂肪和腹部及股部皮下脂肪的质量,并制备肝脏、四肢骨骼肌、腹部及股部皮下脂肪、内脏脂肪、胰腺组织匀浆,检测肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、皮下脂肪和胰腺的TG和FFA水平。结果LPL(+/-)16周龄组小鼠血清、肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、胰腺中的TG、FFA水平及皮下脂肪FFA水平较对照组均呈不同水平的增加,但差异无统计学意义(P>0.05),皮下脂肪TG的增加有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)28周龄组小鼠血清、肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、胰腺及皮下脂肪中的TG、FFA水平较LPL(+/-)16周龄组增加,但仅肝脏和内脏脂肪TG水平与LPL(+/-)16周龄组之间有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)28周龄组的血清、肝脏、皮下脂肪、内脏脂肪TG及骨骼肌、皮下脂肪、胰腺FFA水平较对照组增高,差别有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)16周龄组的内脏脂肪质量高于对照组,差别具有统计学意义(P<0.05);LPL(+/-)28周龄组小鼠内脏脂肪和皮下脂肪的质量和含量均高于对照组和LPL(+/-)16周龄组,差别均具有统计学意义(P<0.05)。结论LPL是脂代谢的关键酶,LPL(+/-)小鼠血清及组织脂质变化显著。     

脂肪肝脂代谢与体脂构成和消脂素的关系

目的 探讨脂肪肝患者的脂代谢与体脂构成和消脂素（leptin)的关系。方法 观测了76例脂肪肝患者及30例正常对照者的血清leptin、血脂、血糖、胰岛素（INS）、C－肽（C－P）水平,并进行了比较。同时将血清leptin与体脂含量评估指标（BMI,WHR,％Fat)等做了相关分析。结果 脂肪肝组leptin水平及TC、TG含量明显高于正常对照组（P＜0．01）,leptin及血脂的增高与体脂含量成正比。空腹INS,C－P水平明显高于正常对照组（P＜0．01）,口服葡萄糖（75g)2h后增高更加显著（P＜0．001）。结论 脂肪肝患者多存在有leptin抵抗、高胰岛素血症,且与脂代谢紊乱密切相关;体脂的含量和分布是血浆leptin的独立影响因素。     

THE OREXIN SYSTEM IN INSULIN RESISTANCE RAT MODEL INDUCED BY HIGH-FRUCTOSE DIET

INTRODUCTIONOrexin,aneuropeptidefoundin1998,hasbeenshownofbeinginvolvedinmanyphysiologicalprogressessuchasregulationoffoodintake,sleep,andinresponsetoacutestressthroughitsreceptorsorexin1receptorandorexin2receptor.Theachieve-mentofintroductionoforexintogetherwiththeintro-ductionofobesegene(obgene)anditsencodingproteinleptinin1994s,hasbeenwellrecognisedasstepstonesinthefieldofobeseresearch.Inthisstudy,weaimedatthoseregulatingfactorswithinin-sulinresistancebyevaluatingorexin/leptinandtheirre…     

Ghrelin对糖尿病大鼠摄食的影响

目的探讨Ghrelin在糖尿病大鼠摄食过量调控中的作用。方法21只大鼠随机分为：①正常对照组（N＋NS组）7只,腹腔注射枸橼酸缓冲液1mL,皮下注射生理盐水（NS）0．1mL;②实验组14只,采用链脲佐菌素（sTz）腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,48h后随机分为糖尿病组（STZ＋NS组）7只,皮下注射NS0．1mL,糖尿病＋胰岛素组（sTz＋INS组）7只,皮下注射人胰岛素0．1mL（7U）。各组均每天注射2次,共注射14d。每天检测各组大鼠血糖水平、摄食量及体质量的改变;实验结束检测血清瘦素、生长激素水平,以及下丘脑神经肽Y（NPY）mRNA和胃GhrelinmRNA表达。结果注射STZ后5d,STZ＋NS组血糖水平持续高于27．8mmol／L;STZ＋INS组血糖水平逐渐下降,最终在8d后与N＋NS组无显著差异（P〉0．05）;STZ＋NS组摄食量较N＋NS组显著增多,体质量显著减少（F一9．56～29．25,q一6．46～9．56,P〈O．05）;STZ＋INS组与STZ＋NS组比较,大鼠摄食量显著减少,体质量显著增加（q=3．70～9．15,P％0．05）。与N＋NS组相比,STZ＋NS组血浆胰岛素、瘦素及生长激素水平显著降低,而STZ＋INS组血浆瘦素及生长激素水平显著升高（F=26．31～214．28,q=3．21～11．28,P〈0．05）。STZ＋NS组血浆Ghrelin水平显著高于N＋Ns组（F=52．31,q=12．41,P〈0．05）,STZ＋INS组血浆Ghrelin水平趋于正常（P〉0．05）。STZ＋NS组下丘脑NPYmRNA表达较N＋NS组显著增高（F=97．96,q—17．78,P〈O．05）。结论糖尿病大鼠血浆Ghrelin、瘦素水平以及下丘脑NPY表达的改变,可能与糖尿病摄食过盛形成有关。     

苦瓜乙醇提取物对肥胖大鼠糖代谢和内脏脂肪的影响

目的 研究苦瓜乙醇提取物对喂饲高脂饲料所致肥胖大鼠糖代谢和内脏脂肪量的影响。方法 高脂饲料饲养制备肥胖大鼠模型。肥胖大鼠随机分为模型组,苦瓜乙醇提取物低、中、高剂量（9、18、36 g/kg）组,左旋肉碱（600 mg/kg）阳性对照组,另设对照组（正常饲料饲养）和苦瓜乙醇提取物36 g/kg给药组。各组大鼠每天ig相应药物或等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每天记录摄食量,每周记录体质量。给药第6周进行糖耐量实验;给药7周后所有动物禁食18 h,麻醉后腹主动脉采血,检测血清葡萄糖和胰岛素水平;分离附睾、肾周和肠系膜脂肪并称质量,附睾脂肪组织随后进行HE染色检测脂肪细胞病变。结果 苦瓜乙醇提取物36 g/kg能够明显降低肥胖大鼠体质量,抑制大鼠食物利用率,减少附睾、肾周和肠系膜白色脂肪量,降低空腹血糖浓度,抑制附睾脂肪细胞肥大;苦瓜乙醇提取物18 g/kg也明显降低肥胖大鼠附睾脂肪质量。但苦瓜乙醇提取物对肥胖大鼠的糖耐量和胰岛素抵抗指数无明显影响。结论 苦瓜乙醇提取物通过抑制肥胖大鼠内脏脂肪聚积和附睾脂肪细胞肥大以及降低空腹血糖浓度发挥减肥和抗糖尿病作用。     

脂肪细胞因子与胰岛素抵抗关系的研究进展

现在研究认为脂肪组织是胰岛素抵抗(IR)产生的始发部位。脂肪组织除了能调节人体能量代谢平衡外,还可以分泌多种细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、瘦素、脂联素和抵抗素等。在已发现的脂肪细胞因子中,瘦素、TNF-α和脂联素等与IR密切关联。瘦素可抑制胰岛素分泌,TNF-α的分泌与胰岛素调节的葡萄糖代谢存在高度负相关。脂联素对于维持胰岛素敏感性和正常的糖代谢是必需的。同时,亦有一些细胞因子与IR的关系有待证实。本文就脂肪因子与胰岛素抵抗之间的关系进行综述。     

重复性"饥饿/再投喂"大鼠体重控制与能量平衡调节的初步研究

目的:经过重复性"饥饿/再投喂"摄食方式的处理,探讨大鼠有关体重调节的瘦素(leptin)、生长激素(GH)和甲状腺激素(T4)与肥胖发生机制的关系.方法:设计"重复性饥饿l d/再投喂1 d,持续6 w"的饲喂(基础饲料和高脂饲料)处理动物模型,用放射免疫的方法测定血清中leptin、GH、T4的水平.结果:幼年大鼠血清leptin含量相对比成体低,隔天饲喂基础饲料组和高脂饲料组中大鼠体重减轻,而leptin水平明显高于对照组,且与体重明显呈负相关;幼年处理组GH比对照组略高,但成年大鼠处理组随着体重减轻,GH水平却有下降;幼年和成年处理组T4水平都有增加.结论:Leptin与神经内分泌系统组成一个双向闭合环路,leptin与GH、T4共同作用于下丘脑发挥体重调节功能.