吡咯烷二硫代氨基甲酸酯减轻2型糖尿病大鼠胰岛β细胞氧化损伤

 目的 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 用长期高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ,27mg/kg体重）建立2型糖尿病大鼠模型。PDTC治疗组大鼠每天腹腔注射PDTC（50mg/kg）1次,1周后取血浆检测血糖。取胰腺组织匀浆测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的含量;应用免疫组化和Western blot等检测胰腺组织中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的表达及硝基化酪氨酸（NT）的水平;流式细胞术检测胰岛β细胞凋亡百分率。结果 糖尿病大鼠血糖、MDA水平均显著高于对照组（P﹤0.01）;SOD和GSH-PX水平明显低于对照组（P﹤0.01）;胰岛组织中iNOS表达水平（0.37±0.06）和NT生成量（0.24±0.01）均较对照组（0.11±0.01）和（0.12±0.01）明显增多（P<0.01）。PDTC治疗后血糖明显降低,MDA明显减少（P＜0.01）;而SOD、GSH-PX水平明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;胰岛组织中iNOS表达及NT生成均明显减少（P＜0.01）;胰岛β细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）。结论 PDTC可以降低血糖,减轻大鼠体内氧化应激反应,减少糖尿病大鼠胰岛β细胞的凋亡。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

雷公藤单体T4对胰岛β细胞免疫保护作用的机制探讨

目的探讨雷公藤单体T4对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下6组作用：①IL-1β＋IFN-γ组;②IL-1β＋IFN-γ＋DXM组;③IL-1β＋IFN-γ＋T4组;④T4组;⑤DXM组;⑥对照组（DMEM）。ELISA法检测培养上清IL-4、IFN-γ水平,硝酸还原酶法检测上清一氧化氮水平,化学发光法检测上清胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌IL-4水平较其他各组减少（P〈0.01）,IFN-γ分泌比其他各组增多（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ比其他各组降低（P〈0.01）。②T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）,IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）。③IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌NO较其他各组增高（P〈0.01）,胰岛素分泌减少（vsIL-1β＋IFN-γ＋T4组、IL-1β＋IFN-γ＋DXM组,P〈0.05;vsT4组、DXM组、对照组,P〈0.01）。④T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）,Ins增加（P〈0.05）;与IL-1β＋IFN-γ＋DXM组相比,NO分泌减少（P〈0.05）。结论 T4可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

缺血预处理减轻脑皮质缺血再灌注损伤的研究

目的观察缺血预处理对脑皮质缺血再灌注期间神经元凋亡及磷酸化糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）的影响,探讨其保护作用机制。结论雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组（S）、缺血再灌注组（I/R）及预处理组（IPC）,每组各10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。IPC组分离双侧颈总动脉,夹闭10s,开放30s,反复3次,最后夹闭10min。于术后2d处死大鼠,取出脑组织,采用TUNEL法检测大鼠皮质神经元凋亡情况;TTC法检测大鼠脑部梗死面积;光谱法检测磷酸化的GSK-3β水平（p-GSK-3β）;采用Linear Regression分析GSK-3β活性与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积的相关性。结果与S组相比,I/R组和IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著增多（P〈0.01）,p-GSK-3β水平降低（P〈0.01）;与I/R组相比,IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著减少（P〈0.01）,p-GSK-3β水平增高（P〈0.01）;p-GSK-3β与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积之间具有高度相关性（P〈0.01）。结论缺血预处理使p-GSK-3β水平增高,脑皮质神经元凋亡和梗死面积减少,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对化疗药物的增敏作用

目的观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性影响。方法人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株MGC803后,用MTT法检测细胞毒作用,流式细胞术检测细胞的凋亡;RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及蛋白的表达。结果survivin ASODN抑制MGC803增殖,呈剂量依赖性;各survivin ASODN处理组MGC803细胞凋亡率显著高于对照组（P〈0.01）;survivin ASODN处理组MGC803细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降（P〈0.01）;200nmol/Lsur-vivin ASODN和顺铂联合处理MGC803细胞株,其细胞抑制率为74.7%,显著高于单用survivin ASODN组的38.4%和单用顺铂组的33.6%（P〈0.01）。结论survivin ASODN能够抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,并能增加MGC803细胞对化疗药物的敏感性。     

促红细胞生成素预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤中的抗氧化效应

目的观察促红细胞生成素（EPO）预处理在大鼠心肌缺氧复氧（H/R）损伤中的抗氧化效应。方法 W istar成年雄性大鼠60只,分为对照组、EPO预处理组（EPO组）,每组30只。EPO组大鼠经腹腔注射5 000 U/kg重组人促红细胞生成素,对照组注射同体积生理盐水。两组各15只大鼠于给药24 h后采血,检测血清心肌酶活性,取心肌组织,检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）以及丙二醛（MDA）含量,电镜下观察心肌超微结构;每组其余15只大鼠置于常压缺氧环境中（O2的体积分数为7%）12 h后,移至常压常氧环境中2 h,予H/R损伤,取血及心肌组织,检测以上各指标。结果 H/R损伤前2组SOD、GSH以及MDA水平差异无统计学意义（P〉0.05）。H/R损伤后两组心肌SOD活力及GSH含量较损伤前显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,而MDA含量较损伤前显著升高（P〈0.05,P〈0.01）,EPO组SOD活力、GSH含量高于对照组（P〈0.01）,MDA含量显著低于对照组（P〈0.01）。H/R损伤后两组的血清心肌酶活性显著高于损伤前（P〈0.01）,而EPO组显著低于对照组（P〈0.01）。H/R导致对照组心肌超微结构显著异常,而EPO组基本正常。结论 EPO预处理在心肌H/R损伤中具有抗氧化作用,这可能是其在H/R损伤中心肌保护作用的重要机制之一。     

瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响

目的观察瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响。方法36只雄性SD大鼠随机分为对照组、损伤组和治疗组,每组12只。损伤组和治疗组分别建立大鼠左侧颈动脉球囊损伤模型,右侧颈动脉未予球囊损伤。治疗组于损伤前3d始连续每天给予瑞舒伐他汀5mg／（kg·d）灌胃,对照组和损伤组予9g／L氯化钠溶液灌胃。术后14d取左侧颈总动脉,进行HE染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素-dUTP缺口标记技术（Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin—dUTP nick end labeling,TUNEL）的凋亡检测。结果共30只大鼠成功完成本次实验。①血管损伤14d,可见明显的新生内膜;损伤组和治疗组的内膜面积、内膜／中膜面积的比值较对照组增大（P〈0．05）;与损伤组比较,治疗组内膜／中膜面积的比值减少,管腔面积增加26％（P〈0．05）。②对照组血管偶可见单个散在的凋亡细胞;损伤组凋亡细胞阳性率为（12．3±1．8）％,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗组凋亡细胞数目增多,凋亡细胞阳性率达（26．8±3．2）％,与损伤组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。凋亡细胞主要位于新生内膜。结论瑞舒伐他汀可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生,可促进大鼠颈动脉球囊损伤后的细胞凋亡。瑞舒伐他汀促进细胞凋亡的作用可能与其抑制内膜增生有关。     

Genistein调节肝癌HepG2细胞Caspase3蛋白表达诱导凋亡的作用研究

目的探讨三磷酸肌醇（IP3）和Caspase3蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Westernblotting分析细胞Caspase3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Genistein作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[（12.0±1.4）pmol/10^6cells、（7.5±0.8）pmol/10^6cells、（5.6±0.5）pmol/10^6 cells、（4.3±0.6）pmol/10^6 cellsvs（29.2±0.6）pmol/10^6 cells,P〈0.01];24h后Caspase3蛋白的RI显著高于对照组（2.7±0.2,7.4±0.5,7.4±0.5,30.7±1.6vs0.24±0.06,P〈0.05）;24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[（2.7±0.2）%、（7.4±0.5）%、（20.5±2.0）%、（30.7±1.6）%vs（2.6±0.1）%,P〈0.01]。结论Genistein能减少IP3生成,上调Caspase3蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

不同浓度腐胺对人肝细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对体外培养人正常肝细胞增殖、凋亡的影响。方法将体外培养的人正常肝细胞株LO2分为腐胺组与对照组,不同浓度腐胺组以含腐胺浓度分别为0.25、0.50、1.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00、640.00μg/mL完全培养基培养细胞,对照组以不添加腐胺完全培养基培养细胞。对照组与不同浓度腐胺组处理的LO2细胞培养12 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS）、流式细胞技术（FCM）分别测定细胞的增殖活性（用吸光度值表示）与凋亡率,并对两组数据进行相关性分析。结果 MTS结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞吸光度值均较对照组（0.474±0.022）升高,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL浓度时达到峰值（0.834±0.012）;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞吸光度值较对照组降低,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞吸光度值（0.477±0.009）与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞技术结果显示,0.25、0.50、1.00、10.00、20.00μg/mL浓度腐胺组LO2细胞凋亡率均较对照组（15.23±1.82）%降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且1.00μg/mL腐胺组细胞凋亡率达到最低值（2.30±1.00）%;80.00μg/mL及以上浓度腐胺组LO2细胞凋亡率较对照组升高,差异有统计学意义（P均〈0.01）;40.00μg/mL腐胺组LO2细胞凋亡率（16.10±1.45）%与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。相关性分析结果显示,各组浓度腐胺处理LO2细胞其细胞增殖与凋亡率呈负线性相关关系（r=-0.989,P=0.000）。结论低浓度（0.25-20.00μg/mL）腐胺对人正常肝LO2细胞增殖有促进作用,而较高浓度（80.00μg/mL及以上）的腐胺则出现明显的诱导凋亡作用,低浓度腐胺促进细胞增殖可能是通过抑制细胞凋亡而实现。     

不同缺血处理方法对大鼠压疮细胞凋亡的影响

目的研究缺血处理对大鼠缺血再灌注性压疮细胞凋亡的影响。方法应用空气压缩机制成缺血再灌注组（IR组）、缺血预处理组（IPC组）、缺血后处理组（I-PostC组）压疮模型,同时设立正常大鼠为空白组（S组）,采用Annexin V-FITC联合PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡百分率。结果 IPC组和I-PostC组的凋亡率较低,分别为（5.8±1.03）%和（5.5±1.09）%,同时,S组细胞凋亡现象罕见,凋亡率为（1.0±1.07）%,而IR组凋亡情况较严重,凋亡率为（9.5±5.60）%,差异有统计学意义（P〈0.001）;进一步两两比较发现,S组与IR组、S组与IPC组、S组与I-PostC组、IR组与I-PostC组、IR组与IPC组差异有统计学意义（P〈0.05）,IPC组与I-PostC组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论缺血再灌注能诱发大鼠细胞凋亡的发生,缺血处理可降低细胞凋亡的发生率,缺血预处理和后处理对降低压疮细胞凋亡率的效果相似。     

三七总皂苷抑制心肌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨三七总皂苷（Ponax notoginsengsaponin,PNS）对无糖无血清／缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法将心肌H9c2细胞株分为正常对照组（control）、模型组（model）和PNS不同浓度（0．05、0．25、2．25g／L）组。对照组采用含10％胎牛血清（FBS）的DMEM／F12培养基于普通二氧化碳培养箱培养,模型组采用无糖无血清培养基培养,同时进行缺氧处理诱导细胞凋亡,给药组按照模型组方法处理的同时给予不同浓度的PNS。细胞处理结束后收集细胞．Annexin V／PI染色后流式细胞仪检测不同浓度PNS干预后各组细胞的凋亡率。DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧的水平。Western blot检测Akt和磷酸化Akt（P—Akt）的表达水平。结果PNS能够抑制缺血环境诱导的心肌细胞凋亡．且呈剂量依赖性。对照组、模型组和PNS处理组细胞凋亡率分别为（8．01±1．44）％、（65．71±3．36）％（vs control P〈0．001）、（65．00±1．24）％、（52．51±1．76）％（vs model P〈0．01）、（23．99±0．76）％（vs model P〈0．001）。DCFH—DA染色结果显示,模型组细胞能够观察到明显的绿色荧光信号,而PNS组荧光信号与模型组比较明显减弱．说明PNS具有清除ROS的作用。Western blot结果显示与对照组比较,模型组p-Akt蛋白表达水平明显降低;与模型组比较,PNS组p-Akt蛋白表达水平显著升高,而P13K特异性抑制剂LY294002明显抑制PNS促进p-Akt表达的作用。结论PNS通过促进p-Akt的活性从而抑制缺血诱导的心肌细胞凋亡。     

RNA干扰下调HE4基因表达对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响

目的应用RNA干扰技术下调人附睾蛋白HE4基因表达水平,观察HE4对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力的影响。方法化学合成3对HE4特异性小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法转染人卵巢癌细胞系SK-OV-3(HE4-siRNA组),同时以非特异序列siRNA转染的SK-OV-3细胞(阴性对照组)和正常培养的SK-OV-3细胞(正常对照组)为对照,于转染后48 h,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)和Western blot方法分别检测HE4 mRNA及蛋白表达水平。采用CCK8试剂盒检测卵巢癌细胞增殖活性的变化,穿膜小室模型测定HE4对细胞侵袭能力的影响。结果与正常对照组相比,HE4-siRNA转染卵巢癌SK-OV-3细胞48 h后,HE4 mRNA的表达水平显著下降,仅为正常对照组的12.7%(P<0.01),与之相应HE4蛋白表达也显著下降,而转染非特异序列的阴性对照组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。HE4-siRNA下调卵巢癌SK-OV-3细胞HE4表达后,细胞增殖受到明显抑制,细胞增殖活性仅为正常对照组的60%,阴性对照组细胞增殖未见明显变化。体外侵袭实验显示,HE4-siRNA组穿膜细胞数为每视野(21.8±2.86)个,显著低于正常对照组(187.4±11.17)个(P<0.01)和阴性对照组(177.8±9.76)个(P<0.01),而阴性对照组和正常对照组两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HE4特异性siRNA能成功下调SK-OV-3细胞中HE4基因的表达,显著降低卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,HE4有可能成为人卵巢癌侵袭转移防治的重要靶点。     

钙调神经磷酸酶抑制剂对过氧化氢诱导的干细胞凋亡的影响简

目的比较钙调神经磷酸酶（CAN）抑制剂FK-506和环孢菌素A（CsA）保护脂肪组织来源干细胞（AT-DSCs）抗凋亡作用及可能机制。方法采用过氧化氢（H2O2）[分浓度0（对照组）、50、100、200、300、400μmo/LH2O26组]体外诱导AT-DSCs凋亡模型．凋亡模型的评价采用磷脂酰丝氨酸结合蛋白-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）／碘化丙啶（PI）双染流式细胞术和线粒体内跨膜电位测定法;观察AT-DSCs凋亡细胞形态;AT-DSCs细胞活性检测采用CCK-8试剂;细胞色素C的表达采用Westernblot分析。结果与对照组比较,引起细胞凋亡率最高的是浓度100μmol／LH20,（15．60％±8．50％±4．50％±0．88％;p〈0．01）;但CaN抑制剂FK-506（质量浓度1mg／mL）（9．8％±1．3％Vs17．0％±1．6％,P〈0．01）和CsA（质量浓度1mg／mL）（12．2％±1．2％Vs17．0％4±1．6％,P〈0．01）预处理后细胞凋亡率均明显下降,细胞存活率明显提高（P〈0．01）。Western blot结果显示．CaN抑制剂FK-506（质量浓度1mg／mL）和CsA（质量浓度1mg／mL）可完全抑制H2O2诱导的细胞色素C释放。结论CaN抑制剂能保护H2O2诱导的干细胞凋亡。可能机制是CaN抑制剂能抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,下调细胞色素C的释放。     

磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3 K／Akt）通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用。方法（1）常规培养人血管内皮细胞株EA．hy926细胞,取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为两组：正常对照组：置于气体成分体积分数5％二氧化碳培养箱中常规培养;缺氧组：置于气体成分体积分数1％氧气、5％二氧化碳和94％氮气的三气培养箱中进行缺氧培养。采用蛋白质印迹法检测正常对照组内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞中Akt活化状态（以pAkt／Akt值表示）,流式细胞仪检测细胞凋亡率。（2）另取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为4组：正常对照组,缺氧组：培养方法同前,正常对照＋阻断剂组：用含50μmol／L的LY294002（PI3 K／Akt阻断剂）的培养液常规培养内皮细胞;缺氧＋阻断剂组：用含50μmol／L 的LY294002的培养液缺氧处理内皮细胞。均于培养3 h后收集内皮细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。对Akt活化状态与细胞凋亡率行单因素方差分析和LSD-t检验。结果（1）正常对照组细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞pAkt／Akt值分别为0．67、0．79、0．34和0．35;正常内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h 的内皮细胞凋亡率分别为（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％,组间比较差异有统计学意义（F＝8．96,P＝0．030）。与正常对照组细胞比较,缺氧处理3、6 h的内皮细胞凋亡率升高,差异无统计学意义（t＝1．03、2．70,P＝0．360、0．054）;缺氧处理24 h的内皮细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（t＝4．99,P＝0．008）。（2）正常对照组、正常对照＋阻断剂组、缺氧组、缺氧＋阻断剂组培养3 h后细胞凋亡率为（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％     

干性基因在儿童急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨初诊急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿骨髓中干性基因的表达及其与临床预后指标的关系.方法 应用Real-time PCR检测32例初诊B-ALL患儿（B-ALL组）和5例骨髓象正常儿童（对照组）的骨髓单个核细胞上干性基因（Oct4、JAG1、Nanog、Sox2、Fgf4等）的表达,比较B-ALL组和对照组的差异,在此基础上结合临床资料（如性别、年龄、外周血白细胞、危险度分层等）进行相关性分析.结果 B-ALL组儿童的相关于性基因Nanog、JAG1、CD133-2、CD44和Runx1的表达水平较对照组明显增高,分别为对照组的2.74±1.00、4.31 ±2.41、10.23±3.21、4.66±1.73和7.44±3.01倍（P＜0.01）,Oct4、Sox2、D LL1、Fgf4和COX-2表达水平较对照组明显降低,分别为对照组的15.00％±0.06、13.00％±0.08、18.12％±0.11、4.73％±0.03和9.59％±0.00（P ＜0.01）;初诊B-ALL组干性基因表达与其性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、FAB分型、细胞遗传学异常、融合基因表达等均无相关性,其中JAG1基因表达与B-ALL危险度分层有明显相关性（r=0.755,P＜0.01）,其余基因表达与危险度分层无明显相关.结论 与正常儿童的骨髓相比较,初诊B-ALL患儿骨髓中干性基因存在异常表达（上调或下调）,其中JAG1基因表达与B-ALL的临床危险度分层显著相关,提示JAG1基因可能是B-ALL的危险因子,可能对判断患儿预后及指导临床治疗有潜在价值.     

下调X连锁调亡抑制蛋白基因表达增强多西他赛诱导膀胱癌细胞凋亡的作用

目的: 观察人源性膀胱癌细胞在下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达后,多西他赛对其敏感性的影响。方法: 以shRNA和shRNA-XIAP质粒分别稳定转染人源性膀胱癌T24T细胞。以荧光显微镜观察转染细胞。以RT-PCR和Western blotting法分别检测膀胱癌细胞XIAP mRNA和蛋白的表达。与T24T以及转染空载体的T24T细胞相比较,以ATPase法检测多西他赛对转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的细胞毒性。相差显微镜下观察,流式细胞术检测多西他赛预处理转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的凋亡率;以Western blotting法检测细胞内的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和caspase-3蛋白表达和裂解水平。结果: 荧光显微镜下分别观察shRNA和shRNA-XIAP转染的T24T细胞,均见稳定荧光。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,人源性膀胱癌T24T细胞在稳定转染反义XIAP基因后,其XIAP蛋白和mRNA水平均显著降低。经多西他赛处理24 h后, 转染反义XIAP基因的T24T细胞IC₅₀为(1.23±0.62)nmol/L,远低于T24T以及转染空白载体的对照组细胞 。流式细胞术检测结果显示, T24T shRNA-XIAP细胞组(2 nmol/L和5 nmol/L)凋亡率 显著高于转染空载体细胞的凋亡率 。与转染空载体的细胞相比较,T24T shRNA-XIAP细胞内的PARP和caspase-3明显降低。结论: 下调膀胱癌细胞的XIAP基因表达后,可显著增强化疗药物多西他赛所诱导的膀胱癌细胞的凋亡,并增强多西化赛的细胞毒性。     

gAd对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢关键酶表达的影响

目的通过检测3T3-L1脂肪细胞内糖酵解关键酶的表达情况,探讨课题组前期制备的脂联素球状结构域（gAd）对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢的影响。方法用课题组前期制备的gAd（质量浓度依次为10、50、100、300、1 000 ng/mL）干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,干预结束后以实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组细胞糖酵解关键酶包括己糖激酶、6-磷酸果糖激酶-1及丙酮酸激酶转录表达情况,以Western blot法检测各组细胞丙酮酸激酶翻译表达情况。结果gAd干预组（5个浓度）己糖激酶的转录表达[（2.02±0.16）、（3.47±0.29）、（4.22±0.33）、（5.83±0.45）、（6.65±0.51）倍]显著高于对照组（1.00±0.00）（F=125.789,P〈0.001）,6-磷酸果糖激酶-1和丙酮酸激酶的转录表达也显著高于对照组（F分别为85.399和113.661,P均〈0.001）,同时丙酮酸激酶的翻译表达（12.430%±0.800%、1.700%±3.010%、26.570%±1.114%、52.600%±2.910%、71.130%±10.600%）也显著高于对照组（8.000%±1.610%）（F=161.007,P〈0.01）。结论 gAd促进3T3-L1脂肪细胞摄取胞外葡萄糖的同时,激活了细胞内葡萄糖的分解供能代谢途径。     

c—Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-2表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂（SP600125）对哮喘小鼠肺组织白介素-2（IL-2）表达的影响。方法30只BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组，制作哮喘模型及干预处理后，处死小鼠，取肺组织，采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-2的表达。结果免疫组化结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．76＋0．11，显著高于对照组0．25±0．04，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．45±0．08，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。Westernblot结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为1．26±0．21，显著高于对照组0．36±0．05，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．88±0．11，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。结论c．Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-2的表达。     

脑源性神经营养因子对大鼠惊厥性脑损伤的作用及调控因素

目的观察外源性脑源性神经营养因子（BDNF）、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）在活体内对海马BDNF表达的影响及其与神经元凋亡间的关系。方法80只Wistar大鼠,选取40只作为持续惊厥状态（SC）组,制作Wistar鼠SC模型,进一步分为SC-对照亚组（脑室内不注射）、SC-NS亚组（脑室内注射生理盐水）、SC-BDNF亚组（脑室内注射BDNF）和SC-抗pCREB抗体亚组（脑室内注射抗pCREB抗体）,每组各10只大鼠。余下40只大鼠作为对照（NC）组,不制备SC模型,进一步分组和处理方法同SC组。采用ELISA检测海马BDNF含量（pg·μg^-1）,Annexin-V检测海马细胞凋亡。结果①NC-BDNF亚组,注射侧海马BDNF含量为17.24±2.23,明显高于NC-对照亚组5.91±1.63;与NC-对照亚组相比,SC-对照亚组BDNF含量增高,达13.37±5.61。与SC-NS亚组相比,SC-BDNF亚组海马BDNF含量达55.40±4.11,呈显著性增高（P〈0.01）,同时,该侧海马细胞凋亡发生率从（8.36±0.61）%降低至（4.10±1.00）%（P〈0.01）。②NC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量为5.94±0.60,与NC-对照亚组差异无统计学意义。与SC-NS亚组（15.77±2.99）相比,SC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量急剧下降,为5.53±1.11,并伴有该侧海马细胞凋亡发生率的增加,由（8.36±0.61）%增至（9.37±2.50）%。③脑室内注射将诱导注射侧海马神经细胞凋亡,而对注射对侧海马影响不大。结论①脑室内注射外源性BDNF可影响同侧海马内源性BDNF表达,并对神经元凋亡有一定抑制作用。②选择性阻断CREB的磷酸化,可能通过抑制BDNF的表达,导致神经细胞凋亡。