microRNA134对胶质瘤U87细胞增殖及侵袭的影响

目的研究微小RNA-134(miRNA-134)对人脑胶质瘤细胞系U87在侵袭、迁移方面的作用并探讨可能的作用机制。方法通过人工合成miR-134 mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞系U87,实时定量荧光聚合酶链式反应(PCR)检测细胞miR-134的表达水平;并通过四唑盐比色法(MTT)检测U87细胞增殖情况;Transwell小室法检测各组U87细胞株迁移和侵袭能力;实时定量荧光PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测各组基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达水平。统计学数据处理釆用SPSS 19.0软件处理,组间比较采用单因素方差分析,P0.05有统计学意思。结果荧光显微镜下观察转染效率90%以上,实时定量荧光PCR结果显示与未处理的空白对照组(control)及空白转染组(Mock)比较,miR-134转染组的miR-134表达水平明显上调,可达到对照组的5~6倍(P0.05);MTT实验结果表明miR-134转染组细胞增殖能力明显下降(P0.05),同时Transwell实验也显示miR-134转染组细胞的迁移能力明显降低(P0.05);实时定量荧光PCR及Western blot分析MMP-3表达情况发现,过表达miR-134可以明显减少MMP-3基因及蛋白的表达水平(P0.05)。结论本研究表明miR-134能够抑制胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭迁移能力,其机制可能与抑制MMP-3的表达有关,提示miR-134可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

反义miR-155对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察敲低微小RNA-155(miR-155)的表达对人胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响.方法 脂质体介导转染miR-155反义抑制序列(AS-miR-155)下调入胶质瘤U251细胞中miR-155的表达,同时设未转染组和无义序列转染组.实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测转染后细胞miR-155的表达,四甲基偶氨唑盐(MTT)实验检测转染后细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)检测转染后细胞周期变化和凋亡情况.结果 与未转染组和无义序列转染组相比,miR-155 反义抑制序列转染组细胞miR-155表达下降;MTT实验结果显示细胞生长受抑;流式细胞术结果可见细胞出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率增高.结论 反义miR-155可抑制U251胶质瘤细胞生长增殖,促进其凋亡.miR-155可能成为治疗胶质瘤的候选靶标.     

Nanog基因与神经胶质瘤的研究进展

神经胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,易复发,病人预后差。Nanog作为一种胚胎干细胞因子,在胶质瘤生长中可能起到重要作用,了解Nanog的转录及调控机制,对于了解神经胶质瘤的发病机制十分重要。本文就Nanog基因的结构、表达调控以及与神经胶质瘤的关系进行综述。     

吴茱萸碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡影响的研究

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,并将其分为空白对照组及25、50、100μg/mL吴茱萸碱4组。应用MTT法检测吴茱萸碱对U251细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色法检测吴茱萸碱诱导胶质瘤U251细胞凋亡;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组早期凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白的变化。结果与空白对照组同期比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱组生长抑制率在24、48、72 h均增加,差异有统计学意义。Hoechst 33258荧光染色显示吴茱萸碱作用24 h后U251细胞出现典型的细胞凋亡特征,各处理组均可见凋亡小体。与空白对照组自发早期凋亡率3.12%比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱组早期凋亡率分别为8.65%、19.47%及28.97%,差异均有统计学意义。Western blot实验显示,与空白对照组同期比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱上调了FAS、FADD、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达,Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达明显上升,差异均有统计学意义。上述指标均呈时间和剂量依赖性。结论吴茱萸碱对U251细胞具有明显的抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Fas途径和下调Bcl-2/Bax有关。     

miR-655-3p调控TRIM59对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的 探究微小RNA(miR)-655-3p调控三结构域蛋白59(TRIM59)对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响.方法 分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-655-3p水平和过表达miR-655-3p,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测U251细胞增殖情...     

胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化检测及意义

目的检测胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化表达,并探讨其Nanog基因表达的关系。方法使用无血清悬浮培养法获得胶质瘤干细胞并鉴定;采用甲基化特异性多聚酶链反应(MSP)分别检测胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞系U87中Nanog基因启动子区甲基化状态,实时定量多酶链反应(RT-PCR)检测相应细胞中Nanog表达情况。结果由U87胶质瘤细胞系成功获得胶质瘤干细胞(GSCs);MSP检测胶质瘤干细胞和U87细胞系Nanog启动子区皆呈非甲基化状态,且胶质瘤干细胞中Nanog非甲基化程度高于U87细胞系(t=6.988,P=0.000)。实时定量PCR结果显示胶质瘤干细胞中Nanog mRNA相对表达量高于U87细胞系。结论胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区呈非甲基化状态,可能与Nanog基因表达有关,且可能促进Nanog的转录并维持着胶质瘤干细胞的恶性生物学活性。     

胶质瘤中 Nanog 启动子区组蛋白修饰的检测及意义

目的检测胶质瘤组织中Nanog启动子区组蛋白修饰与Nanog的表达,并探讨其在胶质瘤发展中的作用。方法Westernblot检测胶质瘤及正常脑组织中抗组蛋白H3乙酰化（H3ac）及抗H3K9三甲基化（H3K9me3）蛋白的表达．染色质免疫共沉淀．（ChIP）Real—timePCR技术检测Nanog启动子区域组蛋白H3乙酰化及H3K9甲基化水平,Real—timePCR检测相应组织中NanogmRNA表达情况。结果Westernblot结果显示：胶质瘤组织中H3ac的表达量较正常脑组织显著增高（F=72．80,P=0．00）,H3K9me3的表达量较正常脑组织显著下调（F=84．79,P=0．00）。ChIP—Real—timePCR检测显示：胶质瘤中Nanog启动子区组蛋白H3乙酰化水平高于正常脑组织（F=59．34,P=0．00）,H3K9甲基化程度低于正常脑组织（F=74．88,P=0．00）。Real—timePCR结果显示：高级别胶质瘤中NanogmRNA相对表达量高于低级别胶质瘤（t=11．41,P=0．00）。结论Nanog启动子区的组蛋白修饰可调节其蛋白的表达,并且是影响脑胶质瘤的发生和发展的重要机制之一。     

胶质瘤中PKCα表达及与细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨人脑胶质瘤中 PKCα的表达情况,以及与细胞增殖和凋亡的关系.方法 37例人脑胶质瘤标本,星形细胞瘤25例和胶质母细胞瘤12例,正常脑组织10例作为对照.PKCα和Ki-67的检测用免疫组化,细胞凋亡用TUNEL.用Ki-67 LI和AI对增殖和凋亡进行评估.结果 PKCα在胶质瘤及正常组织中均有表达,前者为67.6%,后者为30.0%,二者有显著性差异,星形细胞瘤阳性率为60%,胶质母细胞瘤为83.3%,不同肿瘤分型中PKCα表达有差异,PKCα表达与细胞增殖和生长显著相关,与凋亡无明显相关.结论人脑胶质瘤中PKCα过度表达,与肿瘤发生和生长关系密切.     

miR-106a抑制胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡

目的胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,具有较高的病死率。现有的研究表明miR-106a在多种肿瘤中表达上调,并发挥着致癌性作用,但miR-106a在胶质瘤中的表达和作用却并不清楚。方法不同级别胶质瘤组织和胶质瘤细胞系(T98G,SHG44,U87,U251,U373)内的miR-106a水平通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定。转染miRNA寡聚核苷酸后的U87和U251细胞的增殖能力和细胞周期分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪测定,并且通过膜联蛋白/碘化丙啶(annexin V/PI)双染法测定了miR-106a对胶质瘤细胞的凋亡影响。结果miR-106a在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系内表达水平相对正常脑组织显著下降,并且miR-106a表达水平与胶质瘤病理级别负相关。胶质瘤细胞转染miR-106a后,可检测到过表达的miR-106a可显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力,阻滞细胞周期于G0/G1期,同时诱导胶质瘤细胞凋亡增加。结论 miR-106a可阻滞胶质瘤细胞细胞周期、抑制增殖和诱导凋亡。     

亚甲蓝对胶质瘤干细胞增殖作用的影响

目的研究亚甲蓝(MB)对胶质瘤干细胞增殖作用的影响。方法从新鲜人脑胶质母细胞瘤标本中分离脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清改良Eagle培养基/F-12(DMEM/F-12)培养基中培养至细胞形成干细胞球,用免疫荧光法对其进行检测和鉴定。随机将细胞分为四组:正常对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组。采用生长曲线法,软琼脂克隆形成法检测亚甲蓝对胶质瘤干细胞增殖作用的影响,流式细胞仪检测亚甲蓝作用后的胶质瘤干细胞的凋亡情况。结果生长曲线、集落形成能力结果和凋亡检测结果均显示,与对照组及低剂量组相比,亚甲蓝中、高剂量组细胞的增殖能力明显下降,且亚甲蓝的最低有效浓度为1μM,最佳有效浓度为10μM。结论亚甲蓝可以降低胶质瘤干细胞的增殖能力。     

过表达MiR-494抑制脑胶质瘤细胞U87的增殖

目的观察微小RNA-494(miR-494)对脑胶质瘤细胞U87增殖能力的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测5例瘤旁组织和14例胶质瘤样本中miR-494的表达水平,并且检测其在6种胶质瘤细胞系中的表达;将100 nmol/L miR-494 mimics瞬时转染至脑胶质瘤U87细胞,qRT-PCR检测miR-494表达情况;采用四唑盐比色法(MTT)检测U87细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测对U87细胞周期的影响。结果与瘤旁脑组织相比,miR-494在胶质瘤中呈现低表达;U87细胞转染48 h后,miR-494 mimics组miR-494表达为对照组的357倍(P0.05);与对照组相比,miR-494 mimics转染后抑制了U87细胞的增殖能力(P0.05);S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增多。结论 miR-494在胶质瘤中低表达,过表达miR-494 mimics有效抑制了U87细胞的增殖,调节细胞周期S期降低G1期增多,提示miR-494有望成为胶质瘤治疗的分子靶点。     

MiR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的作用

目的观察miR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,进一步探讨miR-181c的生物学功能。方法化学合成miR-181c,脂质体转染U251细胞。应用cck-8法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡。结果miR-181c上调后对U251细胞具有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,而对照组无明显抑制作用。结论化学合成的miR-181c在人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

胶质瘤细胞c-fos基因表达水平对其增殖和凋亡的影响

目的原癌基因c-fos属快反应即刻早期应答基因，其编码蛋白是真核细胞内重要的转录因子．可诱导下游报道基因mRNA的转录和蛋白表达，参与细胞增殖和凋亡的调控，当其表达异常增加时可干扰细胞增殖和凋亡的动态平衡，诱导细胞转化和肿瘤形成。通过检测胶质瘤c-fos基因的表达水平观察c-fos基因与肿瘤恶性程度的关系以及对胶质瘤细胞增殖活性和凋亡程度的影响。方法用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组织化学染色方法观察73例不同级别人胶质瘤组织标本。结果73例胶质瘤均不同程度地表达c-fosmRNA和c-Fos蛋白（100％），这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度的升高而相应增加，Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。73例胶质瘤标本的增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞的检出率均为100％．增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应增加，Ⅰ～Ⅱ级组低于Ⅲ级组，Ⅲ级组低于Ⅳ级组，3组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤恶性程度的升高而相应减低，Ⅰ～Ⅱ级组高于Ⅲ级组，Ⅲ级组高于Ⅳ级组，3组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。直线相关分析证实，c-fos mRNA阳性肿瘤细胞密度、c-Fos蛋白阳性肿瘤细胞密度及增殖细胞核抗原阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关（r=0．648～0．917，P〈0．001），这3种阳性肿瘤细胞的密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关（r-=-0．727--0．775，P〈0．001）。结论c-fos基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞c-fos基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素．并在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。     

RNA干扰XBP1基因表达对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 设计并合成干扰XBP1表达的小干扰RNA(siXBP1),转染人脑胶质瘤U251细胞,MTT 法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果 siXBP1可有效抑制U251细胞增殖,促进细胞凋亡,Western blot显示,siXBP1上调了U251细胞中促凋亡信号分子Bax及Caspase-3的表达,抑制了U251细胞中抗凋亡信号分子Bcl-2的表达。结论 下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达有望为脑胶质瘤的治疗提供理想的分子靶点。     

胶质瘤c-myc基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的探讨胶质瘤细胞c-myc基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性以及凋亡程度的关系。方法选择67例脑胶质瘤患者,其中Ⅰ～Ⅱ级者24例,Ⅲ级22例,Ⅳ级21例。应用原位杂交、原位细胞凋亡检测(TUNEL法)和免疫组织化学染色方法对其标本进行观察。结果67例患者中57例(85.1%)表达c-mycmRNA,56例(83.6%)表达c-Myc蛋白,两者表达水平呈正相关(rs=0.999,P<0.01),并均显示表达水平Ⅰ～Ⅱ级<Ⅲ级<Ⅳ级者(P<0.05或P<0.01);肿瘤细胞增殖活性和凋亡程度之间呈负相关(r=?0.775,P<0.01)。肿瘤细胞增殖活性随着肿瘤细胞c-Myc蛋白表达水平的升高而相应增强,而肿瘤细胞的凋亡则相应减少,c-Myc蛋白表达强阳性组与阳性组间,以及此两组与弱阳性组及阴性组之间比较,肿瘤细胞增殖活性和凋亡程度的差异均有显著性意义(均P<0.01)。结论c-myc基因表达水平对评价脑胶质瘤生物学行为具有临床参考价值。胶质瘤细胞c-myc基因表达异常增加可能会促进其细胞增殖和抑制其凋亡,并在胶质瘤的发生及恶性进展过程中起重要作用。     

羟基脲对体外培养的脑膜瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察羟基脲对体外培养的脑膜瘤细胞增殖的影响及其对细胞凋亡的诱导作用.方法采用细胞计数法测定脑膜瘤细胞的增殖情况,运用光镜、电镜、DNA电泳及流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.结果羟基脲能明显抑制脑膜瘤细胞的增殖,电镜、DNA电泳及流式细胞仪检测有明显的凋亡改变.结论羟基脲可能通过诱导细胞产生凋亡来抑制脑膜瘤细胞的增殖.     

神经上皮肿瘤中端粒酶活性和细胞增殖凋亡的研究

目的探讨神经上皮肿瘤的端粒酶活性及与肿瘤细胞增殖凋亡的关系。方法对35例神经上皮肿瘤组织和8例正常者脑组织采用改良TRAP法检测端粒酶活性，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数，免疫组化法检测嗜银蛋白（AgNOR）指数。结果神经上皮肿瘤端粒酶阳性率为23／35，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级肿瘤的端粒酶活性分别为37．1TPG、75．2TPG、165．1TPG和243．2TPG；端粒酶活性、AgNOR指数和肿瘤恶性度呈正相关，凋亡指数和肿瘤恶性度成负相关；端粒酶活性和AgNOR指数成正相关，和凋亡指数成负相关。结论在神经上皮肿瘤中端粒酶活性不仅和肿瘤恶性度密切相关，还和肿瘤细胞的凋亡增殖密切相关。     

胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法和逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果 Nanog蛋白在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性细胞率分别为18.3%±9.6%、37.9%±19.0%、53.4%±19.8%,差异有统计学意义（F=14.918,P=0.000）;NanogmRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级中分别为0.1824±0.0310、0.3730±0.0961、0.4594±0.0453,差异有统计学意义（F=65.901,P=0.000）,Nanog蛋白和mRNA表达强度随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均未见表达。结论 Nanog在胶质瘤组织中高表达,其表达强度与病理级别密切相关,为进一步研究其与肿瘤干细胞关系及其在胶质瘤的生物学行为中所发挥的作用奠定基础。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响

目的观察诱导分化剂苯乙酸（PA）对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养胶质瘤C6细胞，用0、2．5、5．0和7．5mmol／L不同浓度的PA，分别在PA诱导24、48、72、96h后。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率，进一步用免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果PA显著抑制c6细胞增殖，随药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞增殖抑制率增加。PA作用后GFAP表达增强。随PA浓度和作用时间的增加，细胞凋亡率增加。结论PA对胶质瘤C6细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用，呈时间剂量依赖性。