p38MAPK通路调控树突状细胞表达PD-L1的实验研究

目的探讨脂多糖刺激单核细胞源树突状细胞表达程序性死亡因子配体1(PD-L1)与p38MAPK信号通路的关系。方法体外培养树突状细胞,用p38抑制剂SB203580阻断p38MAPK通路后再用LPS刺激树突状细胞。光学显微镜观察各组细胞的形态变化;流式细胞术测定CD86和PD-L1表达的平均荧光强度;Western blot测定PD-L1蛋白表达。结果光镜下观察LPS刺激组细胞先经历梭型贴壁后逐渐恢复圆形,树突较多;SB203580和LPS共同刺激组细胞树突退化,未刺激组细胞成团悬浮,树突较多。SB203580和LPS共同刺激组细胞CD86、PD-L1较LPS刺激组的明显降低(P<0.05或P<0.01),与未刺激组的相比CD86差异无统计学意义,但PD-L1降低(P<0.05)。SB203580和LPS共同刺激组细胞PD-L1的蛋白表达量较其它两组的均明显减少(P<0.01或P<0.01)。结论 LPS通过p38MAPK信号通路调控树突状细胞表达PD-L1。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过激活ERKs和NF-κB上调大鼠系膜细胞表达TNF-α

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因转染大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERKs)、核因子κB(NF-κB)、P38 MAPK信号传导机制.方法 将含有HBV X基因的质粒pCI-neo-X导入体外培养的大鼠系膜细胞,分别采用特异性抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,Lactacystin阻断NF-κB通路和SB203580阻断P38 MAPK通路,观察培养细胞TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照.RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,ELISA检测培养上清液中TNF-α表达.Western blot检测乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)表达.结果 转染pCI-neo-X后,系膜细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均增高,通过阻断ERK1/2或NF-κB通路,细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达均下降.而阻断P38 MAPK通路对系膜细胞TNF-α mRNA及上清液TNF-α表达无明显影响.结论 HBx蛋白通过激活ERKs和NF-κB信号通路使系膜细胞高表达TNF-α,而与P38 MAPK通路无关.     

阻断p38丝裂原激活蛋白激酶通路抑制脾脏树突状细胞介导的OT-Ⅱ细胞增殖

目的探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对脾脏树突状细胞(DC)介导的CD4+-鸡卵清蛋白转基因小鼠T(OT-Ⅱ)细胞增殖的影响。方法应用CD11c+免疫磁珠从C57BL/6小鼠脾脏中分选DC。应用CD4+分离试剂盒从OT-Ⅱ转基因小鼠脾脏中分选出OT-Ⅱ细胞。p38MAPK抑制剂SB203580处理DC后,脂多糖(LPS)刺激。流式细胞术检测DC表面共刺激分子(CD80、CD86)、MHCⅡ分子的表达,及DC提呈组织相容性复合体Ⅱ类分子Eα链第52~68位抗原肽(Eα52-68)的能力。ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1α(IL-1α)、IL-6、转化生长因子β(TGF-β)的水平。DC经OVA323-339多肽处理后,与OT-Ⅱ细胞共培养,采用流式细胞术检测OT-Ⅱ细胞增殖。结果分选后获得较高纯度的DC和OT-Ⅱ细胞(90%)。SB203580降低DC表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达,抑制其抗原提呈功能,同时TNF-α、IL-1α、IL-6表达下调,TGF-β表达上调,并且抑制DC介导的OT-Ⅱ细胞增殖。结论 SB203580阻断p38MAPK通路,可能通过调节DC表面CD80、CD86、MHCⅡ的表达及其抗原提呈功能和细胞因子的合成,从而抑制DC介导的OT-Ⅱ细胞增殖。     

人乳腺癌中p-P38信号分子与nPA表达增强

目的 研究磷酸化p38（p-p38）信号分子和uPA在乳腺癌组织及细胞中表达及意义。方法 免疫组化检测60例乳腺癌组织及其邻近正常乳腺组织中p-p38和uPA蛋白,Western blot检测人乳腺癌细胞中p-p38及uPA蛋白表达及用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路后uPA蛋白水平的变化。结果 免疫组化显示,p-p38,uPA蛋白在乳腺癌组织中表达阳性率分别为56.7%和60.0%。,显著高于正常乳腺组织中的表达（P<0.05）,并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移相关（P<0.05）,而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性,且两者表达存在正相关（r=0.316, P<0.05）。乳腺癌高转移性的MDA-MB-231细胞株p-p38及uPA蛋白表达水平高于低转移的MCF-7细胞株。 用SB203580阻断p38MAPK通路可降低uPA蛋白表达。结论 p-p38和uPA表达在乳腺癌恶性进展中起重要作用,可为乳腺癌转移机制研究提供有效线索。     

p38MAPK参与高糖刺激大鼠肾小管上皮细胞产生细胞外基质胶原Ⅲ

目的：探讨p38MAPK信号通路在高糖刺激大鼠肾小管上皮细胞产生细胞外基质胶原Ⅲ中的作用。 方法： 采用体外培养和Western blotting等方法，以不同浓度D-葡萄糖、p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580以及用不同时间刺激正常大鼠肾小管上皮细胞NRK52E，分别检NRK52E细胞p38MAPK磷酸化水平和细胞外基质胶原Ⅲ的表达。 结果： 随D-葡萄糖浓度增加，p38MAPK磷酸化水平、胶原Ⅲ的产生也增加，SB203580可有效阻断高糖引起p38MAPK磷酸化水平的升高和细胞外基质胶原Ⅲ的表达的增高。 结论： 高糖引起p38MAPK磷酸化水平的升高可能在糖尿病肾病的肾间质纤维化中发挥重要作用。SB203580有潜在的糖尿病肾病防治的临床应用价值。     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对严重烧伤大鼠离体库普弗细胞促炎性细胞因子分泌的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对严重烧伤大鼠离体库普弗细胞促炎性细胞因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α和白细胞介素（interleukin，IL）-1β分泌的影响。方法健康成年的SD大鼠10只分为假烫组和烧伤组，假烫或烧伤24h后处死分离出库普弗细胞。37℃5％CO2条件下培养60min后加入SB203580，18h后用25ng/孔的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激。酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）测定库普弗细胞上清液TNF-α和IL-1β的含量。结果烧伤大鼠的离体库普弗细胞在LPS刺激后分泌的TNF-α和IL-1β量较假烫组增高显著[（2．847±0．398）ng／ml vs（1．232±0．101）ng／ml，P〈0．01；（742．1914±103．7009）pg／ml vs （320.5462±26.3022）pg／ml，P〈0.01）]。体外使用SB203580既可以抑制烧伤大鼠的离体库普弗细胞分泌TNF-α和IL-1β[（0.1021±0.018）ng／ml vs（2．847±0.398）ng／ml，P〈0．01；（26 .7167±4.9213）pg／ml vs （742.1914±103.7009）pg／ml，P〈0.01）]，也可以抑制正常大鼠的离体库普弗细胞分泌TNF-α和IL-1β[（0.113±0．032）ng／ml vs （1．232±0.101）ng／ml，P〈0．01；（30.2427±8.9803）pg／ml vs（320.5462±26．3022）pg／ml，P〈0.01）]。结论p38MAPK信号转导通路介导了严重烧伤后库普弗细胞TNF-α和IL-1β的产生，在烧伤后全身炎症反应的发生中发挥着重要的调控作用。     

辛伐他汀通过抑制p38 MAPK活化降低肝硬化门静脉高压大鼠门静脉压力

 目的:探讨p38 MAPK信号通路在辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力（PP）中的作用。方法:采用四氯化碳复合因素法构建大鼠肝硬化门静脉高压症模型,成模后将存活大鼠随机分为模型组（n=10）、辛伐他汀治疗组（n=11）和p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580处理组（n=10）,后2组分别给予辛伐他汀及SB203580干预处理;另设正常对照组（n=8）。处理结束后检测大鼠PP、肝脏总p38 MAPK蛋白、磷酸化p38 MAPK蛋白、总eNOS蛋白、磷酸化eNOS蛋白表达水平以及肝脏一氧化氮（NO）含量的变化。结果:（1）模型组大鼠PP明显高于正常对照组;辛伐他汀治疗组及SB203580处理组PP均明显低于模型组（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组PP明显低于SB203580处理组（P＜0.01）。（2）与正常大鼠相比,模型组大鼠肝脏总p38 MAPK蛋白及总eNOS蛋白表达水平无明显变化（P＞0.05）,而磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别增高与降低（P＜0.01）;辛伐他汀治疗组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）;SB203580处理组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）,但磷酸化eNOS蛋白表达水平增高的程度低于辛伐他汀治疗组（P＜0.01）。(3)辛伐他汀治疗组肝脏NO含量［（15.73±1.59） μmol/(g protein)］及SB203580处理组肝脏NO含量［（13.98±1.27) μmol/(g protein)］明显高于模型组［（9.81±1.12） μmol/（g protein）］（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组NO含量明显高于SB203580处理组（P＜0.01）。结论: 辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力可能与其抑制p38 MAPK信号通路的活化有关。     

p38MAPK在非对称性二甲基精氨酸所致内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的：探讨非对称性二甲基精氨酸（asymmetricdimethylargine,ADMA）对人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs）的细胞骨架改变的影响及p38丝裂原激活蛋白激酶（p38mitogen—activatedproteinkinase,p38MAPK）在该过程中的作用。方法：体外进行HUVEC培养,实验分为正常对照组、sB203580组、ADMA组（量效关系组、时效关系组）及sB203580＋ADMA组（SB203580＋ADMA量效关系组及SB203580＋ADMA时效关系组）。对各组细胞进行免疫荧光染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察肌动蛋白（F-actin）形态变化,图像分析软件行F-actin荧光灰度值分析,流式细胞仪行F．actin荧光定量分析。结果：ADMA可诱导HUVECs应力纤维形成,导致F．actin荧光灰度值、荧光定量增加;而SB203580可抑制ADMA的作用。结论：ADMA可呈时间及浓度依赖性地导致细胞骨架改变。p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制ADMA对内皮细胞骨架的改变,提示p38MAPK参与了ADMA所导致的HUVECs内皮细胞的骨架改变。     

探讨BV2细胞活化中是否存在p38MAPK及JAK2-STAT通路的磷酸化激活

目的:探索CD200R在LPS诱导的小胶质细胞炎症模型中的作用以及是否有pho-p38MAPK及pho JAK2-STAT通路的激活。方法:采用小胶质细胞进行研究,将细胞用CD200R抗体及LPS处理,ELISA检测TNF-α及IL-1β的分泌。Western blot检验p38MAPK、JAK2、pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT表达。为证实这两条通路是炎症的下游通路,分别应用两者的阻断剂处理细胞后再次检测炎症因子的分泌。结果:在小胶质细胞表面有CD200R的表达;应用CD200R的阻断性抗体后,TNF-α及IL-1β分泌均增多,较对照组及LPS组比较差异具有统计学意义(P0.05),并且有pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT的激活;阻断剂SB203580及AG490均能抑制TNF-α及IL-1β的分泌。结论:pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT两条通路是LPS及CD200R抗体诱导的小胶质细胞炎症反应的下游通路。     

p38MAPK信号传导通路在人绒毛滋养层细胞EMMPRIN表达和体外侵袭中的作用

目的 研究人绒毛滋养层细胞中调节细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）表达的信号通路及p38MAPK信号通路在滋养细胞体外侵袭中的作用.方法 体外无血清培养人绒毛滋养细胞,分别加入p38MAPK抑制剂（SB203580）,JNK抑制剂（SP600125）,ERK抑制剂（PD098059）,用RT-PCR及Western blot方法观察阻断剂对EMMPRIN表达的影响.用不同浓度的佛波酯（PMA）作用于滋养细胞,ELISA方法检测滋养细胞中p38MAPK的活性变化,用transwell细胞侵入系统检测滋养细胞的侵袭作用;加入不同浓度的SB203580,观察阻断剂对滋养细胞侵袭性的影响.结果 JNK抑制剂、ERK抑制剂对滋养细胞分泌EMMPRIN无影响,p38MAPK抑制剂以时间剂量依赖的方式抑制滋养细胞表达EMMPRIN,SB203580浓度为5、10、15及20μmol/L作用24h后,EMMPIRN的抑制率分别为7.3%、24.6%、31.8%及39%;加入10μmol/L的SB203580培养24h后即可抑制EMMPRIN基因和蛋白的表达,抑制率为22%,培养48h和72h抑制率分别为45%和76%.向培养的细胞中加入浓度为0.1、1、10mmol/L的PMA作用30min,PMA以时间剂量依赖的方式激活p38MAPK,而SB203580以时间剂量依赖的方式抑制PMA对p38MAPK的激活.PMA可以促进滋养细胞体外侵袭作用,5mmol/L的SB203580能明显的抑制滋养细胞的体外侵袭能力,也能抑制PMA对滋养细胞侵袭活性的激活.结论 p38MAPK信号传导途径参与了人绒毛滋养细胞中EMMPRIN的表达.p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为中有重要的作用,p38MAPK激动剂可能会为子痫前期-子痫的防治提供新的途径.     

p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡

背景：在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果。 目的：在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制。 方法：将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入  20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。应用细胞应力加载装置Flecell Strain Unit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24 h的周期性张应力。每分钟10个循环,每循环包括3 s牵张,3 s松弛。Hoechst 33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因bax mRNA的表达;Western blot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达。 结果与结论：随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加(P < 0.05),bax mRNA表达增多(P < 0.05);细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6 h达到最低,此后逐渐升高。p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少bax mRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达(P < 0.05)。说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用。     

MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达

目的 观察MAPK和NF-κB在经脂多糖（LPS）诱导的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）Toll-1ike受体4（TLR4）表达增强中的作用。方法 分离培养PMVECs。不同浓度的LPS与PMVECs共培养2h，或与LPS（100μg/L）作用不同时间。用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量。分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR4和TNF-α mRNA。用Western-blot检测ERK／P38MAPK和核蛋白NF-κB的表达。结果 在LPS浓度为50～500μg／L时，作用于PMVECs 2h，或LPS100μg/L作用不同时间时，培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加（P〈0．01）。PMVECs表达TNF-α及TLR4mRNA增加，6h时达高峰。分别用上述抑制剂均可缓解上述变化，而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用。上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK／P38MAPK和NF-κB蛋白增强。结论 MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达。     

重楼皂苷Ⅵ诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡机制研究

目的探究重楼皂苷Ⅵ对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法采用CCK8实验考察重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞活力的影响,并确定给药剂量。流式细胞术检测重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与p38 MAPK通路相关蛋白的变化,通过p38抑制剂SB203580验证THP-1细胞中上述通路与凋亡的关系。结果一定剂量的重楼皂苷Ⅵ能抑制THP-1细胞增殖且抑制效应呈浓度依赖与时间依赖性。流式细胞术显示,与对照组比较,给药组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达下降,p-p38/p38比值增加(P<0.05),上述作用可被p38 MAPK抑制剂SB203580阻断。CCK8实验结果显示,抑制p38通路可降低药物导致的细胞增殖抑制。结论重楼皂苷Ⅵ可抑制急性髓系白血病THP-1细胞增殖并通过p38 MAPK通路诱导细胞凋亡。     

p38 MAPK- Pim-3通路可能介导预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的： 研究MAPK通路在原癌基因Pim-3抗心肌急性缺氧复氧损伤中的作用。方法：采用原代培养新生大鼠的心肌细胞,随机分为4组：正常对照组（control）、缺氧复氧组(A/R)、缺氧预适应组(APC+A/R)、阻断剂组。在缺氧预处理前分别用终浓度为10 μmol/L SB203850(p38 MAPK阻断剂)、U0126（ERK1/2阻断剂）、SP600125（SAPK/JNK阻断剂）与细胞孵育30 min。实验结束后测定MAPKs通路中ERK1/2、JNK、p38 MAPK 磷酸化蛋白表达水平及Pim-3蛋白的表达水平,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、四唑盐（MTT）比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果： SB203850、U0126、SP600125能分别取消由APC或A/R所诱导ERK1/2、JNK、p38 MAPK的磷酸化水平的升高;由APC所诱导的Pim-3表达的升高在p38 MAPK通路被阻断后明显下调(P<0.01),并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率则下降,心肌细胞的凋亡指数升高。结论： p38 MAPK的激活可上调原癌基因Pim-3的表达,从而可能对心肌细胞起到保护作用。     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景：当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏。 目的：研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程。 方法：取4~7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组。加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5 s拉伸,5 s松弛。SB203580组细胞在加力前1 h加入终浓度为20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。分别在加力6,12,24 h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及bax mRNA表达增加 (P < 0.05),且随着加力时间的延长而增强,12 h达高峰,之后逐渐下降。与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少 (P < 0.05),bax mRNA表达降低。说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程。     

p38 MAPK介导E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管内皮细胞凋亡

目的: 研究E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)在依托泊苷(VP-16) 诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 凋亡中的作用及其调控机制。方法: 将体外培养的原代HUVECs用pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体分别转染,通过G418 (800 mg/L) 和嘌呤霉素 (2.5 mg/L) 筛选分别获得CREG过表达组HUVECs (H-C) 和CREG低表达组HUVECs (H-S)。在H-C、HUVECs (H) 和H-S 3种细胞模型中加入凋亡诱导剂VP-16 (100 μmol/L,6 h),用TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;用Western blotting检测细胞中磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK) 的蛋白表达量;应用p38特异性抑制剂SB203580 (20 μmol/L) 预处理H-S细胞后,检测VP-16刺激诱导的细胞凋亡情况。结果: HUVECs经pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体转染获得稳定的细胞克隆。经 Western blotting证实,与HUVECs对照比较,H-C组细胞CREG表达明显增加至160%,而H-S组细胞中的CREG表达下降约70%。加入凋亡诱导剂VP-16 (100 μmol/L, 6 h) 后,TUNEL和流式双荧光染色检测结果均提示H-S中的细胞凋亡率明显升高,而H-C组细胞凋亡率较HUVECs对照组明显降低,两者具有显著差异。进一步应用Western blotting分析显示经VP-16刺激后,H-S细胞中p-p38蛋白表达较HUVECs和H-C组细胞显著增加;在H-S中添加SB203580 (20 μmol/L) 后,VP-16诱导的细胞凋亡现象被显著抑制。结论: CREG 过表达可能通过抑制p38 MAPK的激活阻遏VP-16诱导的HUVECs凋亡。     

p38 MAPK信号途径参与大鼠系膜细胞MMP2表达

目的探讨系膜细胞中调节MMP2表达的信号通路。方法鼠系膜细胞培养,分别加入酪氨酸激酶抑制剂（Herbimycin A）,p38MAPK抑制剂（SB203580）,MEK抑制剂（U0126）,ERK抑制剂（PD098059）,P13K抑制剂（Y294002）,用酶谱法分析MMP2酶活性、用RT-PCR及Westem方法从基因及蛋白水平,观察阻断剂对MMP2表达的影响。结果酪氨酸激酶抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂及P13K抑制剂对MMP2酶活性、mRNA及蛋白水平无影响,在72hp38MAPK抑制剂SB203580抑制MMP2活性25％。在48h当SB203580浓度分别为10、20、30及40μmol／L时,系膜细胞中MMP2的抑制率分别为7．2％、13．5％、21．3％及28％。结论大鼠系膜细胞中p38MAPK信号传导途径参与了MMP2的表达,并且p38MAPK抑制剂SB203580对MMP2的抑制有剂量依赖性。     

白细胞介素17通过激活p38MAPK信号通路调控人牙周膜成纤维细胞RANKL和OPG的表达

目的使用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂确定白细胞介素17(IL-17)是否通过该通路参与调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和护骨因子(OPG)的表达。方法组织块法分离培养HPDLF, 20 ng/mL IL-17分别刺激0、 20、 40、 60、 80 min,Western blot法检测HPDLF磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。HPDLF随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、 p38MAPK抑制剂SB203580组、 IL-17组、 IL-17联合DMSO组、 IL-17联合SB203580组。IL-17及联合处理组,分别添加10μmol/L SB203580、 20 ng/mL IL-17。实时定量PCR检测HPDLF的RANKL、 OPG mRNA水平, Western blot法检测RANKL蛋白水平、 ELISA检测OPG蛋白含量。结果 p-p38MAPK蛋白水平在IL-17刺激后的0～60 min内随时间增加,在60 min时达到最高,在80 min时下降。IL-17可上调HPDLF中RANKL mRNA及蛋白表达,下调OPG mRNA和蛋白表达。较单纯使用IL-17刺激,添加SB203580通路抑制剂后, RANKL mRNA和蛋白水平均降低, OPG的mRNA水平升高。结论 IL-17通过激活p38MAPK信号通路,上调HPDLF的RANKL表达,抑制OPG mRNA表达。     

肺炎克雷伯菌黏附素FimH蛋白通过TLR4/NF-κB途径诱导巨噬细胞分泌炎症因子

目的初步探讨肺炎克雷伯菌黏附素FimH蛋白诱导巨噬细胞分泌炎症因子及其作用机制,为阐明肺炎克雷伯菌的致病机制提供实验证据。方法使用肺炎克雷伯菌FimH蛋白刺激巨噬细胞,然后用ELISA法检测IL-1β、TNF-α和IL-6的含量,用Western blot检测iκB-α的表达量。分别用TAK-242、PDTC、SB203580和SP600125预处理巨噬细胞,抑制TLR4、NF-κB、p38和c-Jun活性,再使用ELISA法检测FimH蛋白刺激后IL-1β、TNF-α和IL-6的表达。结果使用FimH蛋白刺激人源性巨噬细胞,IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌量明显高于对照。FimH蛋白刺激会够降低细胞中iκB-α的含量。当使用TAK-242抑制TLR4的活性后,FimH蛋白诱导的IL-1β、TNF-α和IL-6表达量下降。使用PDTC和SB203580分别抑制NF-κB和p38的活性,也发现FimH蛋白诱导炎症因子能力下降。但是抑制c-Jun的活性不影响FimH蛋白诱导IL-1β、TNF-α和IL-6的表达。结论肺炎克雷伯菌FimH蛋白能够通过TLR4/NF-κB途径诱导巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6。     

SB203580对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的:探讨SB203580对大鼠隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为隐睾组、隐睾 SB203580(p38MAPK抑制剂)组、隐睾 溶媒组、假手术组。复制单侧隐睾模型,术后分别腹腔内注射溶媒或SB203580。7 d后快速断颈椎处死,TUNEL原位末端标记法结合流式细胞术(FCM)检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡,免疫组化观察各组右侧睾丸磷酸化p38MAPK蛋白表达的变化。结果:FCM及TUNEL法均显示隐睾 SB203580组生精细胞凋亡指数低于隐睾组和隐睾 溶媒组,同时磷酸化p38MAPK蛋白表达减少。结论:SB203580能降低p-p38MAPK蛋白表达并抑制热压诱导的生精细胞凋亡。