调宁蛋白的研究进展

碱性调宁蛋白是调宁蛋白家族中的成员 ,在成熟的非增殖性的平滑肌细胞中特异性表达 ,是一种新型的病理诊断标记。它除了能调节平滑肌收缩 ,还参与了细胞骨架活动和细胞信号转导 ,具有多种生物学功能 ,其表达改变与许多疾病的发生发展密切相关     

HLA-A*0203-BSP的表达和复性及其四聚体的鉴定

目的：优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽（BSP）与HLA-A＊0203重链胞外域的融合蛋白（HLA—A＊0203、BSP），并制备负载HLA-A＊0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3 596-604的四聚体（HIA—A}0203／SVR）。方法：以HLA—A＊0203-BSP原核表达载体转化E．coli BL21（DE3）菌株，优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A＊0203／SVR单体，然后以BirA对其进行生物素化，并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A＊0203／SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4：1的比例混合形成四聚体，通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果：当IPTG的浓度为0．4mmol／L，于37℃诱导过夜后，融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量（Mr）为34003，与HLA—A＊0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分，约占菌体总蛋白的30％。负载抗原肽的可溶性HLA-A＊0203／SVR单体是在同时存在HLA-A＊0203，BSP、β2微球蛋白及HLA-A＊0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4：1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术（FCM）分析证实，该四聚体具有与HLA—A2^＋供者特异性CTL结合的活性。结论：HLA—A＊0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A＊0203／SVR四聚体具有与HLA-A2^＋供者特异性CTL结合的活性，为研究HLA—A＊0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。     

调宁蛋白突变体T184A的构建、表达、纯化和鉴定

调宁蛋白突变体Ｔ１８４Ａ的构建、表达、纯化和鉴定卫生部呼吸系疾病重点实验室同济医科大学病理生理教研室（武汉４３００３０）曹圣唐大椿骆建云柯丹调宁蛋白（ｃａｌｐｏｎｉｎ）为平滑肌特有的重要的调控蛋白，它能与肌动蛋白结合，抑制肌球蛋白ＡＴＰ酶活性和平滑肌...     

稀土离子诱导钙调蛋白构象变化的单克隆抗体制备

钙调蛋白是广泛存在于生物体内的一种多功能的调节蛋白，它通过结合钙离子后自身的构象变化参与许多细胞代谢调控过程。已有文献报道，三价的稀土离子可以拮抗钙调蛋白的调节作用，原因可能是稀土离子和钙调蛋白结合后改变了它的构象变化。为了研究金属离子对钙调蛋白三级结构变化的影响，我们采用免疫化学的方法，制备稀土离子诱导钙调蛋白构象变化后的单克隆抗体，来研究金属离子诱导钙调蛋白构象变化后与抗体的分子识别能力差异。牛脑钙调蛋白经超滤脱钙后，用２４－二硝基氟苯修饰，以增强其免疫原性，再与三价的铕离子饱和，以此作为抗…     

缺血性心脑血管病用脉络宁治疗前后血液流变性的对比

缺血性心脑血管病用脉络宁治疗前后血液流变性的对比纪元斌＊张宝华＊李敬群＊许慧＊脉络宁是由通塞脉片的处方改革研制而成的复方中药注射液，经静脉滴注给药，见效快、使用安全，适用于对急性发作期或严重缺血性心脑血管病患者的临床治疗。为进一步探讨该药物的疗效机理...     

椎—基底动脉供血不足患者的甲襞微循环表现

椎—基底动脉供血不足患者的甲襞微循环表现刘晓宁＊程培芬＊杨政芳＊椎—基底动脉供血不足（ＶＢＩ）引起的眩晕十分常见，严重者具有发生脑梗塞的高度危险性，它的发生与血液的高凝状态和血液流变性的异常有密切关系，而本文从微循环变化的角度探讨ＶＢＩ病人的微血管形...     

白头翁汤中主要成分导入合谷穴对皮肤微血管舒缩振幅的作用

目的:观察白头翁汤及其主要化学成分导入合谷穴前后皮肤微血管舒缩振幅的变化。方法:选取阳明大肠经上的合谷穴作为导药穴位,利用离子导入仪将白头翁汤及小檗碱、药根碱、巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁皂苷B4、白头翁素导入受试者合谷穴皮肤,并用激光多普勒血流仪记录导药前后穴区皮肤微血管舒缩振幅的变化。结果:白头翁汤、小檗碱和药根碱显著提高了穴区皮肤微血管舒缩活动的振幅(P<0.01),巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素、白头翁皂苷B4对穴区皮肤微血管舒缩活动振幅影响差异无显著性统计学意义(P>0.05)。结论:小檗碱和药根碱是白头翁汤提高微血管舒缩活动振幅的主要成分。     

GPI锚固蛋白与T细胞活化信号转导

GPI锚固蛋白在T淋巴细胞表面形成富含胆固醇和糖鞘酯的脂微区(1ipidmicrodomains)。被激活的GPI锚固蛋白与糖鞘酯发生侧向交联引起脂微区胞浆面PTK的聚集和活化,转导级联细胞活化信号,同时还引起细胞骨架的改变。胆固醇不仅参予构成GPI锚固蛋白脂微区,还影响到GPI锚固蛋白的信号转导。TCR／CD3在GPI锚固蛋白信号转导中起着重要作用．两条信号途径相互影响共同促使T细胞的活化增殖。G蛋白可能通过PLC和AC等信号分子活性调节参与GPI信号转导。     

CRT-E2-EGFP表达、胞内定位及其对B16细胞凋亡的影响

目的:观察CRT-E2融合蛋白在小鼠黑色素瘤B16细胞中的表达及其定位,并探讨CRT引起的E2蛋白表达定位改变对B16细胞增殖及调亡的影响.方法:构建荧光真核表达载体pEGFP-CRT、pEGFP-E2、pEGFP-CRT-E2,将上述载体以及空载体pEGFP-C1经脂质体瞬时转染B16细胞,West-em blot分析确认目的蛋白表达.荧光显微镜下观察CRT-E2融合蛋白在细胞中表达定位;流式细胞术检测不同重组表达载体转染B16细胞24 h、48 h后,对细胞周期的影响和诱导凋亡的情况.结果:CRT-E2融合蛋白在B16细胞中正确表达,主要分布于细胞质,能将细胞阻滞于G1期,有效诱导肿瘤细胞发生凋亡(P<0.01).结论:成功构建CRT-E2真核表达载体,外源性CRT能够引起E2蛋白表达定位于细胞质,并明显促进了肿瘤细胞的调亡.     

肾缺血再灌注损伤中微血管损伤防治的研究进展

随着肾移植、血管外科的建立和发展，使许多严重疾病的治疗，提高到了一个新的水平，而这些新方法所涉及的肾缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)，更引起国内外学者的高度重视。近年研究表明微血管损伤是IRI的重要发病机制之一。本文拟从微血管角度针对微血管血液流变性、微血管舒缩功能及通透性诸环节对肾     

生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备

目的 制备生物素化的HLA-A＊2402-抗原肽复合物。方法 将原核高效表达的sHLA-A＊2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A＊2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠，形成HLA—A＊2402-抗原肽复合物单体，并在BirA酶作用下进行生物素化，使生物素结合到HLA-A＊2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA—A＊2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体（W6／32和兔抗人β2微球蛋白抗体）及链霉亲合素进行ELISA和Westem blot，检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 折叠复合物中，主要含有HLA—A＊2402-肽复合物单体及β2两种成分，其中HLA-A＊2402-肽复合物单体可生物素化。结论 成功制备出生物素化的HLA—A＊2402-抗原肽复合物单体，为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。     

高血压微血管反应性变化及粉防己碱的影响

目的观察肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲ）微血管反应性变化及粉防己碱的影响。方法用冷热刺激诱导大鼠耳廓微血管舒缩,用血流量变化与恢复时间评价微血管舒缩反应能力。结果ＲＨＲ热刺激引起的微血管舒张反应降低,冷刺激导致的微血管收缩反应增强,去除刺激后血流的完全恢复延迟,伴血清ＡＣＥ活性升高和ＮＯ含量降低。粉防己碱可有效改善上述变化。结论ＲＨＲ微血管对缩舒血管刺激的反应性异常,粉防己碱具有良好的改善微血管反应性作用,其机制与维护内皮功能的完整性有关。     

钙结合蛋白Parvalbumin(小白蛋白)及其在中枢神经系统中的分布

<正> 钙离子具有多种生理作用。诸如肌肉兴奋—收缩偶联、糖原代谢、神经冲动传递、递质释放以及细胞分裂等各种生物学过程莫不依赖钙离子参与。钙离子与环磷酸腺苷一样被称为第二信使,它的作用是通过细胞内具有钙离子亲合力的钙结合蛋白来实现的,钙结合蛋白与钙离子的结合可将钙离子所携带的生物信息转化为生物效应,如肌钙蛋白C与钙离子结合后引起肌肉收缩,人们较为熟悉的钙调蛋白具有广泛的生物学意义,它与钙离子结合后可     

加载白血病抗原肽PRl的HLA-A*0201四聚体制备

目的制备加载白血病抗原肽PR1的HLA-A＊0201四聚体。方法构建HLA-A＊0201-BSP和β2-微球蛋白（β2M）原核表达载体，进行目的蛋白表达、纯化。在体外将PR1（VLQELNVIV）与纯化的HLA-A＊0201-BSP、β2M通过稀释复性折叠成HLA-A＊0201-PR1复合物。利用BirA酶进行生物素标记。再经阴离子交换纯化得到生物素化的HLA-A＊0201-PR1复合物单体。此单体与PE标记的链霉亲和素按4：1比例混合，即可形成四聚体。结果成功制备了HLA-A＊0201-PRl四聚体。结论制备的HLA-A＊0201-PR1四聚体为定量检测白血病患者体内PR1抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞提供了有力工具。     

水通道蛋白1与内皮细胞功能

 水通道蛋白1（AQP1）是目前唯一发现在内皮有表达的水通道蛋白,在肾脏尿浓缩机制、小肠吸收乳糜微粒和角膜内皮的液体平衡中有重要作用;在血管内皮细胞中促进NO和CO2转运,调节血管舒缩功能,与心肌缺血后水肿和坏死关系密切,促进内皮细胞迁移,影响血管形成和肿瘤播散。     

上海人群中TAP与IgA肾炎相关性的研究

目的探讨上海人群中抗原处理相关转运蛋白（ＴＡＰ）与ＩｇＡ肾炎的相关性。方法用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法对上海地区８８名正常人及４０名ＩｇＡ肾炎患者ＴＡＰ进行分型。结果在病人组及对照组中共发现３种ＴＡＰ１（ＴＡＰ１Ａ、１Ｂ、１Ｃ）及４种ＴＡＰ２（ＴＡＰ２＊０１０１、＊０１０２、＊０２０１、＊０２０２）等位基因。未发现病人组与对照组之间ＴＡＰ等位基因分布的差异。结论本文结果未能证明ＴＡＰ基因与ＩｇＡ肾炎相关，但不排除未检测的多态位点与ＩｇＡ肾炎关联的可能性。     

血管外膜周脂肪对血管舒缩功能的影响

脂肪组织通过分泌多种脂肪细胞因子及蛋白因子,与交感-肾索-血管紧张素系统相互作用,形成脂肪组织-肾索-血管紧张索-醛固酮系统,共同影响血管舒缩功能.外膜周脂肪组织对血管舒缩功能有重要的调节作用.外膜周脂肪组织通过局部合成分泌血管紧张索原、血管紧张素Ⅱ,参与构成血管壁肾素-血管紧张素系统;最近研究推测外膜周脂肪释放一种蛋白因子,暂名为外膜源性舒张因子,引起血管舒张,两者共同作用影响血管舒张功能.     

p53依赖的X-连锁凋亡抑制蛋白调节与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的本研究旨在探讨X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法应用RT—PCR、Western Blot、流式细胞仪等检测卵巢癌顺铂敏感细胞株0V2008、A2780s和耐药株C13＊、A2780cp中XIAP表达和卵巢癌细胞的凋亡率,并将反义XIAP寡核苷酸（XIAPAs—ODN）、正义XIAP寡核苷酸（XIAPs—ODN）和随机对照链导入顺铂耐药细胞C13＊（p53野生型）和A2780cp（p53突变型）中,比较转染前、后耐药细胞Caspase-3活性和顺铂耐药性的改变。结果卵巢癌顺铂敏感细胞和耐药细胞中XIAP在mRNA水平的表达无明显差异（P〉0．05）。顺铂可以引起OV2008和A2780s中XIAP蛋白表达明显下降（P〈0．05）,而对C13＊和A2780cp的XIAP蛋白含量无明显影响（P〉0．05）。转染XIAPAs—ODN可降调p53野生型耐药细胞C13＊中XIAP的表达,并显著增加Caspase-3活性和对顺铂敏感性（P〈0．05）,而XIAP As—ODN对p53突变型耐药细胞A2780cp无此作用。结论卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与XIAP蛋白相对高表达有关,反义XIAP可在一定程度上逆转卵巢癌顺铂耐药,该作用与卵巢癌细胞的p53表型有关。     

骨骼肌发育过程中的中间纤维免疫细胞化学研究

骨骼肌发育过程中的中间纤维免疫细胞化学研究杨雅改牧田登之＊（河北医科大学电镜实验中心＊日本山口大学解剖教研室）中间纤维，微丝和微管是构成细胞骨骼的重要组成成分。与微丝、微管相比，中间纤维的作用还有许多未解之迷。按其生化、免疫学特性，中间纤维可分为五种...     

巨噬细胞中钙调蛋白2的缺失可缓解小鼠炎症性关节炎

目的研究探讨抑制巨噬细胞中钙调蛋白2的表达治疗炎症性关节炎的作用和相关机制。方法取野生型小鼠(wild type,WT)和钙调蛋白2敲除(knock out, KO)小鼠构建胶原诱导炎症性关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA),检测炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β的mRNA及蛋白表达变化、小鼠足趾肿胀容积变化以及炎症组织细胞大小和增殖变化。进一步在293T细胞中检测钙调蛋白2和CCL3(macrophage inflammatory protein 1-α, MIP-1α)的结合情况。在骨髓单核巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)细胞中转染钙调蛋白2过表达和抑制慢病毒,检测钙调蛋白2潜在下游CCL3的表达。最后,使用抑制钙调蛋白2的慢病毒进行炎症性关节炎小鼠的治疗作用探索,进行上述病理性检测。结果荧光定量PCR和免疫印迹实验显示,钙调蛋白2 KO小鼠关节炎组织炎症因子分泌明显降低;足趾肿胀容积明显减小;炎症组织细胞明显变大,细胞增殖明显增多。荧光素酶实验和染色质免疫共沉淀实验结果显示,钙调蛋白2...