小鼠视网膜血管内皮细胞生长因子与视网膜新生血管的相关性研究

目的研究氧诱导视网膜新生血管小鼠模型中视网膜血管内皮细胞生长因子(VEGF)与视网膜新生血管的相关性。方法通过建立氧诱导视网膜新生血管小鼠模型,分别于12、14、17、21 d龄随机抽取2组幼鼠各6只,一侧眼球测定视网膜VEGF水平,另一侧眼球进行视网膜铺片、ADP酶染色,考察其相关性。结果模型组小鼠左眼球ADP酶染色结果显示,模型组12 d龄小鼠血管迂曲、扩张、变形,随时间延长血管变形加重,17 d时最严重,且视乳头周围出现大片无灌注区,视网膜周边可见大量新生血管生成,到21 d时模型开始恢复。视网膜VEGF测定结果显示,12 d龄模型小鼠VEGF开始升高,17 d达峰值,以后下降。结论视网膜VEGF变化和视网膜血管形态具有很好的正相关性,17 d时新生血管形成最多。     

氧诱导新生小鼠视网膜病变中血管新生和氧应激相关基因表达的变化

目的建立氧诱导新生小鼠视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型,观察视网膜血管新生情况,检测OIR病变过程中调控血管新生和氧应激相关基因表达的变化。方法新生小鼠出生后d 7,置75.5%高氧环境中饲养5 d,再返回正常氧环境继续饲养5 d,建立OIR模型。运用视网膜免疫荧光染色检测OIR小鼠视网膜中血管新生情况;运用Real-time PCR技术检测基因表达情况。结果视网膜免疫荧光染色结果显示,OIR小鼠视网膜在高氧诱导视网膜微血管消退的基础上,相对缺氧状态诱导出现明显的新生血管。Real-time PCR结果显示OIR模型小鼠视网膜中:血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(VEGFR)家族中:VEGFA、VEGFD、VEGFR1、VEGFR2的基因表达分别上调1.73、1.71、1.48、1.80倍;血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)及其受体(PDGFR)家族中:PDGFA、PDGFB、PDGFRa、PDGFRb的基因表达分别上调1.29、1.71、1.42、1.42倍;基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)中的MMP2基因表达上调1.48倍;参与调控氧化应激的核转录因子Nrf2[nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2]及受其调控的下游基因包括谷氨酸-半胱氨酸连接酶(glutamatecysteine ligase,GCL)的催化(GCLC)和调节(GCLM)亚单位的基因表达均下调,表达量分别为正常的0.28、0.76、0.49。结论 OIR小鼠视网膜病变过程中,视网膜中促进血管新生相关基因表达上调,而抗氧化相关基因表达下调。     

氧诱导小鼠视网膜病变模型的研究

目的建立对视网膜新生血管进行定量研究的小鼠模型,用于视网膜新生血管发生机制的探讨及治疗方法的评价。方法给氧组16只C57BL/6J小鼠P7到P12置于氧浓度为70%±5%的氧箱,诱导视网膜新生血管形成。对照组16只C57BL/6J小鼠生活在正常氧环境中作为对照。P17各再随机分成两组,一组FITC-Dextran灌注后,视网膜铺片,在荧光显微镜下观察视网膜血管生长情况并行视网膜病变评分,视网膜病变评分包括血管生长、血管丛、视网膜外新生血管、中央血管收缩、视网膜出血和血管扭曲;另一组PAS-苏木精染色作眼球冰冻切片,计数突破内界膜的内皮细胞数。结果给氧组视网膜血管分布及形态较对照组有明显差异,给氧组视网膜中央毛细血管闭塞,大血管管径粗细不均,周边更扭曲,血管丛增生,荧光素渗漏。给氧组视网膜病变总分用四分位数表示为10(9,10),而对照组为0.5(0,1),两组比较有显著性差异(P<0.001)。突破内界膜的内皮细胞数给氧组为58.2±9.9,而对照组小于1,两者比较有显著性差异(P<0.001)。结论高氧可诱导建立小鼠视网膜新生血管模型,其发生与缺氧有关。采用F1TC-Dextran造影铺片是观察视网膜新生血管的有效方法。     

YAP在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义

目的:研究YAP在氧诱导小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)中的表达及意义,探讨YAP对RNV形成的作用。方法:取C57BL/6J小鼠100只随机分为对照组和高氧组,HE染色计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,免疫组织化学、Western blot检测YAP蛋白的表达情况。结果:高氧组视网膜可见大片无灌注区和大量突破内界膜的新生血管内皮细胞核(24.65±1.26)个,对照组的无灌注区及新生血管内皮细胞核数(5.12±1.48)明显减少(P0.05)。高氧组YAP蛋白表达显著增高,有统计学意义(P0.05)。结论:YAP的异常表达可能与RNV形成密切相关。     

原花青素对氧诱导视网膜病变新生血管形成及血管内皮生长因子表达的抑制研究

目的 探讨原花青素(PC)对C57小鼠氧诱导视网膜病变新生血管形成的抑制作用.方法 采用随机数字表法将105只7日龄C57小鼠随机分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、阴性对照组(PBS)组、低剂量PC组、中剂量PC组、高剂量PC组和Lucentis组(阳性对照组),每组15只.将实验组小鼠在高氧分压环境下饲养5 ...     

NLRP3在小鼠氧诱导视网膜新生血管中的作用

目的本研究旨在于小鼠氧诱导视网膜新生血管病变模型中探讨NLRP3-VEGF信号通路在视网膜新生血管形成中的作用。方法用NLRP3基因敲除(NLRP3^-/-)小鼠及对照的同种系C57BL/6J小鼠建立氧诱导视网膜新生血管病变模型(OIR)。分别在P12、P17、P21天时取材,通过视网膜荧光灌注铺片,观察新生血管情况。选取建立OIR模型的正常C57BL/6J小鼠在P12、P17、P21天时取材,进行视网膜荧光灌注铺片,与OIR模型小鼠进行对比分析,验证OIR模型建立成功。两组OIR小鼠P17时取材,通过RT-PCR检测VEGF的RNA水平变化,评价NLRP3缺失对VEGF表达的调控作用。结果视网膜荧光灌注铺片发现,在正常C57BL/6J未建立OIR模型时,视网膜未出现无灌注区和新生血管,说明OIR模型建立成功。在P12、P17和P21,与C57BL/6J的OIR小鼠相比,在NLRP3^-/-OIR小鼠中,新生血管的范围明显缩小,无灌注区减少,正常血管相对增多。P17时,与正常OIR小鼠相比,NLRP3^-/-OIR的VEGF表...     

奥曲肽对氧诱导视网膜新生血管抑制作用的研究

<正>视网膜新生血管是视网膜静脉阻塞、增殖型糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变等疾病共有的病理改变,最终可导致视力减退甚至致盲。临床上对视网膜新生血管主要采用光凝治疗,但激光治疗只能延缓病变的进展,且手术可能损伤正常视网膜组织,导致中心视力损害。尽管一些抗血管内     

新生大鼠视网膜新生血管模型的制备

目的 建 立大 鼠 视 网 膜新 生 血 管 模型 进 行 大 鼠视 网 膜 新 生血 管 模 型 的 可行 性 研 究 ，并 探 讨 视网膜新 生 血管 的发 病 机制 。方 法 ７ ｄ 龄有 色大 鼠 （Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ ｒａｔ）在浓 度为 ７５％ 的高 氧 环 境中 生 活 ５ ｄ，然 后回到正 常 氧环 境 中。 通 过 相 对分 子 质 量 高的 荧 光 素 造影 视 网 膜 铺片 和 视 网 膜组 织 病 理 切 片检 查 ，反映 视 网 膜 血管的增 生 ；利 用分 子生 物 学技 术蛋 白 质印 迹法 （Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）测定 视 网膜 血管 内 皮生 长因 子 （Ｖ ＥＧＦ）含 量的 变 化。结果 给 氧组 新生 有 色 大鼠 视 网 膜 大血 管 显 著 扩张 ，大 片无 灌 注 区 ，大 量 新生 血 管 芽 形成 ；大 量 新生 血 管 突 破视 网膜 内界 膜 长 入 玻璃 体 腔 ；视 网 膜 ＶＥＧ Ｆ 的 表 达 明 显增 强 。 结 论 新 生 有 色大 鼠 可 以 作为 视 网 膜 新生 血 管 模 型的实验 用 鼠。     

用于治疗糖尿病视网膜病变的抗血管新生药物

糖尿病视网膜病变是糖尿病的主要并发症,也是中老年人失明的重要原因之一。血管新生被普遍认为是糖尿病视网膜病变的治疗靶点。综述可用于治疗糖尿病视网膜病变的抗血管新生药物,包括抗血管内皮细胞生长因子药物、皮质类固醇激素、蛋白激酶C-β抑制剂和色素上皮衍生因子等的研究进展,为该类药物的深入开发和临床应用提供思路。     

坎地沙坦抑制小鼠视网膜新生血管的实验研究

目的探讨坎地沙坦对小鼠视网膜新生血管(Retinal neovascularization,RNV)的抑制作用。方法采用随机对照实验研究,选取7 d龄C57BL/6J新生小鼠40只,随机分为2组:高氧组和坎地沙坦组,每组20只。坎地沙坦组和高氧组小鼠建立氧诱导视网膜病变模型,出氧箱后,每日分别腹腔注射坎地沙坦40 mg/kg和等量生理盐水,连续5 d。采用荧光素血管灌注视网膜铺片观察视网膜血管形态学改变;制作视网膜组织切片并进行HE染色,计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用Western blot检测视网膜血管紧张素Ⅱ(Angio-tensinⅡ,AngⅡ)和血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表达。结果荧光素血管灌注视网膜铺片:高氧组可见大量新生血管丛,伴明显荧光渗漏,坎地沙坦组较高氧组视网膜新生血管减少,荧光渗漏减轻。突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数:坎地沙坦组较高氧组减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。视网膜AngⅡ蛋白表达水平:坎地沙坦组较高氧组下调,差异具有统计学意义(P<0.01)。视网膜VEGF蛋白表达水平:坎地沙坦组较高氧组下调,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论早期应用坎地沙坦可一定程度抑制RNV形成。     

柚皮素对体外糖尿病视网膜新生血管形成的抑制作用及机制

目的 观察柚皮素对体外高糖诱导的视网膜血管生成过程的影响及机制.方法 将猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)采用随机数字表法分为对照组、高糖组、高糖+柚皮素组,对照组在常规培养基中培养,高糖组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖,高糖+柚皮素组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖及3 mg/L柚皮素.培养24 h后,分别采用cck-8、Transwell和Matrigel实验检测细胞增殖、迁移及管腔形成.采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 高糖组细胞增殖率(72.08±2.12)％比对照组(99.43±0.67)％减小,高糖+柚皮素组(90.54±1.47)％明显高于高糖组;细胞迁移数和管腔形成比较,高糖组明显高于对照组,高糖+柚皮素组显低于高糖组;Western blotting结果表明高糖组细胞LC3-Ⅱ的表达明显高于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显低于高糖组;高糖组细胞p-mTOR的表达明显低于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显高于高糖组.结论 柚皮素可通过抑制细胞自噬在体外抑制糖尿病视网膜新生血管形成.     

pH-Responsive polymer boosts cytosolic siRNA release for retinal neovascularization therapy

Small interfering RNA(siRNA) has a promising future in the treatment of ocular diseases due to its high efficiency, specificity, and low toxicity in inhibiting the expression of target genes and proteins. However, due to the unique anatomical structure of the eye and various barriers, delivering nucleic acids to the retina remains a significant challenge. In this study, we rationally design PACD, an A-B-C type non-viral vector copolymer composed of a hydrophilic PEG block(A), a siRNA binding blo...     

A novel angiopoietin-derived peptide displays anti-angiogenic activity and inhibits tumour-induced and retinal neovascularization

BACKGROUND AND PURPOSE

Pathological angiogenesis is associated with various human diseases, such as cancer, autoimmune diseases and retinopathy. The angiopoietin (Ang)–Tie2 system plays critical roles in several steps of angiogenic remodelling. Here, we have investigated the anti-angiogenic effect of a novel angiopoietin-derived peptide.

EXPERIMENTAL APPROACH

Using computational methods, we identified peptides from helical segments within angiopoietins, which were predicted to inhibit their activity. These peptides were tested using biochemical methods and models of angiogenesis. The peptide with best efficacy, A11, was selected for further characterization as an anti-angiogenic compound.

KEY RESULTS

The potent anti-angiogenic activity of A11 was demonstrated in a multicellular assay of angiogenesis and in the chorioallantoic membrane model. A11 bound to angiopoietins and reduced the binding of Ang-2 to Tie2. A11 was also significantly reduced vascular density in a model of tumour-induced angiogenesis. Its ability to inhibit Ang-2 but not Ang-1-induced endothelial cell migration, and to down-regulate Tie2 levels in tumour microvessels, suggests that A11 targets the Ang–Tie2 pathway. In a rat model of oxygen-induced retinopathy, A11 strongly inhibited retinal angiogenesis. Moreover, combination of A11 with an anti-VEGF antibody showed a trend for further inhibition of angiogenesis, suggesting an additive effect.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

Our results indicate that A11 is a potent anti-angiogenic compound, through modulation of the Ang–Tie2 system, underlining its potential as a therapeutic agent for the treatment of ocular and tumour neovascularization, as well as other pathological conditions that are dependent on angiogenesis.     

一种小鼠肿瘤新生血管形成模型

目的建立小鼠肿瘤新生血管形成模型。方法荷瘤小鼠静脉注射质量分数为10%的胭脂红溶液,比色法测定肿瘤组织胭脂红含量,计算血管指数反映新生血管形成;应用此模型考察沙利度胺对肿瘤组织血管形成的影响。结果血管指数可反映肿瘤组织新生血管形成,沙利度胺可剂量依赖性地抑制小鼠肿瘤血管指数。结论小鼠肿瘤新生血管模型是一种稳定可靠的新生血管模型。