一种改进的适用于膜片钳技术的海马神经元分离方法

目的探讨获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元的方法。方法取3～6日龄Sprague-Dawley新生大鼠10只,应用酶消化及机械分离法,急性分离出大鼠海马神经元,通过倒置显微镜直接观察和全细胞膜片钳技术分别对分离得到的海马细胞的形态学和电生理学特征进行研究。结果急性分离所得海马具有锥形胞体的顶树突特征,立体感强。在全细胞膜片钳记录模式下可记录到全细胞电流及钠通道电流,该电流可被1μmol·L~(-1)的河豚毒素完全阻断。结论应用该酶消化及机械分离法急性分离的新生大鼠海马神经元形态和生理特性良好,适用于海马神经元的膜片钳研究。     

实验大鼠泰泽菌检测方法的比较研究

应用酶消化及机械分离法分离出生10～15d的大鼠海马神经元，从形态学及电生理学方面鉴定细胞活性。结果表明，该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元。用0．5μmol／L的TTx阻断Na^ 通道后，分别记录到典型的全细胞电压依赖性钾离子通道电流以及延迟整流钾通道电流。证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究，对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。     

新生大鼠海马神经元的原代培养方法

目的：介绍一种条件简单，生长良好的海马神经元培养方法。方法：急性分离及原代培养海马神经元，并用膜片钳全细胞记录方法观察培养好的神经元电生理学特性。结果：培养的神经元胞体清晰，晕光明显，表达了多种电压门控和化学门控离子通道。结论：本实验方法简单、可靠，保持了神经元结构和功能特性。     

果蝇三龄幼虫中枢神经元细胞培养

目的：建立果蝇幼虫中枢神经元细胞培养方法，为研究吸入麻醇药相关的离子通道建立实验模型。方法：取晚期三龄幼虫的脑腹神经节经解剖，酶解、冲洗，吹打、接种，培养步骤进行分散细胞的原代培养，并用膜片钳技术记录全细胞电流以检测培养细胞的功能。结果：培养的神经元细胞生长活跃，状态良好，具有神经元的特征-轴突生长及形成网络连接，以“全细胞方式”记录到的电压依赖性K^ 电流在不同细胞之间电流动力学和幅度变化较大，呈多样性。结论：果绳中枢神经元可在体外进行培养，方法稳定可靠；培养的神经元细胞生长活跃，状态良好，为进行吸入麻醉药的电生理机制提供良好实验模型。     

一种适合膜片钳记录的成年大鼠背根神经节细胞培养方法

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠背根神经节（D0rsal root ganglion,DRG）细胞培养方法。方法分离并培养成年大鼠DRG神经元,显微镜下观察培养神经元的形态,膜片钳技术记录培养神经元的基本膜电生理特性及ATP激活电流。结果培养的DRG神经元形态结构完整;其静息膜电位在正常范围内,可记录到诱发动作电位及钠电流;在膜片钳全细胞记录模式下,能稳定地记录到ATP诱发电流。结论培养的成年大鼠DRG神经元适合膜片钳试验。     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

海马脑片CA1中间神经元α7尼古丁受体亚型的功能研究

目的利用膜片钳全细胞记录方法研究α7古丁受体亚型的功能特点。方法实验在急性制备的海马脑片CA1中间神经元上进行;α7尼古丁受体亚型可被局部高压微量喷射的高浓度的胆碱特异性激活,膜片钳全细胞记录方法用于判断神经元类型并记录膜电流变化。结果中间神经元的动作电位发放频率较均匀,基本无适应性;其膜上的α7古丁受体亚型可被胆碱特异性激活,产生强大的持续时间短暂的内向离子流,该离子流可被MLA（一种α7古丁受体亚型的抑制剂）完全阻断。结论采用药理学和膜片钳技术相结合的方法可对α7古丁受体亚型的功能特点进行有效研究。     

膜片钳技术在成年大鼠海马脑片应用的初步研究

目的：制备成年大鼠海马脑片,使其适应于膜片钳全细胞记录,并观察海马锥体神经元的电生理特性。方法：选200 g左右的成年SD大鼠,雌雄不拘,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,四肢固定,剪开胸腔,夹闭下腔静脉,以0 ℃切片液进行心脏灌注,断头,取下全脑,置入0 ℃切片液中冰镇3 min,再修块,切片,厚度约350 μm,移入37 ℃预热的人工脑脊液中孵育1 h后,转入23 ℃水浴中孵育30 min备用。倒置相差显微镜和红外微分干涉相差显微镜观察脑片的神经元形态;全细胞膜片钳记录脑片神经元的电生理学特性。结果：海马CA1区神经元光泽度好,立体感强且突起明显;在进行膜片钳全细胞记录时,封接顺利,并且可以记录到电流和动作电位的变化图形。结论：本方法制备的成年大鼠脑片,可以耐受离体后缺血缺氧造成的损伤,保持电生理活性而适应膜片钳全细胞记录模式。     

恒流灌注分离心肌细胞及膜片钳记录钾电流方法学探讨

目的探讨膜片钳实验中豚鼠、大鼠心肌细胞急性分离过程中的观察指标和影响因素,并进行膜片钳记录。方法使用改进的Langendorff恒流灌注法分离心肌细胞和全细胞膜片钳记录钾通道电流。结果分离即刻,存活细胞可达80%以上,复钙后约40%~50%呈静息状态,余出现自发性收缩,存活细胞能够进行膜片钳封接,于室温KB液中可成活8 h以上。结论使用恒流灌注法,观测灌注压的变化,可以较客观的掌握酶解消化的程度,利于获取生理状态良好的心肌细胞。且细胞能够进行膜片钳实验。     

新生大白鼠大脑皮层神经元的培养及其基本电生理学特性研究

目的建立一种较为理想的适用于膜片钳制技术的神经元培养方法,并观察其形态学和电生理学特性.方法改进的神经元原代培养方法及膜片钳单通道记录法.结果采用此方法能获得形态典型的神经元,用膜片钳单通道记录法能记录到两类正常的通道电流(KCa和KATP).结论该培养方法获得细胞数量多,细胞质量高,电生理特性正常.