吉林西北部草原鼠疫菌染色体PCR指纹图谱分析

本通过PCR指纹图谱，分析了吉林西部草原鼠疫菌染色体NDA特征，结果显示该地区鼠疫菌染色体可产生8条非常明显的扩增区带，其他对照的菌株只产生6条扩增区带，分析认为这种差别可能是该地菌株的一特征。     

吉林西北部草原鼠疫菌质粒及酶切图谱的研究

为探讨吉林西北部草原鼠疫菌分子生物学性状,本研究测试了该地区３０株鼠疫菌携带的质粒种类和质粒ＤＮＡ酶切图谱。结果显示该地区鼠疫菌携带３种规范的质粒,即６５Ｍａｌ、４５Ｍｄａｌ和６Ｍｄａｌ质粒,质粒ＤＮＡ ＥｃｏＲⅠ酶切图谱可切成１６个片段。     

青海田鼠型鼠疫耶尔森氏菌生物学性状的研究

目的：通过试验菌株与对照菌株相比较，观察其生物学性状，确定试验菌株的生态型。方法：选择生物化学试验、毒力决定因子、营养型、毒力、质粒及外膜蛋白等项目。结果：试验菌株与对照菌株生物学性状有较大差异，生化性状为鼠李糖＋、甘油＋、脱氨－、麦芽糖＋、阿胶糖－、密二糖＋，毒力因子是鼠疫菌荚膜抗原（FraI^ )、毒力抗原（Vwa^ )、鼠疫菌素I（PstI^ )、色素沉着因子（Pgm^ ),营养型为精氨酸、亮氨酸依赖型（Arg^-、Leu^-),质粒为6、45、65Mdal质粒等。结论：确定了我国一个新的鼠疫菌生态型－青藏高原青海田鼠型鼠疫菌。     

云南省南部及东南部鼠疫菌质粒图谱分析及其流行病学意义

用0.7％琼脂糖凝胶电泳检查了自1996年以来云南南部及东南部所分离的41株鼠疫菌质粒DNA,结果表明来自石屏、文山、砚山、建水、个旧、禄春、开远7个县(市)的菌株质粒图谱同来自澜沧江下游的澜沧、临沧、勐海、景洪及元江流域的思茅地区的菌株一样,其中石屏分离4株缺失6Mdal质粒带型,但出现—分子量约12Mdal的清晰带型,用Pla基因作为引物,做PCR分析结果为阳性,推测可能为6Mdal质粒的二聚体。结合流行病学分析认为滇南、滇东南部分地区可能同属一片鼠疫自然疫源地。     

鼠疫菌质粒及变异分析

不同鼠疫疫源地的鼠疫菌所携带的质粒种类是不同的,大部分鼠疫菌通常携带规范的质粒,即携带6、45和65Mdal3种质粒。最大一类质粒变异较大,而且独自规律地分布在特定的地理位置,具有分类属性。鼠疫菌携带的质粒,在自然界中和在试验环境下发生变异的情况报道甚少。本试验是测定攻击蚤以后强毒鼠疫菌质粒,证实从蚤体分离出的鼠疫菌,有些菌株的大质粒发生变异,原菌株65Mdal大质粒变成92Mdal。     

三种方法检测鼠疫菌的结果分析

目的了解广西地区鼠疫菌质粒图谱.方法采用反向血凝试验、双重式聚合酶链式反应及质粒图谱分析,对分离自广西的31株鼠疫菌进行检测.结果反向血凝试验和双重式聚合酶链式反应检出阳性率达100%,质粒图谱分析发现广西鼠疫菌株含4,6,45,65及111.36Mdal 5种质粒,可划分为Ⅰ(含4,6及45Mdal 3种质粒,占3.2%)、Ⅱ(含4,6,45及65Mdal 4种质粒,占93.6%)及Ⅲ(含4,6,45及111.36Mdal 4种质粒,占3.2%)3个质粒图谱类型.此外,还发现广西鼠疫菌株质粒图谱与云南省澜沧江下游区域的相同.结论推测广西的鼠疫流行可能是由云南省传入或云南省澜沧江下游区域与广西隆林县和西林县同属一个类型的自然疫源地.     

鼠疫菌分子生物学研究现状

1 鼠疫菌质粒的研究1.1 鼠疫菌携带质粒的种类 Ferber等研究了10株鼠疫弱毒苗和1株强毒菌,报道了鼠疫菌携带6、45和65Mdal三种质粒。Ben—Gurion等报道了12.5、44.5和61Mdal的鼠疫菌质粒。Portnoy等则报道了6、47和65Mdal的鼠疫 菌质粒。冢野寻子用电镜观察到了1、7、13、23和45Mdal质粒。 我国任士明首先报道了鼠疫弱毒菌株携带三种质粒,分子量分别为6、45和65Mdal。继后何永山     

我国青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌生物学特性的比较

目的通过对我国青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌生物学特性的比较,了解两种菌株的遗传特点及其亲缘关系。方法以生化、毒力因子、毒力、PstⅠ敏感性、质粒、外膜蛋白,重复片断扩增多态性指纹图谱,脉冲场电泳图谱等方法进行比较。结果青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌株的主要生化性状均为鼠李糖( )、麦芽糖( )、密二糖( )、甘油( )、阿胶糖(-)脱氮(-);具有FI 、VW 、Pgm 、PstⅠ ;对小白鼠表现为毒力强,青海田鼠型鼠疫菌对豚鼠的毒力高于布氏田鼠型鼠疫菌;两种菌株均对鼠疫菌(包括自身)产生的PstⅠ敏感;它们均携带(6、45、65)×106相对分子质量(Mr)3种质粒,外膜蛋白图谱均缺失32kd条带;重复片断扩增多态性指纹图表现出二者有近缘关系,脉冲场凝胶电泳图谱一致。结论青海田鼠与布氏田鼠鼠疫菌的生物学特性相似,有较近的亲缘关系。     

鼠疫菌4Mdal质粒的分布特征

1990～ 1994年董兴齐等发现 99.15 %的鼠疫菌都含有 6、45和 6 5 Mdal 3种规范质粒 ,其中 179株 (澜沧县 42株、勐海县49株、临沧县 73株、景洪县 15株 )还具有一种 4Mdal的新质粒[1 ] 。我们对 1995～ 1999年新分离的 134株鼠疫菌质粒 DNA进行了检查 ,其结果报告如下。1　材料和方法1.1　菌株来源 :云南省 1995～ 1999年 8个地州 2 6个县市新分离鼠疫菌 134株 ,其中鼠 119株 ,蚤 13株 ,人 2株。1.2　对照菌株 :大肠杆菌 V5 17,含有 1.4～ 35 .8Mdal8种质粒 ;鼠疫 EV株含有 6、45和 6 5 Mdal3种质粒。1.3　试验方法 :参照 Kado法 [2 ] …     

鼠疫菌质粒DNA的限制性内切酶反应

限制性内切酶反应是分子生物学实验中的一个重要方法。基因物理图谱的绘制、DNA核苷酸序列分析、基因片段的体外切割重组及转化菌中重组子的筛选等等,都需要使用限制性内切酶。因此,限制性内切酶反应做的如何也是关键的一步。鼠疫菌质粒DNA的限制性内切酶反应的实验结果如下。1 材料与方法 菌株 由本室提供鼠疫强毒株。 限制性内切酶 EcoRV(带缓冲液),中国协和医科大学医学科学技术开发公司。 鼠疫菌质粒DNA提取用碱裂解法。 限制性内切酶反应 参照有关文献并略加改动。 取鼠疫菌质粒DNA8μl,依次加入10μl蒸馏水、2μl10×缓冲液和1～2单位限制性内切酶。37℃水浴1～2小时,加0.4μl0.5mol/L EDTA(pH8.0)终止     

耶尔森氏菌属45Mdal质粒与Ca^2＋依赖性

本文检查了鼠疫菌，假结核菌和小肠结肠炎菌的质粒ＤＮＡ，并观察了它们的Ｃａ＾２＋依赖性。结果表明Ｌｃｒ与它们共有的４５Ｍｄａｌ质粒相关，但也存在有４５Ｍｄａｌ质粒而菌株为Ｌｃｒ＾－，或查不到４５Ｍｄａｌ质粒而菌株表现Ｌｃｒ＾＋。初步分析认为，前者可能是介导式操纵钙依赖性的基因失活，而后者可能是４５Ｍｄａｌ质粒整合在染色体上。     

宁夏盐池沙鼠疫源地鼠疫菌株毒力因子特性研究

本文对宁夏盐池沙地鼠自然疫源地内９６株鼠疫菌的毒力测定结果进行了分析，有７１株属于强毒鼠疫菌，１７株为中等毒力菌，８株为弱毒菌，从同一地区不同宿主分离的鼠疫菌毒力无明显差异。但流行末期分离的菌株毒力呈下降趋势。质粒分析，发现沙土鼠疫源地区菌株普启蒙具有４条带，分别为６，１３，４５和６５Ｍｄａｌ。９６株菌中仅一株缺失４５Ｍｄａｌ质粒，另外２株菌缺失１３Ｍｄａｌ质粒。菌株的毒力与色素沉着能力和Ｌｃｒ相     

鼠疫菌4Mdal质粒的发现及鉴定

用琼脂糖凝胶电泳检测分离自云南省澜沧和勐海两县的鼠疫菌质粒,发现除具有已知的6、45和65三种质粒外,尚存在一种分子量约4Mdal 的新质粒。此质粒的证实对研究该地区鼠疫特征及在传播方面将具有重要的流行病学意义。     

四川省德格县2株疑似喜马拉雅旱獭鼠疫菌株的鉴定

目的 通过对四川省德格县自毙喜马拉雅旱獭体内分离出的2株疑似鼠疫菌株进行生化特征、毒力鉴定,确定四川省是否存在旱獭鼠疫自然疫源地.方法 菌株鉴定采用细菌形态染色、培养特性、鼠疫噬菌体裂解试验、生化及糖醇类酵解试验、毒力因子、毒力、营养需求、质粒、基因检测及基因分型方法进行.结果 光镜下,2株被检菌株均为革兰染色阴性,呈球杆状,两极浓染、两端钝圆;在赫氏普通琼脂上24-48 h,被检菌株形态呈中心发暗,有黄褐色粗糙颗粒,边缘不整呈锯齿状、薄而透明的花边;在赫氏血琼脂上,菌落隆起,色泽深,花边消失或残留锯齿状痕迹.2株被检菌株均能酵解阿胶糖、麦芽糖、甘油,不酵解鼠李糖、密二糖,脱氮阳性;毒力因子均为F1+、VW+、Pgm+,Pst I+;携带鼠疫菌常见的质粒,相对分子质量(Mr)为6.0×106、45.0×106、65.0×106,具有鼠疫菌的毒力相关质粒基因Pla、calfl、LcrG;对小鼠的毒力试验,绝对致死量(LD100)均为50个菌;营养需求上,对苯丙氨酸、甲硫氨酸依赖;基因型是Genomovar 5;与假结核菌(PTB)在鉴别培养基尿素、奥腾、枸橼酸盐上有明显区别,含鼠疫菌特有的Pst I和F1抗原,22℃下能被鼠疫噬菌体完全裂解.含有鼠疫菌特有的3a片段.结论 四川省德格县喜马拉雅早獭体内分离的2株疑似菌株均为鼠疫耶尔森菌,具有青藏高原喜马拉雅旱獭型鼠疫菌株的特性,四川省存在喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地.     

鼠疫菌EV76突变株的生物学特性研究

目的研究鼠疫菌突变株的生物学特性，为解决今后在监测中对非典型鼠疫菌的检测提供参考。方法假结核死菌免疫白兔，用EV76株2亿菌Vi注入后18h静脉采血培养，循环5次，收集5代菌。结果第1代菌开始在含龙胆紫血培养基不生长，在普通培养基生长加快，菌落灰白、有动力、肉汤微混、G^-球杆菌。生化一部分阳转阴，甘油转阳，FIAg逐代减少。2代菌开始抗噬菌体，1、2、3代菌与假结核阳性血清轻度凝集。结论鼠疫EV76株在免疫动物体内是逐代突变的。     

RP4质粒转移给鼠疫菌的研究

利用携带ＲＰ４质粒的大肠杆菌与鼠疫菌进行了转移实验，获得了接合子，证实ＲＰ４质粒向鼠疫菌转移频率为１０＾６，ＲＰ４质粒能随鼠疫菌传代，鼠疫菌所含的６５Ｍｄａｌ、４５Ｍｄａｌ、１３Ｍｄａｌ、６Ｍｄａｌ质粒与ＲＰ４质粒相容。未发现ＲＰ４质粒诱动鼠疫菌质粒ＤＮＡ。鼠疫菌自身质粒不能自行转移。     

Cloning and mapping of the replication origin of Escherichia coli.

The replication origin of Escherichia coli has been cloned on a nonreplicating DNA fragment coding for ampicillin resistance. This recombinant DNA, named pSY211, replicates depending on the presence of the replication origin and can be recovered as a closed circular plasmid DNA of 10.7 megadaltons (Mdal). A restriction map has been constructed. EcoRI cleaves pSY211 into two fragments: one is the ampicillin fragment of 4.5 Mdal and the other is a chromosomal fragment of 6 Mdal and contains the origin. The 6 Mdal EcoRI fragment has four BamHI sites, three HindIII sites, and one Xho I site. A mutant of pSY211 has been isolated which is lacking two BamHI fragments of the chromosomal fragment. In recA hosts, pSY211 is lost at a high frequency. In recA+ hosts, pSY211 is integrated into the chromosome due to nucleotide sequence homology between pSY211 and the replication origin of the E. coli chromosome. The integration site has been mapped. We conclude that the replication origin is located at a site between uncA and rbsK, at about 83 min on the genetic map of E. coli.