蓝舌病毒HbC3株与蓝舌病毒10型标准株感染人肺腺癌SPC-A-1细胞的生物学特性比较研究

蓝舌病毒HbC_3株与蓝舌病毒10型标准株感染人肺腺癌SPC-A-1细胞的生物学特性比较研究@雷森林$武汉大学医学结构生物学研究中心!武汉430071 @肖安涛$武汉大学医学院病毒学研究所!武汉430071 @刘春新$武汉大学医学结构生物学研究中心!武汉430071 @陈保平$武汉大学医学结     

蓝舌病毒HbC株的增殖和血清学特点

研究蓝舌病毒中国湖北分离株（ＢＴＶ－ＨｂＣ株）在Ｖｅｒｏ和ＢＨＫ－２１两种细胞上的增殖特点以及与标准病毒株（ＢＴＶ－１０）的血清学关系。发现ＢＴＶ－ＨｂＣ和ＢＴＶ－１０感染Ｖｅｒｏ和ＢＨＫ－２１单层细胞后,２４－３０ｈ病毒滴度可达到最高值。用ＢＴＶ－ＨｂＣ免疫家兔,其抗血清在琼脂双扩试验中能与ＢＴＶ－１０抗原病毒呈强阳性反应而与轮状病毒,风疹病毒,柯萨奇病毒,流感病毒等呈阴性反应。     

线粒体在蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨BTV-HbC3对人肝癌Hep-3B细胞线粒体功能和膜电位的影响及其与细胞凋亡关系。方法:利用透射电镜和荧光显微镜观察Hep-3B细胞感染BTV-HbC3在24,36,48 h的凋亡情况与其线粒体形态变化;噻唑蓝(MTT)法检测其线粒体功能;流式细胞仪检测经Rh123/PI染色的BTV-HbC3诱导该细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)和Annexin V/PI染色的细胞凋亡率。结果:Hep-3B细胞感染病毒在24,36,48 h时可导致线粒体功能下降,同时使线粒体膜电位显著降低,细胞凋亡率显著增加。结论:BTV-HbC3通过诱导凋亡来抑制人肝癌细胞的生长,其机制与线粒体跨膜电位下降有关。     

蓝舌病毒HbC株体外增殖和基因组特征

利用Ｖｅｒｏ细胞研究了蓝舌病毒ＨｂＣ株在单层细胞上的增殖特点。证了实了“按１ＰＦＵ的感染复数接种该病毒于Ｖｅｒｏ细胞,１６ｈ后即可出现ＣＰＥ;２２ｈＣＰＥ达９５％以上,并在电镜下可见到胸浆中聚集着大量的不同发育阶段的病毒颗粒和典型的晶格状我的成熟病毒粒子;２４     

蓝舌病毒HbC株靶向性杀死小鼠荷MA782肿瘤的研究

目的 :将蓝舌病毒湖北株 (BTV HbC)做为一种具有潜在性治疗效能的生物制剂来治疗MA782肿瘤。方法 :首先用BTV HbC病毒感染体外培养的MA782细胞。同时将MA782细胞接种于小鼠皮下 ,复制出了小鼠荷MA782肿瘤的动物模型 ,然后将BTV HbC病毒直接进行瘤体注射。结果 :小鼠荷MA782肿瘤的明显退缩 ,和体外处理的结果是一致的。结论 :证实了BTV HbC病毒是一种有效的治疗恶性肿瘤的新型生物制剂。     

蓝舌病毒HbC株的增殖和血清学特点

研究蓝舌病毒中国湖北分离株（ＢＴＶ ＨｂＣ株）在Ｖｅｒｏ和ＢＨＫ ２１两种细胞上的增殖特点以及与标准病毒株（ＢＴＶ １０）的血清学关系。发现ＢＴＶ ＨｂＣ和ＢＴＶ １０感染Ｖｅｒｏ和ＢＨＫ ２１单层细胞后,２４～３０ｈ病毒滴度可达到最高值。用ＢＴＶ ＨｂＣ免疫家兔,其抗血清在琼脂双扩试验中能与ＢＴＶ １０抗原病毒呈强阳性反应而与轮状病毒、风疹病毒、柯萨奇病毒、流感病毒等呈阴性反应。     

一种新的高纯度蓝舌病毒中国湖北株制备方法

目的 :获得高纯度蓝舌病毒HbC株 ,为制备生产和实验室研究奠定基础。方法 :利用反向免疫共沉淀方法获取纯化的蓝舌病毒颗粒 ;运用透射电镜和凝胶过滤层析检测纯化产物病毒的结构完整性和纯度 ;组织培养技术检测产物的生物学活性并计算纯化得率。结果 :纯化后的病毒经凝胶过滤层析分析仅见一个层析峰 ;所对应的电镜照片背景干净 ,未见明显杂质 ;纯化后的病毒对Vero细胞的TCID50 是 1 0 -5.7·ml-1 ;纯化得率为 5 0 .4 %～70 .8%。结论 :这种新方法能制备出高纯度、高活性的蓝舌病毒 ,且得率较高 ,易于放大生产 ,从而具备大批量高纯度生产制备蓝舌病毒的潜能     

蓝舌病毒HbC株体外增殖和基因组特征

利用Ｖｅｒｏ细胞研究了蓝舌病毒ＨｂＣ株在单层细胞上的增殖特点。证实了：按１ＰＦＵ的感染复数接种该病毒于Ｖｅｒｏ细胞,１６ｈ后即可出现ＣＰＥ;２２ｈＣＰＥ达９５％以上,并在电镜下可见到胞浆中聚集着大量的不同发育阶段的病毒颗粒和典型的晶格状排列的成熟病毒粒子;２４ｈ后细胞出现破碎和大片脱落。结合我室特点,用改良热酚法提取病毒全基因组作凝胶电泳分析,揭示了ＨｂＣ株基因组图谱基本复合已报道的国际标准蓝舌病毒株基因组图谱特征。但是,ＨｂＣ株有两个编码非主要结构多肽的基因Ｍ４和Ｓ１０似与标准株有较明显的差异,故推测ＨｂＣ株可能是一个新的基因型蓝舌病毒。     

蓝舌病毒湖北株对小鼠前列腺癌RM-1细胞的杀伤效应

目的:体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对小鼠前列腺癌细胞RM-1的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶瘤的机制。方法:观察RM-1细胞感染BTV-HbC3的细胞病变效应;MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;DNA Ladder分析病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对RM-1细胞凋亡的影响。结果:BTV-HbC3感染RM-1细胞后有明显的细胞病变效应;DNA Ladder分析为阶梯状条带;透射电镜发现胞质内有大量病毒颗粒和典型细胞凋亡形态变化;流式细胞仪可见明显的细胞凋亡。结论:BTV-HbC3在体外能有效的感染RM-1细胞,并能诱导RM-1细胞凋亡。     

细胞死亡方式理论的研究进展

机体组织在经过缺血再灌注或其他损害时会发生细胞死亡,细胞凋亡（apoptosis）作为细胞死亡的方式已被广泛接受,细胞胀亡（oncosis）是近年来提出的与细胞凋亡不同的另一种细胞死亡方式.本文就细胞死亡方式理论的研究进展进行综述.     

γδT细胞对宫颈癌细胞体外杀伤作用的探讨

目的:探讨宫颈癌组织中是否存在γδT细胞以及γδT细胞在体外抗肿瘤作用.方法:免疫组织化学法检测10例宫颈癌组织中γδT细胞的数量,固相抗体包被法体外扩增出特异性的γδT细胞后用流式细胞仪检测其纯度,乳酸脱氢酶释放实验检测γδT细胞对宫颈癌细胞株SiHa、HeLa细胞的杀伤能力.结果:免疫组化结果显示人宫颈癌组织中肿瘤浸润γδT细胞阳性染色较癌旁组织显著增强,该细胞通过固相抗体包被法体外扩增30 d之后用流式细胞仪检测细胞表面TCRγδ的阳性率高达(91.2±1.2)％,乳酸脱氢酶释放实验显示体外扩增的γδT细胞能够杀伤宫颈癌细胞株SiHa、HeLa细胞,并且其杀伤效应随效应细胞/靶细胞的比例增高而增强.结论:宫颈癌组织中存在γδT细胞,该细胞在体外对宫颈癌细胞具有杀伤作用,其杀伤效应随效应细胞/靶细胞的比例增高而增强.     

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。     

HPV、HSV2感染及C-erbB-2表达与宫颈癌关系

目的 :探讨汕头地区宫颈癌的发生与HPV、HSV2感染以及C erbB 2表达的相关性。方法 :采用PCR技术检测宫颈癌(84例 )组织与正常宫颈 (13例 )组织的HPV DNA、HSV2 DNA ,并用免疫组化SP法检测同一宫颈癌组织标本与正常宫颈组织标本的C erbB 2表达情况。结果 :①宫颈癌组织HPV DNA ,HSV2 DNA阳性率分别为 4 7 6 % ,4 6 4 % ,正常宫颈组织则为7 7% ,15 4 %。宫颈癌组织的HPV、HSV2感染率均显著高于正常宫颈组织 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。②宫颈癌组织中 ,HPV、HSV2双阳性 2 4例 ,经统计学处理 ,HPV和HSV2间的感染有显著相关性 (P <0 0 5 )。③宫颈癌组织的C erbB 2表达率为34 5 % ,显著高于正常宫颈组织 (0 /13,P <0 0 5 )。④ 75 9%的C erbB 2阳性患者 (2 2 /2 9)与HPV和 (或 )HSV2同时呈现阳性。结论 :汕头地区宫颈癌的发生与较高的HPV、HSV2感染率和C erbB 2表达率密切相关 ,三者的共同作用可能是宫颈癌发生发展的重要因素     

应用聚合酶链反应方法检测宫颈癌患者的人乳头瘤病毒

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）在宫颈癌的发生中的作用。方法采用聚合酶链反应（PCR）-核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中HPV-DNA,对来源于子宫颈癌患者的石蜡包埋组织标本进行四种常见生殖道人乳头瘤病毒（HPV）（HPV6、11、16、18）的检测和分型。结果在宫颈癌活检组织中HPV-16,18型39.1%,与正常妇女宫颈组织阳性率均为2.2%比较,差异均具有统计学意义。尖锐湿疣主要是HPV-Ⅰ（6,11型）感染,阳性率为69.2%,HPV-Ⅱ仅占4.2%。结论宫颈癌主要与HPV16及18型感染有关。     

积雪草苷抗人胃癌细胞株SGC-7901作用的研究

目的:观察积雪草苷对人胃癌细胞株SGC-7901的作用;初步探讨积雪草作用于胃癌SGC-7901细胞的机制。方法:采用MTT法观察积雪草对胃癌细胞增值抑制的作用,流式细胞术检测积雪草苷对胃癌细胞凋亡的诱导作用,透射电镜观察SGC-7901凋亡细胞的超微结构。结果:积雪草苷作用的胃癌细胞增值被抑制;促进了胃癌细胞株SGC-7901的凋亡,并存在量效关系。透射电镜观察显示胞质浓缩,核固缩,并可见凋亡小体。结论:积雪草苷可抑制人胃癌细胞SGC-7901的增值并诱导其凋亡。     

白藜芦醇对HeLa细胞蛋白质组影响的研究

[目的]应用双向电泳及质谱技术研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对宫颈癌HeLa细胞蛋白质组的影响。[方法]经磺基罗丹明B(sulforhodamine B ,SRB)法筛选对宫颈癌HeLa细胞有效的白藜芦醇浓度,流式细胞仪检测有效白藜芦醇浓度对HeLa细胞周期和凋亡的影响。HeLa细胞经白藜芦醇处理后,提取细胞总蛋白,应用双向电泳技术建立蛋白质组图谱,筛选白藜芦醇处理前后差异在2倍以上的蛋白质作为差异蛋白,进行质谱鉴定和生物信息学分析。[结果]50μmol/L以上浓度白藜芦醇24小时对HeLa细胞的活性产生影响,将细胞阻滞在S期,诱导HeLa细胞的早期凋亡,并呈剂量依赖性。通过差异蛋白质组分析筛选出12个差异蛋白质,包括原肌球蛋白、细胞核糖核蛋白C、锌指蛋白、钙连接蛋白、微管蛋白β、热休克蛋白70、α烯醇化酶、丙酮酸激酶、雌激素受体β、氨基甲酰磷酸合成酶,HeLa细胞经白藜芦醇处理后这些蛋白表达量均增加。[结论]白藜芦醇可能通过参与调节细胞的转移分化、凋亡、能量代谢等过程而起到抗肿瘤作用。     

河南省63043例女性宫颈脱落细胞HPV基因分型分析

目的 对河南省63043例女性宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）基因分型检测,了解HPV基因感染现状和变化情况,为宫颈癌的筛查、预防和治疗提供参考依据。方法 采用PCR-反向斑点杂交分型技术,对2012~2016年河南省63043例女性的宫颈脱落细胞进行核酸提取和HPV基因分型检测。结果 在63043例女性宫颈脱落细胞中,21种HPV基因亚型均被检出,总HPV、单一HPV、多重HPV、单纯高危型HPV、单纯低危型HPV以及合并高低危HPV阳性检出率分别为28.7%、20.1%、8.6%、20.9%、4.1%、3.7%。检出率较高的3种HPV亚型分别是HPV-16 （7.0%）,HPV-52 （4.3%）和HPV-58 （3.4%）。60岁以下女性随年龄的增长,总HPV、高危型HPV、低危型HPV和多重HPV阳性检出率均呈现"U型"变化曲线,年龄≤25岁和56~60岁是检出高峰期（P<0.05）;总HPV、高危型HPV和多重HPV阳性检出率2014~2016年较2012~2013年有所上升,同一年龄段2012~2016年间阳性检出率相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 河南省HPV阳性检出率较高且近年有所上升,应重视该地区≤25岁和56~60岁女性HPV筛查。包含HPV-16、HPV-52和HPV-58常见亚型的新型多价宫颈癌疫苗可能为该地区宫颈癌的预防和治疗提供更高的保护作用。