哮喘小鼠中核因子-κB对Th2型细胞因子分泌的影响

支气管哮喘表现为Th/Th2型细胞免疫应答的平衡失调、Th1型细胞的免疫应答下调、Th2型细胞因子(如IL-4、IL5等)过度表达.     

核转录因子-KB与支气管哮喘的研究进展

近年来,支气管哮喘发病率呈逐年上升趋势,有效控制哮喘的发生对哮喘患者的生活质量至关重要。目前研究认为气道炎症和气道重构是支气管哮喘病理过程的两个重要方面。此过程与多种炎性蛋白的高表达有关,而核转录因子．KB（NF—KB）作为这些炎症蛋白的上游调控因子参与了哮喘的病理发展。由此,特异性的抑制NF—KB信号转导通路为支气管哮喘的治疗开辟了一条新的途径。     

BCG-PSN通过抑制哮喘小鼠NF-kB影响BALF中细胞因子的水平

核因子NF-kB (Nuclear factor kappa B)是一个具有广泛生物学活性的核转录因子，可参与许多炎症的表达调控，是与支气管哮喘及气道炎症密切相关的因子之一。将28只6周龄BALB／c小鼠(山东大学医学院实验动物室)随机分为4组，每组7只。对照组：隔日腹腔内注射生理盐水(NS)0．03ml，第14天、28天、35天腹腔内注射1．5mg Al(OH)3：BCG-PSN(卡介苗多糖核酸注射液，BCG-Polysac-charide nucleic acid)6周龄组：     

LAG-3-Ig对过敏性哮喘小鼠的Th1/Th2型细胞因子水平和气道反应性的影响

目的:研究淋巴细胞活化基因-3-Ig(LAG-3-Ig)对哮喘小鼠Th1和Th2型细胞因子的比例和气道反应性的影响,为防治哮喘提供实验依据。方法:经卵蛋白(OVA)致敏的雌性BALB/c小鼠于激发前腹腔注射LAG-3-Ig50g,末次激发24h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以ELISA法测定BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ水平。同时观察哮喘小鼠气道反应性的变化。结果:与治疗前比较,经LAG-3-Ig治疗后,哮喘小鼠BALF中IL-4和IL-5的水平显著降低(分别减少了27.9%和29.6%);而IFN-γ的水平显著增高(增加30.8%,P<0.01)。LAG-3-Ig治疗组小鼠气道螺旋条对组织胺的反应性降低,各个密度的组织胺所诱导的气管螺旋条收缩张力显著低于哮喘对照组(P<0.05)。结论:LAG-3-Ig可抑制哮喘小鼠IL-4和IL-5的分泌并能降低小鼠气道的反应性,对哮喘的治疗具有临床意义。     

玉屏风散对S180荷瘤小鼠Th1／Th2型细胞因子的影响

目的探讨玉屏风散对荷瘤小鼠Th1／Th2型细胞因子产生的影响。方法采用体外培养S180肉瘤细胞，接种C57BL／6纯系小鼠，建立荷瘤小鼠模型，设正常对照、荷瘤对照及玉屏风散给药组，检测各组脾脏T淋巴细胞增殖能力及Th1（IL-2、IFN-γ）和Th2（IL-4、IL-10）细胞因子产生水平。结果荷瘤组T细胞增殖能力明显下降，Th2型细胞因子IL-10的产生明显增加，与正常对照组比较均有统计学意义（P〈0．01），而IL-4的含量略有增加，但无统计学意义。Th1型细胞因子IL-2及IFN-γ的产生明显减少，与正常对照组比较有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。玉屏风散给药对T细胞增殖能力及细胞因子的产生有较为明显的调节作用，与荷瘤组比较T细胞增殖能力及IL-2、IFN-γ的产生明显增加（P〈0．01），Th2型细胞因子IL-10的血清含量下降（P〈0．01）．IL-4的含量略有下降，但与荷瘤对照组比较无统计学意义。结论玉屏风散可有效调节荷瘤小鼠的免疫功能，促进荷瘤鼠Th1型细胞因子的产生，有效纠正荷瘤导致Th1／Th2的失衡，增强机体的抗肿瘤免疫功能。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对豚鼠哮喘模型Th1/Th2细胞因子的影响

目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B,SEB)对豚鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型气道炎症及Th1/Th2细胞因子的影响。方法27只豚鼠随机分为对照组,模型组,SEB组各9只,用卵白蛋白(OVA)建立哮喘模型。末次激发豚鼠24-48 h内处理,支气管肺泡灌洗,直接记数总白细胞和嗜酸性粒细胞,观察肺组织病理改变,分装冻存支气管肺泡灌洗液做细胞因子检测。结果SEB组豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量为(2.6±0.64)×106,显著低于模型组的(13.0±1.8)×106(P<0.01);肺组织哮喘炎症反应也轻于模型组;SEB组肺泡灌洗液中Th1细胞因子IFNγ-浓度(126.41±5.17)pg/mL,高于模型组(86.52±5.10)pg/mL(P<0.05);而Th2细胞因子IL-4浓度(50.02±2.79)pg/mL低于模型组(78.30±3.88)pg/mL(P<0.05)。结论SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量,可以通过调节Th1/Th2细胞因子的比值来减轻气道哮喘炎症反应。     

转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达

目的:探讨转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达。 方法:建立卵白蛋白（OVA）致小鼠哮喘模型，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞总数和分类，评价肺组织炎症细胞浸润；ELISA检测BALF和脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度；RT-PCR检测脾细胞和肺组织GATA-3 mRNA表达水平。 结果:哮喘组BALF中炎症细胞总数及嗜酸粒细胞百分比明显高于对照组，支气管出现明显炎症细胞浸润、黏液分泌和支气管收缩，BALF和脾细胞培养上清液中IL-4明显高于对照组，肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达水平均明显高于对照组。 结论:哮喘模型小鼠肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达增加，可能在促进Th2细胞因子合成和介导气道炎症细胞浸润中具有重要作用。     

TRAIL对CIA小鼠脾细胞表达Th1/Th2细胞因子的影响

 摘要：目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand , TRAIL）对胶原诱导型关节炎（Collagen-induced arthritis, CIA）小鼠的治疗效果,探讨TRAIL治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的可能机制。方法 牛Ⅱ型胶原蛋白加弗氏完全佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用重组腺相关病毒AAV-TRAIL关节腔内注射进行治疗。CBA和流式细胞术检测Th1/Th2细胞因子的分泌。结果 AAV-TRAIL可改善CIA小鼠的病情,体外研究其机制发现TRAIL可抑制CIA小鼠的脾细胞分泌Th1型细胞因子,但对Th2型细胞因子没有作用。结论TRAIL对CIA小鼠的治疗作用可能和TRAIL抑制Th1型细胞因子分泌相关。     

中药对过敏性哮喘大鼠模型Th1/Th2型细胞因子的影响

目的:探讨中药治疗对哮喘大鼠IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达及IgE含量的影响.方法:24只Wistar大鼠, 随机分为中药治疗组、空白对照组和哮喘模型组, 利用卵白蛋白(OVA)及氢氧化铝制作大鼠哮喘模型, 在雾化激发期, 中药组用杏仁、甘草等中药制成的溶液雾化大鼠, 其余组用生理盐水代替.采用免疫放射法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法分别检测各组大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中免疫球蛋白E(IgE)含量以及肺组织IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达.结果:与空白对照组比较, 模型组大鼠IgE含量和IL- 4 mRNA的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较, 中药治疗血清IgE的含量和IL- 4 mRNA的表达明显降低(P<0.05), 而IFN-γ mRNA表达则升高(P<0.05).结论:IL- 4可能参与哮喘的发生, 而中药治疗可通过抑制IL- 4 mRNA和上调IFN-γ mRNA的合成, 改善哮喘炎症状态.     

苦参素对HBsAg转基因小鼠血清Th1和Th2细胞因子水平的影响

目的　探讨苦参素对HBsAg转基因小鼠外周血Th1 Th2细胞因子水平的影响。方法　HBsAg转基因小鼠分成苦参素组和对照组 ,分别每天腹腔注射苦参素注射液 2 0 0mg kg 0 2ml和生理盐水 0 2ml,共 30d。处理前后 ,检测外周血清细胞因子水平。结果　对照组处理前后γ 干扰素(IFN γ)与白细胞介素 4 (IL 4 )水平差异无显著意义 ;苦参素组处理前后IFN γ分别为 (3 10 8± 3 172 )pg ml和 (11 0 5 9± 6 971)pg ml,IL 4分别为 (2 9 0 4 5± 13 2 35 )pg ml和 (13 0 2 4± 9 0 0 2 )pg ml(均P <0 0 0 1)。处理后对照组与苦参素组IL 2分别为 (1 0 70± 0 4 4 7)pg ml和 (5 5 37± 2 887)pg ml(P <0 0 0 0 1) ;IL 10分别为 (97 2 2 6± 73 30 6 )pg ml和 (33 6 0 7± 2 3 15 4 )pg ml(P <0 0 1)。结论　在苦参素作用后 ,HBsAg转基因小鼠体内的Th1型细胞因子明显升高 ,Th2型细胞因子明显降低。这将有助于研究苦参素临床治疗乙型肝炎的机制。     

白细胞介素-18对支气管哮喘小鼠气道炎症和核转录因子κB的作用

目的　探讨白细胞介素 18(IL 18)对支气管哮喘 (哮喘 )小鼠气道炎症及核转录因子κB(NF κB)的影响。方法　BALB c小鼠随机分为正常对照组 (A组 ,10只 )、哮喘模型组 (B组 ,10只 )、IL 18注射组 (C组 ,10只 )。B组和C组用经紫外线灭活的呼吸道合胞病毒 (RSV)激发法建立小鼠哮喘模型 ,分别于 1、2、7、8、9、2 1、2 2d腹腔注射生理盐水 (0 .1ml)和IL 18(1μg)。第 2 3天用HE染色切片观察动物气道炎症细胞的改变 ,用免疫组化和蛋白质定量分析法 (Westernblot)测定肺组织中NF κB的活性。结果　B组小鼠哮喘发作症状最明显 ,C组小鼠仅表现为轻度哮喘发作症状 ,A组小鼠无症状。A组支气管粘膜下未见嗜酸性粒细胞 (EOS)和浆细胞 ,B组支气管粘膜下可见EOS[15± 3(平均每视野计数 ,下同 ) ]和浆细胞 (10± 2 ) ,C组支气管粘膜下EOS(6± 2 )和浆细胞 (2± 1)较B组减少 (P<0 .0 5 )。肺组织冰冻切片免疫组化染色发现 :B组NF κB核表达最强 ,C组表达较弱 ,A组无表达。NF κB的抑制蛋白 (IκB)的Westernblot定量分析发现 :A组、C组的IκB含量分别是B组的 3.5和 2 .5倍 ,即说明B组NF κB的含量明显高于其他两组。结论　IL 18对支气管哮喘气道炎症有抑制作用 ,其机制之一可能与IL 18抑制了支气管哮喘小鼠肺组织中NF κ     

抗IgE抗体对哮喘模型小鼠的气道高反应和Th2类细胞因子的影响

目的探讨抗IgE抗体在哮喘小鼠模型中对气道高反应及Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法雌性Balb/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和抗IgE抗体干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量以及蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果抗IgE抗体治疗组与哮喘模型组比较气道阻力明显降低。哮喘模型组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达明显升高,与正常对照组比较,显著差异(P<0.05)。抗IgE抗体干预组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13含量和蛋白表达水平均明显降低;IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达水平上升不明显,与哮喘模型组比较,没有显著差异(P>0.05)。结论抗IgE抗体对哮喘小鼠的治疗作用,其机制可能与调节Th2细胞所分泌的炎症细胞因子有关。     

激素预处理树突状细胞对哮喘Th2型反应的影响

目的： 研究激素预处理的树突状细胞（DCs）对哮喘DCs与T细胞共培养上清液中T辅助细胞1(Th1)和Th2型细胞因子的影响及其机制。方法: 采集哮喘组和健康组外周血,分别常规培养和加入地塞米松培养至成熟DCs。将2组常规培养和地塞米松预处理的DC-T细胞共培养72 h。流式细胞仪测定2组常规培养或地塞米松培养成熟DCs的表型。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DC-T细胞共培养上清液中白细胞介素-5(IL-5)和干扰素-γ（IFN-γ）的含量。结果: 哮喘组常规培养的DC-T细胞共培养上清液中IL-5水平高于健康组（P<0.01）,其IFN-γ含量较健康组有减少的趋势,但无显著差异（P>0.05）;地塞米松预处理的DC-T细胞上清液中IL-5水平低于常规培养组（P<0.01）。无论哮喘组或健康组,地塞米松预处理的DC-T细胞共培养上清液中IFN-γ水平均低于未用地塞米松预处理的DC-T细胞共培养上清液（P<0.01）。2组地塞米松预处理的DCs均部分抑制了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所诱导的DCs表型CD83上调（P<0.01）,而上调了CD14的表达（P<0.01）。结论: 哮喘患者常规培养的DCs与同种自体T细胞共培养后呈Th2型反应,地塞米松预处理的DCs可使Th2型反应减弱,其机制可能与地塞米松影响DCs的分化、成熟有关。     

雌激素与系统性红斑狼疮Th1／Th2型细胞因子分泌异常

近年来，对神经内分泌免疫网络的研究和认识日渐增多加深。本文针对自身免疫性疾病系统性红斑狼疮的特点(其在育龄期妇女中发病率高，而细胞因子的异常分泌与系统性红斑狼疮关系密切)就该病发生发展过程中雌激素与Th1/Th2型细胞因子的关系作一综述。     

抗CD86单克隆抗体对哮喘小鼠TH1/TH2细胞因子的影响

目的观察抗CD86单克隆抗体对卵蛋白干粉(OVA)致敏并刺激小鼠TH1和TH2细胞因子比例的变化,为防治哮喘提供实验依据.方法经OVA致敏的雌性Balb/c于激发前腹腔注射抗CD86单克隆抗体及同型对照IgG2α 50 μg,末次激发48 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和干扰素-γ(INF-γ)水平.结果以OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平升高[分别为(64.23±3.91)pg/mL、(379.84±73.02)pg/mL],与PBS对照组[分别为(22±2)pg/mL、(245.75±50.01)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05);OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中INF-γ水平降低[(98.73±16.41)pg/mL],与PBS对照组[(218.35±48.63)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05).抗CD86单克隆抗体组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平降低[分别为(35.78±4.88)pg/mL、(222.98±58.68)pg/mL],而INF-γ水平升高[(206.92±47.8)pg/mL],与哮喘对照组及同型对照IgG2α组(98.73±16.41)pg/mL、(102.32±15.49)pg/mL比较差异有显著性(P＜0.05).结论抗CD86单克隆抗体通过阻断共刺激信号,纠正TH1/TH2失衡,从而达到抗气道炎症的作用.     

核因子-KB激活与一氧化氮合酶mRNA表达在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肺组织核因子-KB（NF-kB）活化及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达与肺损伤的关系。方法：SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）预处理组。建立各组模型后取肺组织行病理学观察，免疫组织化学法观察NF-kB的表达，实时荧光定量PCR法检测iNOSmRNA表达。结果：对照组仅极少量NF-KB活化，iNOSmRNA呈低水平表达。SAP组NF-kB表达明显增加，并呈动态变化，6h达高峰，主要表达于中性粒细胞、单核／巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞的胞质和胞核内，iNOSmRNA表达明显上调。PDTC预处理组NFrxB表达明显减少，iNOSmRNA表达亦下调，但仍高于对照组。结论：SAP时肺组织NF-kB活化并通过调控iNOSmRNA的表达参与肺损伤。PDTC可能通过抑制NF-kB活性进而下调iNOSmRNA的表达，减轻肺损伤。     

银屑病中四种细胞因子表达以及核因子NF-κB的作用

目的探讨银屑病发病中的核因子调控机制,为疾病治疗提供资料. 方法从银屑病患者外周全血中分离T细胞,与角朊细胞混合培养,利用半定量RT-PCR法分析混合培养体系中的细胞因子mRNA含量,并采用凝胶迁移率电动分析(EMSA)方法分析其中的NF-κB活性. 结果与正常人对照组相比,银屑病患者实验组4种细胞因子的表达显著增加,NF-κB活化也增强;而如先用对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)、雷公藤多甙预处理角朊细胞,可抑制细胞因子分泌和NF-κB活化. 结论 NF-κB活化增强是导致银屑病炎症反应的重要因素之一,提示抑制NF-κB活性的药物可有助于改善炎症病情.     

神经生长因子对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子分泌的调控作用

目的探讨支气管哮喘时神经生长因子(NGF)对Th1/Th2类细胞因子分泌的调控作用。方法随机将SD大鼠分为4组:正常对照组、哮喘组(建立哮喘模型)、外源性NGF干预组(NGF组)、抗NGF抗体干预组(抗NGF抗体组),每组8只。14d后取肺组织进行HE染色,观察病理改变;免疫组化和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织的NGF蛋白,Th1类细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、Th2类细胞因子白细胞介素4(IL-4)蛋白水平。结果哮喘组支气管、肺组织炎症明显;肺组织NGF蛋白的分泌水平和免疫阳性信号也显著增高(P<0·001);IL-4蛋白水平明显增强(P<0·05),而IFN-γ蛋白水平明显减低(P<0·001);肺组织中的NGF蛋白与IFN-γ/IL-4蛋白比值呈显著负相关(P<0·01)。NGF组更进一步增强上述变化(P<0·05),而抗NGF抗体干预组显著缓解上述变化(P<0·05)。结论NGF可诱导哮喘大鼠神经源性炎症,并分别通过增强Th2类细胞因子分泌,减弱Th1细胞因子分泌,诱导哮喘Th1/Th2免疫失衡效应。     

Th17淋巴细胞及相关细胞因子加重哮喘小鼠气道炎症

目的:研究Th17淋巴细胞及其相关的细胞因子在加重哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分率情况.将外周血各T淋巴细胞亚群与BALF的中性粒细胞数作相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P＜0.05),BALF上清中IL-4和IL-17的水平显著增高(P＜0.05),而IFN-γ的水平显著降低(P＜0.05),外周血Th2、Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著增高(P＜0.05),而Th1淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著降低(P＜0.05).相关性分析显示Th1淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著负相关(rThl=-0.446,P＜0.05),Th17淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著正相关(rTh17=0.394,P＜0.05).结论:Th17淋巴细胞可促进中性粒细胞及炎性介质在哮喘小鼠气道内的聚集,加重气道炎症.