应用胶体金探针技术IGSS进行猪囊尾蚴与抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb特异性结合的定位研究

本文报道将IGSS应用于抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究。用猪囊尾蚴囊液抗原免疫BALB/C小鼠的脾细胞与胃髓瘤细胞系NS-D融合,经克隆化获得三株分泌抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb杂交瘤细胞A_(91)、G_(11)、F_(3),用ELISA检测证实杂交瘤细胞分泌特异性抗体。对其诱生腹水经ELISA、IHA检测显示腹水中高效价特异性的McAb,     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

抗猪囊尾蚴单克隆抗体的初步研究

为了对囊尾蚴病的免疫诊断提供有价值的单在隆抗体（McAb)，我们应用杂交瘤技术，通过对骨髓瘤细胞NS－1与用猪囊尾蚴囊液抗原免疫的BALB／C小鼠脾细胞融合试验及反复筛选和多次克隆化，建立了3株分泌抗猪囊尾蚴抗原的McAb杂交瘤细胞株1D4、4E11和4E12。其分泌的抗体具有很强的种的特异性，与细粒棘球蚴和肥颈绦虫囊尾蚴抗原均不发生交叉反应。免疫球蛋白亚类鉴定表明3株均属IgG1。经蛋白质转移电泳试验（Western blot)确定，与所获McAb发生特异反应的抗原是猪囊尾蚴头节囊壁（SCW）抗原分子量为25kDa和17kDa的蛋白组分。     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验研究

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距囊结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋毛虫病猪、肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。提示用单克隆抗体不仅能检测到猪体组织液中特异性循环抗原，而且具有较高的敏感性和特异性，建立了一种通过检测组织液来判定肉类是否感染猪囊尾蚴的免疫学方法。     

带绦虫囊尾蚴的囊液和膜糖蛋白抗原

为了确定带绦虫囊尾蚴的囊液和膜的成分中是否含有交叉反应少、有诊断价值的抗原组分,作者通过直接同位素标记、小扁豆外源性凝集素(LcH)-琼脂糖珠4B亲和层析以及SDS-PAGE等方法分析猪带绦虫、牛带绦虫和肥头绦虫囊尾蚴的表膜蛋白以及前两种囊尾蚴的囊液,并用不同的感染宿主血清与上述抗原进行免疫沉淀试验,以评价各种抗原的特异性。     

神经部位囊尾蚴病的血清学诊断:以猪肉绦虫囊尾蚴的囊液及其它成份为抗原的ELISA法

作者从重感染的猪中取得囊尾蚴,制备囊液抗原(CFAg)、原头节抗原(CSAg)和囊壁抗原(CWAg)。囊尾蚴刺破后收集囊液,并从囊壁取下头节,均加 pH7. 2PBS,经超声获 CSAg 和 CWAg。新鲜囊液抗原     

猪囊尾蚴蛋白水解酶的初步研究

猪带绦虫病是人畜共患病。迄今国内外对囊虫病的研究主要报道特异性的诊断方法[1 ,2 ] 和诊断抗原[3 ,4] 。Ｍａｎｏｕｔｃｈａｒｉａｎ等[5 ] 克隆了肥头绦虫囊尾蚴囊液蛋白编码 5 6、74和 78ｋＤａ的保护性抗原基因。孙树汉等[6 ] 以囊虫病患者血清和病猪血清为探针筛选猪囊尾蚴ｃＤＮＡ文库 ,克隆了用于诊断的人特异性抗原、猪特异性抗原及人、猪共同抗原。关于猪囊尾蚴蛋白水解酶 ,目前尚未见研究报道。本文从猪囊尾蚴体内提取蛋白酶 ,研究其对各种底物的分解活性及酶抑制剂和二价阳离子对酶活性的影响。 河北省自然科学基金资助项目 (…     

猪囊尾蚴蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦分析

猪囊尾蚴粗抗原在进行人体囊虫病的免疫诊断中有比较好的效果。但猪囊尾蚴抗原成分复杂,为了进一步提高阳性率,减少交叉反应,需要纯化抗原,分离出特异的抗原组分。我们用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦(IEF)对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊抗原蛋白质组分进行了比较分析。     

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA的阶段特异性表达

目的：分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。方法：用猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ（λｃＣ２８）及抗λｃＣ２８单表位抗体作探针，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交技术分析了λｃＣ２８编码ｃＤＮＡ在猪带绦虫各发育阶段的特异性表达。结果：猪囊尾蚴和成虫不同节片抗原蛋白具有阶段特异性，λｃＣ２８ｃＤＮＡ编码的２８ｋＤａ抗原蛋白只在囊尾蚴阶段表达，成虫幼节、成节、孕节都不表达。结论：猪囊尾蚴阶段特异性抗原的编码基因存在于囊尾蚴阶段和成虫的幼节中，但仅有囊尾蚴阶段的ｍＲＮＡ表达２８ｋＤａ抗原蛋白。     

囊虫病快速免疫色谱测试法的建立和初步应用

目的：建立一种敏感，特异，简便快速的囊虫病免疫诊断方法。方法：以胶体金标记抗猪囊尾蚴抗原单克隆抗体，将另一抗猪囊尾蚴抗原单克隆抗体在硝酸醋酸混合纤维素膜上固定成一条线，制成免疫测试条，待测抗原与金标单克隆抗体结合后沿着硝酸醋酸混合纤维素膜移动，与膜上的特异性单克隆抗体结合形成肉眼可见的褐红色线，结果：当猪囊尾蚴囊液抗原量为5ng时，测试条仍呈阳性反应，检测脑囊虫病患者脑脊液（CSF）的阳性率为82．60％，检测健康人CSF的阴性符合率为100％，将本法检测CSF结果与ELISA比较，两方法的敏感性和特异性相似，结论：本方法敏感，特异，操作简便快速，试剂稳定，重复性好，在囊虫病的诊断中具有很好的应用前景。     

用间接酶标测定法评价不同猪囊尾蚴抗原在人囊尾蚴病免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将猪囊尾蚴及其囊液的蛋白质分别分离为8种抗原,用间接酶标法检测猪囊尾蚴病病人、其他寄生虫病人及正常人血清中的相应抗体。结果表明,在8种抗原制品中,囊液部分提纯抗原P_1诊断囊尾蚴病的阳性率最高。囊尾蚴粗抗原的部分提纯成份P_(25-55)的阳性率次之。 P_1和囊液粗抗原对包虫病病人血清存在严重的交叉反应,而P_(25-55)交叉反应较低。P_1与肺吸虫病病人血清有交叉反应,但P_(25-55)与肺吸虫病人血清无交叉反应。P_25-55的来源比P_1丰富,是此病免疫诊断的实用抗原。     

采用分子筛层析法分离纯化细粒棘球蚴囊液粗抗原

目的分离纯化细粒棘球蚴囊液抗原,去除其中的非特异性反应蛋白,探索优化囊液抗原制备方法。方法采用超滤法浓缩羊肝细粒棘球蚴囊液制备成粗抗原,并采用免疫印迹实验对囊液抗原进行分析,发现非特异性反应的主要蛋白条带。随后采用Superdex凝胶柱通过分子筛层析法对囊液抗原进行纯化。用44份细粒棘球蚴病患者、17份健康人和10份囊尾蚴患者血清进行酶联免疫实验,评估纯化后囊液抗原的检测能力。结果免疫印迹实验发现,非特异性反应的主要条带的相对分子质量(M_r)约为55 000,纯化后去除了该非特异性反应蛋白。纯化后的囊液抗原ELISA检测灵敏度为93.2%(41/44),特异性为94.1%(16/17),约登指数为0.87,与囊尾蚴病交叉反应性为30%(3/10)。未纯化前的灵敏度为90.9%(40/44),特异性为88.2%(15/17),约登指数0.79,与囊尾蚴病交叉反应性为60%(6/10)。纯化前后ELISA检测的灵敏度存在显著性差异。结论本研究采用分子筛层析法对羊源细粒棘球蚴的囊液抗原进行纯化,去除了引起非特异性反应的主要蛋白(M_r 55 000),为后续进行囊液抗原标准化、提高检测能力提供了依据。     

包虫与囊虫囊液中共同抗原比较

许多蠕虫存在有种属间的共同抗原成分、致使引起免疫诊断的交叉反应,包虫囊液(EgCF)与猪囊尾蚴囊液(CcCF)即含有大量的属间共同抗原。作者以间接法 ELISA 采用 EgCF     

免疫金银法标记抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究

McAb F_3在猪囊尾蚴上的结合部位经免疫金银法标记定位,冰冻及石腊切片均显示出清晰的结合位点。囊壁部位颗粒均匀呈双层分布,头节折叠部位皱襞的凹陷处黑色颗粒呈密集的小片状。免疫金银法所标记的抗猪囊尾蚴囊液与其相应抗原的结合部位与囊尾蚴细胞层的分布相一致。     

猪囊尾蚴抗原的免疫化学研究

本文应用琼脂双向扩散(DID)、免疫电泳(IEP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对猪囊尾蚴的各部分抗原,即完整幼虫、囊液、头节和囊壁抗原进行分析。实验结果表明,四种抗原间存在相同的抗原成分。囊液中含有糖蛋白和脂蛋白。囊液、头节和囊壁蛋白质的主要分子量均在100KD以下。囊液与头节有     

斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

猪囊尾蚴病免疫和诊断抗原的分子生物学研究进展

猪囊尾蚴病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。猪囊尾蚴特异性和保护性抗原的研究是猪带绦虫病、猪囊尾蚴病免疫和诊断的基础。天然抗原来源有限,限制了其应用,而重组抗原的应用可解决质量控制和抗原来源的问题。该文就近年来猪囊尾蚴病免疫和诊断抗原的分子生物学研究进展进行了综述。     

猪囊尾蚴囊液蛋白组学分析

目的利用鸟枪法技术鉴定猪囊尾蚴囊液蛋白组分构成,完善猪囊尾蚴蛋白表达谱,筛选特异性候选诊断标识并分析囊液蛋白组分的功能。方法无菌收集猪囊尾蚴虫体囊液,经处理后采用shotgun液相色谱-串联质谱系统对囊液进行分选与鉴定,通过Mascot 2.2软件进行数据库检索,完成蛋白鉴定。使用Blast2go软件对蛋白序列进行比对和注释,对注释的蛋白组分数据进行Gene Ontology (GO)分析。结果经鸟枪法分析共获得486个蛋白,通过Mascot 2.2软件检索已鉴定蛋白为158种,未知蛋白为328种。初步筛选囊液中含有丰度较高的8 kDa糖蛋白、膜联蛋白、烯醇化酶、胰蛋白酶样蛋白等4个猪囊尾蚴特异性抗原和多种酶类,主要存在于细胞及细胞组分中。其中膜联蛋白主要具有结合功能,主要参与一系列依赖于钙离子的膜型生物活动;烯醇化酶主要具有离子结合功能和水解酶活性,除大量富集在糖酵解途径中,还参与调节DNA结合转录因子过程。GO分析结果显示:蛋白谱分布细胞成分方面, 65个蛋白位于细胞中, 64个蛋白位于细胞组分中, 25个蛋白位于细胞器中,其余位于细胞器、蛋白复合物、细胞外区域和细胞膜中;蛋白谱分子功能方面, 72个蛋白具有催化活性, 74个蛋白具有结合功能,其余蛋白具有转运蛋白活性、分子功能调节剂、结构分子活性等功能;生物进程分类方面, 69个蛋白参与细胞进程,73个蛋白参与代谢进程, 11个蛋白参与生物调节、生物过程的调节、信号、对刺激的应答、定位等过程。结论经鸟枪法技术初步筛选出4个丰度较高可作为猪囊尾蚴病诊断标识的候选抗原,鉴定出的酶类可能在猪囊尾蚴与宿主互作过程中起相关作用。     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验…

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋行虫病猪，肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。     

猪囊虫病的免疫学诊断研究.一、猪囊尾蚴蛋白质及其抗原制剂的电泳分析

本文报道猪囊尾蚴头节和囊壁混合蛋白质与可溶性抗原及囊液蛋白质和可溶性抗原的电泳区带。头节和囊壁混合抗原有13条(PAGE)和22条(SDS-PAGE)考马斯亮蓝染色带,免疫学抗原11种;囊液抗原有10条(PAGE)和16条(SDS-PAGE)考马斯亮蓝染色带、PAS和苏丹黑B染色带各1条,免疫学抗原14种。囊液富含蛋白质、糖蛋白和脂蛋白,且有一种抗原活性较强的抗原组分。两种抗原有共同抗原3种,均含耐热抗原组分.