牛、绵羊和禽类对表达猪流感血凝素的重组牛痘病毒疫苗的应答

作者对牛、绵羊和鸡接种表达猪流感病毒N/NJ/11/76血凝素的重组牛痘病毒疫苗。用病毒蚀斑试验和胸苷激酶(TK)鉴别试验,测定TK~-人143B细胞单层中的病毒。在人143B细胞单层上接种0.1ml血浆样品,测定动物的病毒血症。两天后,用20%乙醇配制的0.1%结晶紫染色测定病毒蚀斑。取接种部位皮肤损害结痂材料分离病毒,将样品置无菌乳钵内加1ml PBS(pH7.4)研磨并以1000g离心5分钟,取上清液接种于人143细胞培养物上,当出现细胞致病作用(CPE)时,将1ml盐溶液中的细胞置-70℃贮存。在试验期间,牛和绵羊未出现任何疾病     

体外检测氢氧化铝佐剂灭活疫苗的病毒抗原含量

作者用抗原捕获ELISA直接体外检测以氢氧化铝(AH)为佐剂的猪细小病毒(PPV)、假性狂犬病病毒(PRV)和传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗的抗原含量.该ELISA的主要步骤为:将碳酸钠缓冲液适当稀释的单一特异性抗血清置于ELISA微滴板中4℃过夜.以后步骤均在23～25℃中进行.用PBS轻洗后,以6%脱脂奶粉(NFDM)封闭1小时.再用PBS轻洗,2孔或3孔加入2倍稀释的市售疫苗、无佐剂病毒     

使用C6/36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6/36细胞,比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。将1∶10稀释的血清样本200μl接种到成片的C6/36细胞单层,培养7天,分别用IFA或RT-PCR测定。模拟感染C6/36细胞作阴性对照并用PBS代替血样。进行时程试验时,用1×104感染单位/ml的DEN-1病毒(NauraIsland株)接种C6/36细胞。感染24h后用IFA检测细胞的登革热病毒感染,用PCR检测细胞上清的病毒基因组,然后逐日检测1周。结果表明,用1×104感染单位/ml病毒接种C6/36细胞后,在…     

恩诺沙星抗体免疫检测条件的建立

目的 制备恩诺沙星(ERLX)的多克隆抗体,以期建立通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测恩诺沙星抗体的效价和优化快速检测方法.方法 将牛血清白蛋白(BSA)和鸡血清白蛋白(OVA)偶联成功的恩诺沙星完全抗原(BSA-ERLX和OVA-ERLX)免疫新西兰家兔得到的血清分别保存在4、-20和-70℃半年后,用ELISA方法确定抗原包被的最适浓度、血清(一抗)的效价、一抗的最适稀释倍数及二抗的最适稀释倍数.首先将抗原包被浓度分为三组:20、10和5μg/ml,确定最适包被浓度,并在此基础上确定血清的效价和血清的最适稀释倍数.结果 不同温度下保存的BSA-ERLX和OVA-ERLX抗体的最适抗原包被浓度均为10μg/ml.在4、-20和-70℃保存的BSA-ERLX的抗体效价分别为12800、25600和25600:一抗的最适稀释倍数分别是:800、800和1600,二抗最适稀释倍数为1000.OVA-ERLX的效价在4、-20和-70℃分别为3200、6400和6400;一抗的最适稀释倍数分别为800、1600、1600,二抗的最适稀释倍数均为1000.结论 不同温度下保存的BSA-ERLX比OVA-ERLX抗体效价均高,综合考虑认为,-20℃保存的BSA-ERLX抗体,更加适合于进行ELISA检测.     

日本麻疹疫苗效力测定中的蚀斑形成试验参数

本文作者用蚀斑形成试验对麻疹疫苗效力进行了研究,发现病毒接种量和不同病毒株对培养温度的敏感程度是影响病毒滴度的关键.作者分别用不同来源的Vero细胞和四种麻疹疫苗(AIK-C、Schwarz FF8、CAM70和TD97)及日本“内部”标准疫苗T-1988.8进行蚀斑试验.此外,分别用不同孔径的培养板进行比较.将疫苗病毒作10倍倍比稀释,室温下吸附60分钟,加含琼脂的培养基覆盖,分别在33℃、35℃和37℃于5%CO_2条件下,倒置培育5～7天后加含中性红的琼脂培养基覆盖并计数,观察到第13天,每天计算蚀斑形成单位(PFU)/ml.     

昆虫细胞表达的重组流感血凝素疫苗的免疫效果评价

应用DNA重组技术可以快速克隆流感病毒血凝素(HA)基因并使其在真核系统中有效地表达.应用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的HA蛋白,对青年人接种后,可诱生抗体并预防感染.本文作者对这一重组蛋白在老年人中的免疫效果进行了评价.用表达流感病毒A/北京/32/92(H3N2)HA基因cDNA全序列的重组杆状病毒感染昆虫细胞产生的HA抗原纯度在99%以上,该重组抗原称为rHAO.将rHAO疫苗溶于PBS使接种量分别为15、45或135μg/0.5ml,同时设立三价亚病毒疫苗和安慰剂对照.     

用阴道毛滴虫可溶性抗原和单克隆抗体进行ELISA试验研究

目的　探讨用阴道毛滴虫可溶性抗原和单克隆抗体进行ELISA试验的条件。方法　选用不同抗原浓度(50μg／ml～400μg／mg)包被酶标板,选用不同孵育时间(15～120)、不同封闭剂(脱脂奶粉、吐温20/PBS、牛血清白蛋白、小牛血清)和不同酶标板(国产和进口)。结果　以200μg／ml抗原量,用1%牛血清白蛋白封闭,37℃孵育1小时为本试验最佳条件。结论　检测10例滴虫性阴道炎患者血清,阳性率为90%,与多种寄生虫感染血清或单克隆抗体均无交叉反应。X     

MMR三联疫苗效价试验方法的改进

麻疹-腮腺炎-风疹三联疫苗(MMR)的效价测定采用免疫细胞化学灶试验。其中麻疹与腮腺炎的病毒滴定是在Vero细胞上进行,风疹病毒滴定使用RK13细胞。由于RK13细胞中腮腺炎病毒能抑制风疹病毒病变灶形成。其原因是腮腺炎病毒诱导了干扰素的作用,如果在接种物中加入适量抗腮腺炎病毒血清则可消除这种干扰。在直径为3.5cm的6孔细胞培养板上分别制备Vero和RK13单层细胞,MMR三联疫苗以含2%小牛血清的Eagle液连续5倍稀释,测定麻疹与腮腺炎时接种Vero细胞,每孔加0.1ml。置二氧化碳孵箱37℃培养7天。在RK13细胞上滴定风疹病毒时首     

用细胞病变法快速鉴别Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒

作者用PBS将单纯疱疹病毒(HSV)连续稀释至10~(-1)～10~(-6),分别接种平底微孔塑料滴定板,每个稀释度种4孔,每孔0.025ml,然后加入0.2ml非洲绿猴肾细胞(BS-C-1株)悬液(含8～10×10~4个活细胞/ml),放36.5℃4%CO_2空气中培养4～5天。用光学显微镜     

间接固定细胞免疫荧光法检测AIDS相关逆转录病毒(HTLV-Ⅲ/LAV)抗体的特异性、敏感性和实用性

作者使用HTLV-Ⅲ/LAV感染的CEM/LAV-N1细胞作为间接免疫荧光法的抗原,这种细胞可以产生并释放HTLV-Ⅲ/LAV,将细胞悬液滴在12孔玻片上,丙酮固定后贮存在-70℃供使用。从三个大陆的不同患者及正常人群中采取2233份血清,取已知AIDS病人血清作阳性对照,未感染的CEM细胞及异性恋者血清作阴性对照。检测时将待检和对照血清作倍比稀释,与感染和未感染细胞共同于37℃培育30分钟后,用PBS充分洗涤,然后每孔加1:15稀释的羊抗人IgG Fab_2荧光     

实验性多价ISCOM亚单位疫苗诱导中和人和牛呼吸道合胞病毒的抗体

用羊肾(OK)细胞系培养人呼吸道合胞病毒Long(RS)株和牛RS病毒A-51908株.细胞在加有50μg庆大霉素与5%胎牛血清的Hanks 199和最低必需培养基中生长.采用微滴板以OK细胞进行病毒滴定.细胞按密度为1×10~5/ml接种并在5%CO_2中培养.将25μl10倍稀释的病毒液加入各孔,经2小时吸附后,各孔再加0.15ml无血清培养基,微滴板在37℃个培育3天,然后用倒式     

免疫细胞化学灶试验检测麻疹-流行性腮腺炎-风疹三价疫苗的效力

作者应用免疫细胞化学染色灶试验分别测定麻疹、流行性腮腺炎和风疹三价疫苗(MMR)中每个疫苗的效力。用该法测定MMR中一种疫苗的效力不受其他两种疫苗影响,其结果与常规的蚀斑法和终点稀释法一致。本法避免了常规方法中在试验前必须用高效价特异抗血清中和另两利病毒的程序。作者用Vero细胞株测定麻疹和流行性腮腺炎疫苗病毒效价;用RK13细胞测风疹病毒效价。按10倍或3.16倍连续稀释疫苗病毒,取0.1ml病毒接种到生长于孔经为3.5cm的6孔细胞培养板中的单层细胞内,吸附1小时后,复盖MEM琼脂培养基。Vero细     

反向间接血凝试验应用于乙型脑炎疫苗制备过程中的质量控制

作者将反向间接血凝(RIHA)试验标准化,用来检定生产乙型脑炎(JE)疫苗各阶段的病毒抗原。将JE病毒中山-NIH株脑内接种3～4周龄LACA系小鼠后,收获鼠脑,用PBS配成20%的脑悬液,4600g离心,取上清。然后将沉淀物再配成50%的悬液,重新处理后取上清。两种上清液均用硫酸鱼精蛋白在4℃处理2小时(前者硫酸鱼精蛋白的终浓度     

比较用细胞溶解抗原或重组抗原进行直接结合的抗-HIV ELISA的假阳性反应

为了比较用1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)感染细胞溶解抗原和重组抗原进行的抗-HIV ELISA的假阳性反应,作者在英国Manchester和Lancaster血库对献血者进行了两年的研究。第1年用Du Pont药厂生产的细胞抗原以直接结合试剂进行筛选并对可疑样品进行重试。共测定样品119178份,重复反应率为0.21%。从中选出60份血清与另一相似年龄、性别组的60份正常献血者血清作为对照,用竞争ELISA免疫荧光和直接结合法对细胞抗原生产的试剂进行确证试验。结果除了直     

用聚乙二醇和Ⅰ~(125)标记的A蛋白快速测定含IgG的循环免疫复合物

[Stevens WJ et al:Immunol Letters3(1):1,1981(英文)] 本文报告了用市售制剂快速测定含IgG的循环免疫复合物(CIC)的方法。其操作过程主要为:将血清用PBS(pH7.4)1:1稀释,取100μl与等量的5％的PEG(分子量6,000,溶于PBS中)混合,放4℃1小时,3,000g 4℃沉淀1小时,去上清,加0.5ml 2.5％的PEG(溶于0.1％吐温20 PBS中)混悬,再3,000g     

用蜱传脑炎病毒Skalica株制备疫苗的研究

蜱传脑炎(TBE)病毒Skalica株是从斯洛伐克西部田鼠器官中分离出来的一种热敏感病毒。疫苗用鸡胚细胞制备,收取的病毒液经1120g 10分钟离心澄清,再经55500g 2小时差速离心,去上清,沉淀用1/100体积pH 7.2的等渗PBS稀释,然后,用乙醚处理3次,制备双乙醚(DEE)处理疫苗。此疫苗是一种只保留了抗原有效成份有别于过去全病毒疫苗的新型疫苗。     

酶免疫试验——一种检测麻疹免疫水平的血清学方法

在对人群进行麻疹免疫的流行病学调查中,传统的方法为血凝抑制试验(HI),但因它需使用猴血球而受到一定的限制。近年来,酶免疫试验(EIA)作为一种简便、特异和敏感的方法,在麻疹抗体的检测中也得到了应用。作者用苏联医学科学院病毒制品研究所生产的麻疹抗体EIA试剂盒,同时应用HI方法对曾在5、6年前接种过麻疹疫苗的492名6～8岁儿童进行了检测分析。每次试验中均选用下列血清作对照:1份高及中等滴度麻疹抗体,1份低滴度(1:10)麻疹抗体,1份为阴性。在EIA试验中血清以1:10稀释     

反向间接血凝抑制法检测流行性出血热患者血清特异性抗体

1987年2～5月,我们用反向间接血凝抑制法(RPH I)检测了97份流行性出血热(EHF)患者血清和36份对照血清,并与间接免疫荧光法(IFA)进行比较。现将结果报告如下。材料与方法一、材料:EHF 病毒单克隆抗体(McAb)致敏的羊红细胞,EHF 鼠脑抗原,均由南京军区医科所提供。待检EHF 病人血清、正常人血清及其它血清,分别由本市、县有关医院提供。IFA 法所用EHF Vero-E_6细胞抗原片由本室制备,-30℃干燥保存。羊抗人IgG 荧光素由上海生物制品研究所提供。二、方法:RPHI 法:用稀释液将待检血清0.025ml 在V 型血凝板内以1:8开始作系列稀释,每扎加入经预先滴定的4单位EHF 鼠脑抗原0.025ml,振荡并置37℃30′孵育后加入     

一种新型的蜱传脑炎疫苗人体接种的初步试验包括剂量效应研究

作者用鸡胚细胞繁殖蜱传脑炎病毒(TBEV),通过0.2μm的滤膜过滤,加0.05%福尔马林灭活,用连续蔗糖密度梯度离心法浓缩提纯。浓缩后的TBE抗原用Polygeline稳定并用0.2%Al(OH)_3吸附制成疫苗。将批号为K_289、K_290的两批蜱传脑炎疫苗稀释成5个不同稀释度;每剂量疫苗(0.5ml)含抗原量分别为0.03、0.18、0.35、1.0、3.0μg。用这两批5个稀释度的疫苗随机免疫56名20～50岁的健康男性志愿者,肌肉内接种于三角肌,第28天进行第2次免     

在格陵兰的一个孤岛接种麻疹疫苗后的长期抗体应答

1968年,在未接触过麻疹的格陵兰的斯科斯比松地区500人中,有460人接种了Sch-wartz麻疹减毒活疫苗。在接种前和接种后的16年间,应用IgM、IgA和IgG ELISA以及血凝抑制(HI)试验7次抽样测定麻疹抗体,部份样品用免疫印迹法测定。接种前55份血样无1份有IgM、IgG或HI麻疹抗体。接种后如以IgG和HI的结果判定,血清阳转率为94～100%。对lgM、IgA和IgG ELISA抗体随访了16