红细胞调控白细胞免疫功能新的自然实验研究体系

目的用血液免疫反应路线图实验体系评估红细胞在白细胞免疫活性中的作用。方法将0·3ml血浆加入0·2ml全血细胞悬液(全血细胞组)或0·2ml白细胞悬液(白细胞组)中,37℃温育1h,用免疫酶联法测定IL-8和IL-12水平,流式细胞仪测定白细胞膜CD4、CD8、CD35和CXCR4表达量。结果全血细胞组IL-8和IL-12水平(分别为5·96±4·26、9·84±2·23ρB·pg-1·ml-1)明显低于白细胞组(分别为15·09±9·86、13·59±3·69ρB·pg-1·ml-1,P<0·05),淋巴细胞CD4、CD35、CXCR4表达量(分别为37·79±12·00、154·66±70·00、34·40±20·45)明显高于白细胞组(分别为18·54±11·32、83·26±35·99、16·69±11·09,P<0.01),粒细胞CD35表达量(603·63±257·64)明显高于白细胞组(384·86±174·16,P<0.01)。成人全血细胞组淋巴细胞和粒细胞CD35和CXCR4表达量明显高于脐血全血细胞组(P<0·05或P<0·01)。结论红细胞是白细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞等)免疫功能的调控者和指导者,脐血红细胞免疫调节功能明显下降;本研究为红细胞免疫调控活性测定提供了新的近似自然的方法。     

抗原激活红细胞和白细胞免疫反应主干道的实验研究

目的测定抗原对红细胞和白细胞免疫反应主干道的作用。方法癌细胞(5×106/ml)和(或)卡介苗(0·1mg)或酵母菌(5×108/ml)加到全血细胞悬液0·2ml(或白细胞0·2ml)和枸橼酸抗凝的新鲜血浆0·3ml(或生理盐水0·3ml)37℃温育1h,采用免疫酶联法检测IL-8水平。分组:①抗原(癌细胞或酵母菌或卡介苗)0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;②生理盐水0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;③抗原0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;④生理盐水0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml。结果癌细胞、卡介苗和酵母菌能激活血液免疫反应,但没有加血浆组中,这些抗原不能激活血液免疫反应,在这些抗原加入全血细胞和血浆组,IL-8激活指数(2·124±0·860)明显高于这些抗原加入白细胞和血浆组的IL-8激活指数(0·390±0·080),P<0·01。结论结果表明在血液免疫反中存在红细胞和白细胞免疫反应主干道路线图,红细胞和补体在血液免疫反应路线图中具有重要作用。     

肿瘤患者红细胞调控球蛋白变化新的自然实验体系研究

目的采用血液免疫反应路线图实验体系探讨肿瘤患者红细胞对白细胞分泌球蛋白能力的调控作用。方法将癌细胞悬液(5×106/ml)0·2ml或生理盐水0·2ml加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液(包括红细胞和所有白细胞)0·2ml或白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml中,37℃水浴1h,用OlympusAU100生化测定仪检测球蛋白含量。分组:①全血细胞实验组:癌细胞0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;②全血细胞对照组:生理盐水0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;③白细胞实验组:癌细胞悬液0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;④白细胞对照组:生理盐水0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml。结果肿瘤患者全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·31±0·09)明显低于正常人全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·39±0·14)。肿瘤患者全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白吸附率(0·09±0·08)也明显低于正常人全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白的吸附率(0·29±0·14)。结论血液免疫反应路线图自然实验体系用于测定红细胞对球蛋白的调控作用,方法简便,实用,肿瘤患者红细胞对球蛋白含量的调控能力明显下降。     

IL-8基因-251T/A和+781C/T多态性与南通地区肝癌遗传易感性的关联研究

目的了解南通地区人群白细胞介素8（IL-8）基因启动子区（rs4073）、第1内含子区（rs2227306）位点寡核苷酸多态性（SNP）的分布特点,探讨上述位点各基因型及联合基因型与肝细胞癌（HCC）患病风险的关系,分析各基因型与不同暴露因素在HCC发生中的相互作用。方法采用病例对照研究方法,利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（RFLP-PCR）技术对454例肝癌患者及446名健康对照者IL-8基因-251位点和+781位点进行基因分型。结果①-251位点杂合突变基因型AT者罹患HCC 的风险增加（OR=1.99,95％CI：1.01～3.85）,+781位点突变基因型CT、TT 者罹患HCC 的风险增加（CT基因型OR=1.78,95％CI：1.03～3.10;TT基因型OR=1.36,95％CI：1.01～2.62）。②携带-251、+781两位点AT-CT、TT-CT及AT-CC联合基因型的个体罹患HCC的风险增加（AT-CT联合基因型OR=2.10,95％CI：1.52～2.90;TT-CT 联合基因型 OR=3.33,95％CI：1.01～10.50;AT-CC 联合基因型 OR=3.67,95％CI：2.28～5.90）。③-251位点SNP与饮酒、HBV感染、肝癌家族史因素在HCC的发生中存在正交互作用,该位点SNP与年龄、性别、吸烟因素在HCC的发生中存在负交互作用;+781位点SNP与饮酒、肝癌家族史因素在HCC的发生中存在正交互作用,该位点SNP与年龄、性别、吸烟、HBV感染因素在HCC的发生中存在负交互作用。结论南通地区人群IL-8基因-251、+781位点寡核苷酸多态性与HCC患病风险存在关联,并与不同暴露因素在HCC发生中存在交互作用。     

构建现代系统免疫学新的实验研究体系

1981年Siegel等提出红细胞免疫系统的新概念,1982年郭峰首先发现红细胞能黏附补体包被的酵母菌。郭峰于1986年发现红细胞可黏附补体包被的癌细胞,并于1999年发现1滴血细胞悬液（包括红细胞、白细胞）能黏附补体包被的癌细胞,在各种血细胞黏附癌细胞形成的花环（黏附率）中,红细胞黏附率占99％,而白细胞黏附率只占1％。2001年郭峰发现红细胞促进淋巴细胞CR1天然免疫活性（或T淋巴细胞或NK细胞活性）与红细胞CR1基因密度多态性表达密切相关。2004年郭峰提出“红细胞天然免疫主干道理论”,认为存在血液免疫反应路线图：抗原（如癌细胞或酵母菌等）进入血循环可首先激活血浆中的补体,黏附上C3b等补体成分,然后黏附上红细胞,经处理后,最终黏附上白细胞,激活一系列血液免疫反应。郭峰认为在抗致病原的过程中存在4个要素：抗原、血浆（补体）、红细胞、白细胞。红细胞和补体在血液免疫反应调控中扮演重要的角色。我们构建了“现代免疫学新的实验研究体系”。癌细胞（或酵母菌）是一种抗原性细胞,能激活血液免疫反应,可以建立一种“血液免疫反应路线图”新的实验体系。各种免疫指标的变化（包括黏附率、IL-8、IL-12、CD35、CD44、CD55、CD59、CD4、C138、CD2、CD25、CXCR4、Fy6等）显示癌细胞（如S180）能激活血液免疫反应。因此,在此新的实验系统中,我们可以用许多新的有效的免疫学方法,研究血细胞和血浆之问、红细胞与白细胞之间的内在联系,并为天然免疫和适应性免疫研究及临床免疫治疗提供一种有用的方法。     

ⅢB型前列腺炎患者治疗前后IL-8、IL-10及NGF的变化

目的：探讨ⅢB型前列腺炎患者治疗前后前列腺液（EPS）中白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）及神经生长因子（NGF）的变化和意义。方法：ELISA法检测20例前列腺正常男性及36例临床诊断为ⅢB型前列腺炎患者治疗前后EPS中IL-8、IL-10和NGF水平。结果：治疗前后患者EPS中IL-8、IL-10和NGF水平与正常组比较,有显著性差异。治疗后EPS中IL-8水平较治疗前水平下降,有显著差异。而IL-10和NGF水平与治疗前比较,差异不显著。结论：检测治疗前后前列腺液中IL-8、IL-10和NGF水平有助于了解ⅢB型前列腺炎患者治疗情况。     

外周血IL-6对早期肝癌微波消融后复发的预测

目的 探讨血清中白细胞介素-6(IL-6)和IL-22对早期乙型病毒性肝炎相关肝细胞癌患者(HBV-HCC)微波消融(MWA)治疗后复发的预测作用.方法 收集49例经MWA治疗早期HBV-HCC患者术前外周血,应用ELISA检测外周血IL-6与IL-22的含量,同期30例健康人作对照.据x-tile软件计算cut-off值将IL-6和IL-22水平分为高水平组和低水平组,Kaplan-Meier分析两组的无瘤生存期,Log rank检验差异性,Cox回归筛选影响HBV-HCC复发的危险因素.结果 HCC组的IL-6与IL-22水平明显高于对照组(IL-6:13.20(11.87～15.79) pg/ml和10.47(9.50～13.82) pg/ml,P=0.001;IL-22:42.18(34.39～57.44) pg/ml和25.45(22.31～30.12) pg/ml,P＜0.001).Kaplan-Meier分析显示HCC患者术前低IL-6、高总胆红素和低白蛋白水平预示较短无瘤生存期,IL-22对HCC复发的影响差异无统计学意义.Cox回归多因素分析显示低IL-6(≤13.2 pg/ml,HR:3.721,95％CI:1.674～8.272,P=0.001)与低白蛋白水平(≤41.0 g/L,HR:2.085,95％CI:1.101～3.950,P=0.024)是影响肝癌复发的独立危险因素.结论术前IL-6和白蛋白水平可作为MWA治疗HBV-HCC患者预测复发的指标.     

早期单纯高原肺水肿患者血浆IL-6、IL-8、C3a变化的临床意义

目的:探讨单纯高原肺水肿患者血浆中IL-6、IL-8、C3 a变化的情况,从而了解判断其临床意义。方法:放射免疫法测定进藏后患单纯高原肺水肿的30名患者的血浆中IL-6、IL-8、C3 a,与肺炎人群、对照组(同海拔健康人)IL-6、IL-8、C3 a水平对照分析。结果:单纯高原肺水肿患者血浆IL-6、IL-8水平高于同海拔健康人群,具显著性差别(P<0.01),但明显低于同海拔肺炎人群,差别具有显著性(P<0.01),单纯高原肺水肿患者血浆C3 a水平与高原健康人群差别无显著性(P<0.05),与高原肺炎人群相比差别具有显著性(P<0.01)。结论:单纯高原肺水肿患者血浆IL-8、IL-6、C3 a变化提示早期单纯高原肺水肿患者无明显的C3 a介导的炎症反应,IL-6、IL-8可能介导参与了早期反应,为临床治疗高原肺水肿提供了依据。     

肝炎后肝硬化血清TNF-α、IL-6和IL-8检测的临床意义

目的探讨肝炎后肝硬化患者血清TNF-α、IL-6和IL-8的临床意义。方法 85例肝炎后肝硬化患者采用ELISA双抗体夹心法检测血清TNF-α、IL-6及IL-8水平,根据Child分级分为A（35例）、B（30例）、C（20例）3组,并与正常组（56例）相对照。结果肝炎后肝硬化组血清TNF-α、IL-6和IL-8水平较正常组明显升高（P〈0.01）,A、B、C三组各项指标比较差异显著（P〈0.01）。结论血清TNF-α、IL-6和IL-8水平是反映肝炎后肝硬化肝功损害程度及判断病情预后的重要指标。     

人重组白细胞介素-8(rhIL-8)对受照小鼠抗放作用的实验研究

目的：研究rhIL-8对放射损伤小鼠的保护作用及其机理。方法：在小鼠受照前不同时间予腹腔注射rhIL-8 10μg或30μg,观察动物的存活情况及一些指标。结果：小鼠受照后的存活时间与rhIL-8的给药剂量及时间密切相关。通过检测受照后小鼠的骨髓细胞CUF－GM计数、血清总SOD活性MDA含量以及一些免疫功能指标,提示它们与动物的存活时间有内在联系,结论rhIL-8具有一定的抗放作用,其机理可能与造血调控、免疫调控、清除自由基等多方面有关。     

红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用

目的探讨红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用。方法用淋巴细胞分离液分离健康成人ACD抗凝全血获得淋巴细胞悬液(1×106/ml)和红细胞悬液(1×108/ml),以灭活腹水癌细胞S180(1×106/ml)作为激活抗原,以自体血浆作为反应基质,考察红细胞对淋巴细胞的调控能力,流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD25的表达阳性率。单抗封闭红细胞CD35或EDTA破坏补体,观察淋巴细胞CD25表达的变化。结果CD35单抗封闭后淋巴细胞CD25表达量(18·22%±4·27%)明显降低;EDTA破坏补体后,淋巴细胞CD25表达量(18·79%±3·90%)比ACD抗凝组(23·29%±4·40%)明显降低,与CD35阻断组基本相同,但仍高于Hanks′液对照组(13·19%±2·96%)。结论红细胞CD35和血浆补体对抗原激活淋巴细胞免疫反应起着重要的调控作用;血浆中还存在其他调控淋巴细胞活化的机制。促进红细胞表面CD35分子表达、保持血浆补体活性对提高淋巴细胞免疫活性有着重要意义。     

RhoA蛋白参与调节白介素8诱导的血管内皮细胞迁移

目的研究RhoA蛋白在内皮细胞迁移过程中的作用。方法采用脂质体包绕法将RhoA野生型（RhoAwt）、稳定表达持续活化型（RhoA63L）、主导抑制型（RhoA188A）突变质粒转染进入血管内皮细胞,获得稳定表达的EA.hy926-RhoAwt、EA.hy926-RhoA63L和EA.hy926-RhoA188A细胞。然后,利用Westernblot检测细胞中活性RhoA蛋白含量。最后,利用化学趋化因子IL-8（100ng/ml）分别刺激这3组细胞和对照组细胞,观察细胞迁移情况,并分析细胞迁移与活性RhoA之间的关系。结果1）各组细胞活性RhoA含量较对照组均有变化,EA.hy926-RhoAwt组稍稍升高,EA.hy926-RhoA63L组明显升高,而EA.hy926-RhoA188A组明显降低;2）在IL-8刺激下,EA.hy926-RhoAwt组细胞迁移能力稍高于对照组,EA.hy926-RhoA63L组细胞迁移能力远高于对照组,而EA.hy926-RhoA188A组细胞迁移能力则被明显抑制。因此,在IL-8刺激下,各组细胞迁移能力与细胞活性RhoA蛋白含量正相关。结论RhoA蛋白是IL-8诱导内皮细胞迁移过程中的关键分子,这有助于我们进一步探讨IL-8诱导内皮细胞迁移的理论机制和临床应用。     

流体剪切应力对EA.Hy926细胞IL-8基因表达的影响

目的 探讨流体剪切应力作用下,人内皮细胞株EA.Hy926细胞白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)基因的表达规律.方法 观察体外培养的人内皮细胞株EA.Hy926细胞的生长形态,检测EA.Hy926细胞Ⅷ因子相关抗原以及Weibel-Palade小体的表达情况,并以低剪切应力(0.420 Pa)作用于人内皮细胞株EA.Hy926细胞,定量RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达情况.结果 EA.Hy926细胞在体外生长特性类似于人脐静脉内皮细胞,并表达内皮细胞特征性的Ⅷ因子相关抗原以及Weibel-Palade小体,与未受剪切应力对照组相比,1 h时 IL-8 mRNA表达量明显增加,2 h时IL-8 mRNA表达量至峰值,3 h后随着剪切应力作用时间的延长,IL-8 mRNA表达量逐渐下降.直至实验结束(12 h),IL-8 mRNA表达量仍高于未受应力对照组.不同流体剪切应力水平(0.182、0.420、1.000、1.640 Pa)作用人内皮细胞株EA.Hy926细胞2 h后,IL-8 mRNA 的表达与剪切应力作用强度呈反变关系.结论 流体剪切应力可以诱导人内皮细胞株EA.Hy926细胞表达IL-8,并且这一表达规律与人脐静脉内皮细胞相似,EA.Hy926细胞可作为研究流体剪切应力影响内皮细胞IL-8表达研究的细胞源.     

葛根素对火药烟雾致支气管上皮细胞损伤的防护效应

目的 研究火药烟雾损伤支气管上皮细胞模型中炎性细胞因子IL-8和IL-6的变化,以及葛根素对上述损伤的防护作用.方法 用不同浓度(100、50、25、12.5μg/ml)的葛根素预处理细胞后,建立火药烟雾损伤支气管上皮细胞(BEAS-2B)模型.采用MTT法检测火药烟雾对细胞存活率的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8和IL-6的浓度.结果 以正常对照组细胞存活率作为100％,火药烟雾刺激后,BEAS-2B细胞的存活率下降至48.53％±4.44％,加入葛根素后细胞存活率明显提高,且呈剂量依赖性;细胞培养上清液中IL-8(P＜0.05)、IL-6(P＜0.01)浓度升高.加入葛根素后,IL-8、IL-6浓度逐渐下降(P＜0.05),亦呈浓度依赖性.结论 火药烟雾可致体外培养支气管上皮细胞存活率降低并促进炎性细胞因子IL-8和IL-6分泌,中药葛根素可逆转这种损伤效应.     

不同牙周健康状况血清IL-21和IL-6检测的临床意义

目的探讨不同牙周健康状况者血清白细胞介素21(IL-21)、白细胞介素6(IL-6)水平的变化及其意义。方法选择符合标准的受试者70例,其中正常组,轻度、中度及重度牙周炎组分别为10例,20例,20例,20例;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫法检测受试者血清IL-21与IL-6水平。结果牙周炎组患者血清IL-21和IL-6的表达高于正常组(P<0.05);重度牙周炎组患者血清IL-21和IL-6表达分别高于轻度、中度牙周炎组(P<0.05);血清IL-21、IL-6表达强度与牙周病严重程度的变化呈正相关(r=0.653,P<0.05)。结论检测牙周病患者血清IL-21和IL-6水平的变化对探讨其发病机制、预防和指导用药具有重要的临床价值。     

帕瑞昔布钠超前镇痛对开腹胆囊切除术患者血清IL-6和IL-10的影响

目的评价帕瑞昔布钠(Parecoxib)超前镇痛对患者围术期血浆白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的影响。方法拟在全麻下行开腹胆囊切除术患者60例,随机分为两组,每组30例:对照组(C组)为布托啡诺术后镇痛组,试验组(P组)为帕瑞昔布钠超前镇痛复合布托啡诺术后镇痛组,于麻醉诱导前(T1)、术毕(T2)、术后6 h(T3)、术后12 h(T4)、术后24 h(T5)、术后48 h(T6)采右颈内静脉血,采用酶联免疫吸附法测定血浆IL-6、IL-10浓度。结果 P组T2~T4时IL-6水平升高(P<0.05);与C组比较,P组围术期IL-6水平较低,T3~T4时IL-10较高(P<0.05)。结论帕瑞昔布钠超前镇痛可下调患者血清IL-6水平而促进IL-10的分泌,具有良好的镇痛效应。     

IL-8在强直性脊柱炎活动期的表达与意义

目的 探讨趋化因子IL-8在强直性脊柱炎(AS)活动期的表达及意义。方法 通过cDNA微阵列及RT-PCR技术检测活动期AS患者和对照组[健康志愿者、类风湿关节炎(RA)及膝关节外伤患者]的外周血、关节液中单个核细胞和滑膜细胞IL-8的表达．比较AS患者组与各对照组IL-8表达情况的差异。结果 在活动期AS患者外周血单个核细胞(PBMC)或关节液单个核细胞(SFMC)中IL-8的表达均明显高于健康志愿者PBMC中的表达,在RA患者PBMC中IL-8的表达亦高于健康志愿者PBMC中的表达．关节滑膜细胞IL-8的表达水平在AS患者也明显高于膝关节外伤患者。结论 IL-8在活动期AS中存在高表达,可能是AS的一种重要的炎症介质,介导AS滑膜甚至其他受累组织炎症的发生和发展。     

急性胰腺炎患者血清IL-8、IL-10和血Ca2+水平变化及意义

 目的:通过对急性胰腺炎(AP)发病过程中血清IL-8、IL-10、血Ca2+含量变化,分析其变化规律,判断病情的发展及变化.方法应用ELISA法测定,对52例AP及30例健康对照组(NS)IL-8、IL-10、血Ca2+的水平比较.结果AP患者血清IL-8、儿-10水平明显高于NS组(P＜0.05),在发病第1天,重症胰腺炎(SAP)与轻症胰腺炎(MAP)血清Ca2+水平明显降低,而在AP病程中、后期无明显差异.结论IL-8、IL-10参与了AP发生发展过程,且IL-8、IL-10、血Ca2+水平可以作为AP病情轻重及转归的指标.